一种荧光定量的测量方法技术

本发明专利技术属于化学测量技术领域，公开了一种荧光定量的测量方法，本发明专利技术所述荧光定量的测量方法在同样的条件下，分别测量反应液所产生的荧光强度I0和待测样品液与反应液混合后所产生的荧光强度I；由反应液所产生的荧光强度I0和待测样品液所产生的荧光强度I计算出待测样品液真实浓度C，其中I/I0＝KC，K为荧光系数。本发明专利技术所述荧光定量的测量方法中所述反应液所产生的荧光强度I0的测量和待测样品液与反应液混合后所产生的荧光强度I的测量均在同样的环境中进行，可以减少光源衰减与环境温度的影响，同时无需设立空白样或对照样。而且本发明专利技术所述测量方法操作简单，样本不需要进行任何处理，对仪器的要求低，简易的荧光仪即可完成测量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于化学测量
，具体涉及，尤其是涉及 一种降低光源衰减与环境温度的影响的荧光定量的测量方法。
技术介绍
P0CT，即时检验（point-of-care testing)，指在病人旁边进行的临床检测，通常 不一定是临床检验师来进行，是在采样现场即刻进行分析，省去标本在实验室检验时的复 杂处理程序，快速得到检验结果的一类新方法。尽管POCT的提法在90年代才开始出现，实 际上在70年代，随着重症监护医学的发展，对于POCT的需求就出现了。止凝血检验中，临 床医生对快速报告与结果可靠的要求非常迫切，急诊或者围手术期出血时，实验室的平均 周转时间（TAT)大约在45-90min，一般标准化实验室的时间大约比POCT长1.5h。POCT和 实验室检测凝血机能时，标本处理和准备方式是有明显差别的。POCT操作简便而且能够快 速检出结果，因此，这种需求为POCT在止凝血检验中的应用打开了大门。POCT测定不需要 血样送检，无需等待报告，可以很快给患者调整用药剂量。POCT节省的时间可以产生一些无 形价值，特别是在监护室和手术室中，手术时间的长短，处置的多少，时间往往意味着节约 就医成本，而且在止血血栓检验中还能减少不必要的输血，优势明显 荧光定量测试是POCT中最常用的一种测量方法。其中一种荧光定量测量方法是 直接以绝对荧光强度进行换算，其理论依据为荧光强度F正比于吸收的光量I a和荧光量子 效率,. 由朗-比耳定量：Ia= 1。（1_10 浓度很低时（ε Ic彡0. 05)，将括号近似处理后： K为荧光系数（与物质性质、激发波长、发射波长、溶剂、温度有关）。 从上述公式中可知，荧光强度与物质浓度呈正比关系，但前提是除了浓度低外，也 需要保证IJ激发光强度）是固定的，即每次的激发光的强度是一致的。但是，实际的检测 仪，尤其是POCT类的产品，很难保证光源不发生衰减，当光源衰减时，测试就会出现明显偏 差。因此，在实际的产品应用中，直接以绝对荧光强度与浓度建立的标准曲线，测试结果不 可靠。 因此，在利用荧光定量测试时，为了提高结果的准确性，会使用到另外一种标准曲 线的建立方法，以先测试空白溶液的荧光值，以绝对荧光值扣除空白值（差值），以差值与 浓度建立标准方程，但是该方法虽然一定程度上，减少了光源衰减的影响，但是需要每次测 试时，测试空白样本的荧光值，明显增加成本和使用者的工作量，这在实际的POCT产品中 并不易实现。 另一种荧光定量测量的方法称为比较法，取已知量的荧光物质配成一标准溶液， 测定其荧光强度。然后在同样条件下测定试样溶液的荧光强度，由标准溶液的浓度和两个 溶液的荧光强度的比值求得试样中荧光物质的含量。由于标准样本与试样均在同样条件下 进行测试，所以光源衰减与环境温度的影响可以减少，但是，每次测试时，均需要进行标准 溶液的测定，因此同样在POCT产品中不易实现。 由此可见，现有荧光定量方法存在以下问题：1)如果直接以绝对荧光强度进行换 算，则容易受光源衰减与环境温度影响；2)利用比较法或荧光强度差值进行换算时，均需 要进行对照组的测定；3)利用绝对荧光强度法或比较法进行换算时，均需要空白溶液试剂 卡（或标准溶液试剂卡）和待测样品试剂卡两种试剂卡，在检测时需要先后将空白溶液试 剂卡（或标准溶液试剂卡）和待测样品试剂卡放入仪器内检测，需要手动更换试剂卡，操作 复杂，检测时间长，检测效率低。因此，现有荧光定量方法在POCT产品上不方便应用。