一种试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及医疗器械技术领域，本发明专利技术公开了一种试剂盒及其检测方法。该试剂盒包括以下组份：一抗地高辛抗体、二抗鼠抗羊IgG、3H标记羊角拗苷甲、聚乙二醇6000、3H闪烁液、三羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸二钠的混合溶液以及含有或者不含有羊角拗苷甲。本发明专利技术试剂盒冻存后复苏效果极佳，可经解冻复苏后直接使用，反复冻存不影响活性，保存、携带都很方便；此外，试剂盒的操作简单、灵敏度高且特异性强，能够稳定可靠的早期诊断孕期子痫，为之后的治疗提供有利依托。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医疗器械
，具体涉及一种检测孕期先兆子痫或子痫的试剂盒 及其检测方法。
技术介绍
孕期早痫是一种病发原因复杂的综合征，如果不及时治疗，可发展为子痫，危及生 命。主要症状有高血压、蛋白尿，水肿，惊厥，肾功能损伤等，已成为世界上孕妇致死率最高 的一种疾病，目前具体病因不明。有研究证明，胎盘产生的一种导致易感妇女母体血管内皮 功能障碍的物质可能是早痫病发的其中一个原因。血压升高是该疾病最明显的标志，同时 造成对产妇内皮，肾脏和肝脏的损害，并释放血管收缩因子。 早痫在全球孕妇中发病率为6-8 %，通常发病于妊娠二期晚期或妊娠三期，大部分 在孕期32周之后发病（32周前发病被认为是早期发病）。极少数孕妇会在孕期20周发病。 初次怀孕的孕妇发病率最高，并且随着妊娠次数的增加，该疾病发病率大幅度降低。早痫多 发于具有高血压史，糖尿病史，肥胖症史，自身免疫性疾病史如狼疮，和多胎妊娠（双胞胎 或多胞胎）的孕妇中，其发病过程因人而异，大多数病例可以在分娩前被确诊。少数病例在 分娩后六周才被确诊，称为"产后早痫"。确诊后除了剖腹产或引产手术，没有其他治疗方 式。早痫是最常见的的妊娠综合症，同时影响母亲和胎儿，导致早产儿甚至对母婴造成生命 危险。 传统上早痫的确诊标志是孕期高血压（两个独立的至少相隔六小时的测量值，收 缩压为140以上和/或舒张压为90以上）和24小时尿液样本中的蛋白含量高于300毫克 (蛋白尿）。比基线血压（BP)高30毫米汞柱的收缩压或高15毫米汞柱的舒张压，不能达 到140/90的绝对标准，仍然被认为是重要发病信号，但并不能就此确诊。肿胀或水肿（尤 其是在手和脸）最初曾被认为是诊断早痫的一个重要标志，但目前的医学实践证明，只有 高血压和蛋白尿可以作为诊断标准。 虽然早痫是一种致命性疾病，但其早期发病通常无症状。而且一般情况下，早痫的 信号都不是特异性的，比如孕期惊厥，在怀孕过程中，其他原因比子痫更容易导致惊厥。因 此早痫的早期诊断一直是医学界无法攻克的一个难题。 在早痫病人的症状中，一种钠钾栗抑制因子-内源性洋地黄样因子（endogenous digitalis-like factor，EDLF)水平的升高，是早痫的重要标志。这种因子能够导致血压 升高，存在于人体和动物组织及体液中，其化学结构和生物活性与植物洋地黄中提取的类 固醇强心剂相似，故名"洋地黄样因子"。此因子能够以与地高辛等强心剂类似的机制结合 到钠钾栗上，并抑制其活性。 为了实现对妊娠早痫的早期诊断，达到早期治疗的目的，需要以地高辛抗体作为 工具，开发一种可以特异性精确测量样品中内源性洋地黄样因子的方法，并制成操作简便 快捷的试剂盒。CN 103439492 B提供了一种试剂盒，包括：一抗地高辛抗体12微克/毫升、 二抗鼠抗羊1865父107摩尔/升、3!1标记羊角拗苷甲为10(^/臟 〇1、浓度为20%聚乙二醇 6000水溶液、pH = 7. 4的磷酸缓冲液、3H闪烁液；含有或者不含有羊角拗苷甲。该试剂盒 具有操作简单方便、灵敏度高、特异性强等优点，并且能够稳定可靠的早期诊断孕期子痫， 为之后的治疗提供有利依托。然而，由于其活性成分为蛋白质类的抗体，不能反复冻存，对 此试剂盒的保存和携带带来了极大的障碍，严重影响其推广和应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种冻存后复苏效果极佳，可经解冻复苏后直接使用，且 操作简单方便、灵敏度高、特异性强，能够稳定可靠的早期诊断孕期子痫的试剂盒及其检测 方法。 为达到以上目的，本专利技术采用如下技术方案： 本专利技术所述的早痫为先兆子痫。 