本发明专利技术提供能够促进培养细胞中的HCV颗粒形成的HCV颗粒形成促进剂，进而提供一种HCV颗粒产生增强方法；另外提供一种抗HCV药物候选物质的评价方法和HCV疫苗的制造方法；本发明专利技术的HCV颗粒形成促进剂以抑制素或其药学上可接受的盐作为活性组分；通过将抑制素或其药学上可接受的盐添加至HCV感染培养细胞中，能够促进感染性HCV颗粒的形成、以及增强产生；另外，通过在该HCV颗粒形成促进剂和抗HCV药物候选物质的存在下培养HCV感染细胞，能够对抗HCV药物候选物质进行评价；进而，使用通过HCV颗粒产生增强方法产生的HCV颗粒而制造HCV疫苗。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术设及一种促进C型肝炎病毒（HCV:胎patitisCVirus)感染培养细胞中的 HCV颗粒形成的HCV颗粒形成促进剂和HCV颗粒产生增强方法。 本申请要求通过参考而援引于此的日本申请特愿2012-215474号作为优先权。
技术介绍
自1989年克隆出HCV基因之后，使培养细胞感染C型肝炎患者血清中的HCV从而 制作病毒增殖细胞系的方法的建立便成为HCV研究的最大课题。 全世界有2亿HCV携带者，在日本国内也有约200万人。HCV感染者患上慢性肝炎 的概率非常高，一部分患者的慢性肝炎会进一步发展成肝硬化、肝癌。目P，HCV是引起重症 疾病的诱因病毒。目前，大多数C型肝炎患者大多采用同时使用干扰素（IFN)和作为抗病 毒药的利己韦林巧ibavirin)的治疗方法。但是，HCV感染者中有很多属于IFN难W发挥 作用的类型，上述治疗方法存在治疗效果低运一问题。另外，众所周知，IFN会对患者产生 很强的副作用。因此，用于防止HCV的感染扩大W及消灭HCV的新型治疗药和新型疫苗的 开发已成为当务之急。 另一方面，HCV的感染性克隆在动物实验等级中仅在移植了黑猩猩或人类肝细胞 的嵌合体小鼠（chimeramouse)中可W增殖，但还未从患者的检体中获得容易感染培养细 胞的病毒，而且，因为伦理问题和成本方面的原因，黑猩猩的利用毫无进展，很难对于研究 做出贡献。有报告称制作出了能够将HCV的亚基因组复制到培养细胞中并使其增殖的HCV 亚基因组RNA复制子系统（非专利文献1~4、专利文献1、2)。由此，能够利用培养细胞来 分析HCV的复制机制。上述HCV亚基因组RNA复制子是利用新霉素抗性基因W及连接在其 下游的EMCV-IRES取代位于HCV基因组RNA的5'非翻译区中的HCVIRES下游的结构蛋白 的编码区而获得的。通过将该RNA复制子导入人肝癌细胞化h7中，并在新霉素存在下进行 培养，RNA复制子在化h7细胞内自主复制，运已得到证明。 之后，有报告称制成了HCV的全基因组RNA自主复制的HCV全基因组RNA复制子， 还制成了反映HCV的生命周期（从病毒吸附、侵入到形成病毒颗粒和释放到细胞外）的感 染增殖系统（非专利文献5~7)。为了更加高效地开发疫苗等，期待开发出能够更加高效 地在感染细胞内形成HCV颗粒W及将其释放到细胞外的系统。 【现有技术文献】 【非专利文献】非专利文献1 :Science，285 :110-113,1999 非专利文献2 :Science，290 :1972-74,2000 非专利文献3 :J. Virol.，75 :12047-57,2001 非专利文献4 :Gastroenterology，125 :1808-17, 2003非专利文献5 :Nat. Med.，11 :791-796,2005 非专利文献6 :Science，309 :623-626, 2005 非专利文献7 :Proc.化tl. Acad. Sci. USA, 102 :9294-9299, 2005 【专利文献】 阳00引专利文献1:日本公报、特开2001-17187号 专利文献2:国际公开小册W02004/104198A1
技术实现思路