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供，本专利技术所述，在不设 置对照组的前提下进行荧光定量测试，可以减少光源衰减以及环境温度的干扰。 为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案。 -种焚光定量的测量方法，包括： a、对反应液进行检测，获得反应液的荧光强度I。； b、将待测样品加入到反应液中混合，得到待测液，对所述待测液进行检测，获得待 测液的荧光强度I ; C、根据反应液的荧光强度I。和待测液的荧光强度I获得待测样品的浓度。 本专利技术所述荧光定量的测量方法中所述反应液所产生的荧光强度I。的测量和待 测液所产生的荧光强度I的测量均在同样的环境中进行，因此，可以减少光源衰减与环境 温度的影响。相比于之前的方法，该方法整个步骤均可以直接由仪器完成，而无需设立空白 样或者对照样。 在一些优选实施方案中，本专利技术所述荧光定量的测量方法，步骤c具体按照以下 公式计算待测样品浓度C : I/I0= KC， 其中，K为荧光系数。 在一些实施方案中，在测量反应液所产生的荧光强度之前还包括测量荧光仪空白 荧光强度I a的步骤。在同样的环境中测量荧光仪空白荧光强度I a，可以减少杂散光干扰对 荧光定量测量的影响。荧光仪空白荧光强度13的测量具体为在反应液未放入荧光仪之前， 使荧光仪运行检测一次可获得。 在一些实施方案中，本专利技术所述荧光定量的测量方法包括测量荧光仪空白荧光强 度Ia的步骤，其步骤c为根据荧光仪空白荧光强度I a、反应液的荧光强度I。和待测液的荧 光强度I获得待测样品的浓度。 在一些优选实施方案中，本专利技术所述荧光定量的测量方法，步骤c具体按照以下 公式计算待测样品浓度C : (I-Ia)/(I0-Ia) =KC, 其中，K为荧光系数。 在一些实施方案中，本专利技术所述荧光定量的测量方法中所述反应液由荧光染料和 缓冲液组成。 在一些待测样品中，所述反应液不稳定，不利于长期储存，因此，可在反应前现配 置反应液。如检测尿微量白蛋白的荧光定量的测量方法，荧光染料白蛋白蓝与缓冲液3-吗 啉丙磺酸缓冲液混合后不稳定，不利于长期储存。因此在检测时将荧光染料加入缓冲液混 合得到反应液，测量所述反应液所产生的绝对荧光强度I。，然后将待测尿液样品加入反应 液中测量待测样品液与反应液混合后所产生的绝对荧光强度I，计算得到待测尿液样品真 实浓度C。 按照本专利技术，所述即时检验的待测样品并无特殊的限制，可以为本领域技术人员 熟知的任意一种可以用于即时检验的检测物。本专利技术中所述待测样品可以为水相溶液、有 机相溶液、汗液、唾液、尿液、血液或其他组织液等。优选为尿液、血液。 在一些实施方案中，所述待测样品为尿液，所述荧光染料为白蛋白蓝，所述缓冲液 为3-吗啉丙磺酸缓冲液，所述检测激发波长为580nm、发射波长为616nm。 本专利技术还提供了所述荧光定量的测量方法在即时检验中的应用。 由上述技术方案可知，本专利技术提供了具体为对反应液进 行检测，获得反应液的荧光强度U将待测样品加入到反应液中混合，得到待测液，对所述 待测液进行检测，获得待测液的荧光强度I ;根据反应液的荧光强度Ic和待测液的荧光强 度I获得待测样品的浓度。本专利技术所述荧光定量的测量方法中所述反应液所产生的荧光强 度Ic的测量和待测液所产生的荧光强度I的测量均在同样的环境中进行，可以减少光源衰 减与环境温度的影响，同时无需设立空白样或者对照样。而且本专利技术所述当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种荧光定量的测量方法，包括：a、对反应液进行检测，获得反应液的荧光强度I0；b、将待测样品加入到反应液中混合，得到待测液，对所述待测液进行检测，获得待测液的荧光强度I；c、根据反应液的荧光强度I0和待测液的荧光强度I获得待测样品的浓度。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：戴斌，李宗祥，
申请(专利权)人：三诺生物传感股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43