第一方面，本专利技术提供一种试剂盒，其包括以下组份： -抗地高辛抗体、 二抗鼠抗羊IgG、 3H标记羊角拗苷甲、 三羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸二钠的混合溶液、 聚乙二醇6000水溶液、 3!1闪烁液；和 含有或不含有羊角拗苷甲。 其中，不含有羊角拗苷甲的试剂盒，可以按照标准曲线的绘制方法，制备标准曲线 后，加入试剂盒说明书中，使用试剂盒人员可以按照标准曲线计算内源性洋地黄因子的浓 度。本专利技术中的组分混合后，可以起到良好的冻存后复苏效果，可经解冻复苏后直接使用， 而且可以反复冻存而不影响其使用。由于本专利技术的主要原料为抗体类物质，属于有活性的 蛋白质；在一般条件下进行反复冻存会使蛋白质易于产生冰晶，聚集而失去活性，形成沉 淀；与现有技术不同的是，本专利技术特别添加了三羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸二钠，由于 分子间氢键和共价键的作用，使反复冻融后蛋白的疏水氨基酸残基不被暴露而包覆于溶液 分子的间隙内部，因此不会聚合形成蛋白沉淀，不会产生变性的现象。另外，由于三羟甲基 氨基甲烷和乙二胺四乙酸二钠形成的包覆层具有间隙，因此抗体可以与抗原接触，不影响 其作用的发挥。 优选地，所述一抗地高辛抗体的浓度为5-15微克/毫升，例如可以是5微克/毫 升、6微克/毫升、7微克/毫升、8微克/毫升、9微克/毫升、10微克/毫升、11微克/晕 升、12微克/_升、13微克/毫升、14微克/毫升或15微克/毫升。 优选地，所述二抗鼠抗羊IgG的浓度为4-8X10 7摩尔/升，例如可以是4X10 7 摩尔/升、4.5X10 7摩尔/升、5X10 7摩尔/升、5.5X10 7摩尔/升、6X10 7摩尔/升、 6. 5X10 7摩尔/升、7X10 7摩尔/升、7. 5X10 7摩尔/升或X 10 7摩尔/升。 优选地，所述3H标记羊角拗苷甲的浓度为7-17Ci/mmol，例如可以是7Ci/mmol、 8Ci/mmol、9Ci/mmol、1OCi/mmol、11Ci/mmol .12Ci/mmol、13Ci/mmol、14Ci/mmol、15Ci/ mmol、16Ci/mmol 或 17Ci/mmol〇 优选地，所述混合溶液中三羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸二钠的质量比为I : (0· 25-0. 75)，例如可以是 I :0· 25、1 :0· 3、1 :0· 35、1 :0· 4、1 :0· 45、1 :0· 5、1 :0· 55、1 :0· 6、 1 :0. 65、I :0.7或1 :0. 75。所述三羟甲基氨基甲烷的质量分数为13-28%，例如可以是 13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27% 或 28%〇 优选地，所述聚乙二醇6000水溶液的质量分数为15-30%，例如可以是15%、 16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29% 或 30%。 其中，所述一抗地高辛抗体的优选浓度为12 μ g/mL，制备方法为取0. 12mg地高辛抗体，溶 于IOmL去离子水中，轻轻混合均匀，避免使用搅拌器。所述聚乙二醇6000水溶液的优选浓 度为20%，制备方法为取20mg PEG6000,置于IOOmL去离子水中，用搅拌器充分搅拌，使固 体溶解，充分混匀。所述作为参照的非放射性3H标记羊角拗苷甲标准品的优选浓度梯度分 别为 2nM，5nM，10nM，20nM，50nM，0· IM 及 0· 2M。 本专利技术所述的nM为纳摩尔/升；本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种试剂盒，其特征在于，包括以下组份：一抗地高辛抗体、二抗鼠抗羊IgG、3H标记羊角拗苷甲、三羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸二钠的混合溶液、聚乙二醇6000水溶液、3H闪烁液；和含有或者不含有羊角拗苷甲。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：缪建良，
申请(专利权)人：无锡市长安曙光手套厂，
类型：发明
国别省市：江苏;32