本发明专利技术公开了一种蒽醌类化合物的制备方法及其作为受体酪氨酸激酶抑制剂的应用。采用微生物发酵方法获得发酵基质；然后用乙酸乙酯萃取发酵基质，过滤去除不溶物，浓缩乙酸乙酯获得发酵产物浸膏；浸膏经色谱分离，浓缩洗脱液得蒽醌类物质。本发明专利技术从微生物中获得的蒽醌类化合物具有表皮生长因子受体（EGFR）、血管内皮细胞生长因子受体（VEGFR-1）和肝细胞生长因子受体（c-Met）抑制活性，该类化合物可用于新型受体酪氨酸激酶抑制剂的开发与制备，可进一步研制开发为新型靶点的抗肿瘤药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术具体涉及一种蒽醌类化合物、制备方法及其作为受体酪氨酸激酶抑制剂的 应用以及抗肿瘤药物的研制。属于生物工程和药物化合物领域。
技术介绍
受体酪氨酸激酶（receptortyrosinekinase,RTKs)是最大的一类酶联受体，它既 是受体，又是酶，能够同配体结合，并将靶蛋白的酪氨酸残基磷酸化。受体酪氨酸激酶的胞 外区是结合配体结构域，配体是可溶性或膜结合的多肽或蛋白类激素，包括胰岛素和多种 生长因子。胞内段是酪氨酸蛋白激酶的催化部位，并具有自磷酸化位点。配体在胞外与受 体结合并引起构象变化，导致受体二聚化形成同源或异源二聚体，在二聚体内彼此相互磷 酸化胞内段酪氨酸残基，激活受体本身的酪氨酸蛋白激酶活性。 目前与发现50多种不同的受体酪氨酸激酶，主要的几种类型包括：表皮生长因 子（epidermalgrowthfactor,EGF)受体、血小板生长因子（platelet-derivedgrowth factor,F*DGF)受体和巨卩策细胞集落刺激生长因子（macrophagecolonystimulating factor,M-CSF)、岛素和膜岛素样生长因子-10(insulinandinsulin-likegrowth factor-1,IGF-1)受体、神经生长因子（nervegrowthfactor,NGF)受体、成纤维细胞生长 因子（fibroblastgrowthfactor,FGF)受体、血管内皮生长因子（vascularendothelial growthfactor,VEGF)受体和肝细胞生长因子（hepatocytegrowthfactor,HGF)受体等。 其中表皮生长因子受体（EGFR)、血管内皮细胞生长因子受体（VEGFR-1)和肝细胞生长因子 受体（c-Met)是3种重要的受体酪氨酸激酶，在多种肿瘤细胞中过度表达，现已证实是极有 希望的抗肿瘤药物分子靶点。本专利技术提供了一种蒽醌类化合物作为这3种受体酪氨酸激酶 抑制剂应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种蒽醌类化合物的制备方法及其作为表皮生长因子受 体伍6?幻、血管内皮细胞生长因子受体（￥￡6?1?-1)和肝细胞生长因子受体（(3^的)3种重要 的受体酪氨酸激酶抑制剂的应用。 所述的蒽醌类化合物包括如下如下结构式的化合物，即式（1)-式（8): 本专利技术还提供一种蒽醌类化合物的制备方法，包括： (1)将活化后的斜面菌种在无菌操作环境下，用接种针划取0. 5cmX0. 5cm的菌块 接种于装有l〇〇mL马铃薯液体培养基（PDB)的种子摇瓶中，置于转速为120r/min的恒温振 荡器中，在28°C下恒温培养4天，得到种子液。 (2)将液体种子接种于装有发酵培养基的500mL的三角瓶中培养；培养基质用有 机溶剂提取，合并提取液，减压浓缩，即为菌体固体发酵的粗提物。 (3)粗提物经色谱分离获得蒽醌类化合物。 所述步骤（1)中的微生物为Nigrosporasp.BM2,分离自宜昌市禾本科植物斑茅 (SaccharumarundinaceumRetz. )〇 所述步骤⑴中的斜面培养基为马铃薯琼脂培养基（PDA)，即将200g/L的去皮土 豆浆液与20g/L的葡萄糖和20g/L琼脂经热溶混匀制得，pH自然。 所述步骤⑴中的种子培养基为马铃薯液体培养基（PDB)，即将200g/L的去皮土 豆浆液与20g/L的葡萄糖经混合后制得，pH自然。 所述步骤⑵中最优发酵培养基组成为葡萄糖20.0g/L，酵母8.0g/L，无水 MgS040 . 05%，KH2P040 . 01%，NaCl0. 5% ;置于转速为 120r/min的恒温振荡器中，在 28°C下 恒温培养9天。采用该方法得到的化合物式1的最大产量为86. 25±7. 23mg/L。 所述步骤⑵中的大米培养基，即500mL三角瓶，每瓶40g大米，80mL自来水，pH 自然，25°C静置培养20天。 所述步骤（2)中液体发酵基质提取方法为，发酵液过滤去除菌丝体，用乙酸乙酯 萃取，合并萃取液，减压浓缩，即为菌体液体发酵的粗提物。 所述步骤⑵中固体发酵基质提取方法为，固体发酵基质于40°C烘箱内烘干后用 氯仿甲醇1 :1混合液回流提取3次，合并提取液，减压浓缩，即为菌体固体发酵的粗提物。 所述步骤（3)中色谱分离手段包括重结晶、硅胶柱层析、C18柱层析、S印hadexLH-20凝胶 柱层析、半制备色谱柱系统（COSMOSIL5ym，10X250mm)，洗脱溶剂包括，丙酮、石油醚、乙 酸乙酯、甲醇、氯仿、色谱级乙腈、色谱级甲醇、去离子水。 本专利技术的蒽醌类化合物对表皮生长因子受体（EGFR)、血管内皮细胞生长因子受体 (VEGFR-1)和肝细胞生长因子受体（c-Met)3种重要的受体酪氨酸激酶具有抑制作用，可用 于制备体酪氨酸激酶抑制剂或更进一步用于抗肿瘤药物的研制。 与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：化合物式1来源于微生物发酵产物， 其制备可通过发酵液粗提取物重结晶获得，产量高，可工业化应用；由化合物式1作为起始 化学原料，可以通过国化学合成方法获取一系列类似物，进行候选药物化合物筛选。【附图说明】 图1为实施例1中微生物Nigrosporasp.BM2在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA) 和优化后的发酵培养基中生长状态。图1-A为微生物在PDA培养基生长的正面形态；图1-B 为微生物在PDA培养基生长的背面形态；图1-C为微生物在优化后的发酵培养基中的生长 形态。上述形态描述均为肉眼观察。图2为实施例1中精制的化合物式1。 图3为实施例2在同等条件培养下，优化后的培养基和PDB培养基Bostrycin产 量以及生物量的变化趋势。优化后的培养基（ :B〇strycin，▲:生物量），PDB培养基 (□ :Bostrycin，A:生物量）（n= 3)。【具体实施方式】 下述试验和实施例用于进一步说明但不限于本专利技术。一种蒽醌类化合物的制备方 法及其作为受体酪氨酸激酶抑制剂的应用，实施过程如下： 实施例1 本专利技术的蒽醌类化合物，可以从微生物Nigrosporasp.BM2发酵基质中分离得 至丨J。微生物Nigrosporasp.BM2分离自宜昌市禾本科植物斑茅（Saccharumarundinaceum Retz.)叶片。 具体步骤如下： 1?种子培养 (1)配置种子培养基：将200g去皮土豆切成小块，加适量水煮沸30min，用纱布过 滤，滤液中加入葡萄糖20g，自来水定容1L，平均分装于10个250mL的锥形瓶中（约100mL/l 个锥形瓶），在121°C下灭菌20min。 (2)种子培养：将活化后的斜面菌种Nigrosporasp.BM2在无菌操作环境下，用接 种针划取〇.5cmX0. 5cm的菌块接入种子摇瓶中，置于转速为120r/min的恒温振荡器上，在 28°C下恒温培养4天，得到种子液。 2?发酵培养 (1)配置发酵培养基：将8000g去皮土豆切成小块，加适量水煮沸30min，用纱布 过滤，滤液中加入葡萄糖800g，自来水定容40L，平均分装于200个500mL的锥形瓶中（约 200mL/l个锥形瓶），在121°C下灭菌20min。 (2)发酵培本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种蒽醌类化合物，其特征在于，包括如下结构式的化合物，即式(1)‑式(8)：
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邓张双，邹坤，张宏岐，陈剑锋，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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