本专利技术的课题在于提供一种能够促进培养细胞中的HCV颗粒的形成的HCV颗粒形 成促进剂，进而，本专利技术的课题在于提供一种HCV颗粒产生增强方法。另外，本专利技术的课题 在于提供一种抗HCV药物候选物质的评价方法和HCV疫苗的制造方法。 本专利技术人等为解决上述课题而进行了认真研究后发现，抑制素（statin)或其药 学上可接受的盐能够有效地促进HCV颗粒的形成，从而完成了本专利技术中有关HCV颗粒形成 促进剂的专利技术。另外，发现通过在该HCV颗粒形成促进剂和抗HCV药物候选物质的存在下 培养HCV感染细胞，能够对抗HCV药物候选物质进行评价，从而也完成了有关抗HCV药物候 选物质的评价方法的本专利技术。进而，发现利用通过HCV颗粒产生增强方法产生的HCV颗粒 能够制造HCV疫苗，从而完成了有关HCV疫苗的制造方法的本专利技术。 W11]旨P，本专利技术由W下内容构成。 1. 一种HCV颗粒形成促进剂，其作为活性组分而含有抑制素或其药学上可接受的盐。 2. 如上述1所述的HCV颗粒形成促进剂，其中，所述抑制素是选自由洛伐他汀、氣伐他 汀、辛伐他汀、阿托伐他汀W及普伐他汀组成的群中的一种或多种抑制素。 3. 如上述1或2所述的HCV颗粒形成促进剂，其中，含有能够产生抑制素或其药学上可 接受的盐的微生物的培养提取物。 4. 如上述3所述的HCV颗粒形成促进剂，其中，所述微生物为曲霉属丝状真菌。 5. -种HCV颗粒产生增强方法，其是在上述1~4中任一项所述的HCV颗粒形成促进 剂的存在下培养HCV感染细胞。 6. 如上述5所述的HCV颗粒产生增强方法，其中，在所述HCV感染细胞内形成HCV蛋白 质后，添加上述1~4中任一项所述的HCV颗粒形成促进剂进行培养。 7. -种肥V疫苗的制造方法，其通过使肥V失活而进行制造，该肥V通过上述5或6所 述的HCV颗粒产生增强方法进行产生。 8. -种肥V疫苗，其根据上述7所述的制造方法进行制造。 9. 一种抗HCV药物候选物质的评价方法，其是在上述1~4中任一项所述的HCV颗粒 形成促进剂的存在下，将HCV感染细胞与抗HCV药物候选物质一同进行培养，从而对阻碍 HCV颗粒的形成的强度进行评价。 10. 如上述9所述的抗HCV药物候选物质的评价方法，其包括W下工序： 1) 将上述1~4中任一项所述的HCV颗粒形成促进剂和抗HCV药物候选物质添加至 HCV感染细胞中的工序； 2) 对HCV感染细胞进行培养的培养工序； 3) 测量出培养后的HCV颗粒的数量，从而对阻碍HCV颗粒的形成的强度进行评价的评 价工序。 (专利技术效果） 通过利用本专利技术的HCV颗粒形成促进剂来培养HCV感染细胞，能够促进HCV颗粒 的形成，从而提高HCV颗粒的产生效率。根据本专利技术的方法，能够增加HCV感染培养细胞中 的HCV颗粒的产生，并且能够对抗HCV药物候选物质进行评价。进而，使用通过本专利技术得到 的HCV颗粒，能够高效地产生HCV疫苗。【附图说明】 图1是表示作为制造本专利技术的HCV颗粒形成促进剂的一例，从±曲霉的菌体提取 物进行纯化的流程的图。其中，示出了各纯化工序中的各溶液的半抑制浓度（ICJ和半数 细胞毒性浓度（CCJ。（实施例1) 图2是表示将本专利技术的HCV颗粒形成促进剂添加至培养细胞中时的病毒滴度的测定结 果的图。（实施例2) 图3是表示向HCV感染后的培养细胞添加HCV颗粒形成促进剂的时期的研究结果的 图。（实施例3) 图4是表示向HCV感染后的培养细胞添加HCV颗粒形成促进剂的时期的研究结果的 图。（实施例4) 图5是表示将本专利技术的HCV颗粒形成促进剂添加至培养细胞中时在细胞内外形成的病 毒颗粒的测定结果的图。（实施例5) 图6是表示将本专利技术的HCV颗粒形成促进剂添加至培养细胞中时细胞内的RNA拷贝数 的测定结果的图。（实施例6) 图7是表示通过免疫染色而确认将本专利技术的HCV颗粒形成促进剂添加至培养细胞中时 细胞内的蛋白质形成能力的结果的图。（实施例6)【具体本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种C型肝炎病毒颗粒形成促进剂，其特征在于，作为活性组分而含有抑制素或其药学上可接受的盐。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：堀田博，青木千惠，胁田隆字，S普拉蒂维，S拉特纳，H鲁克曼，K利奥纳杜斯，
申请(专利权)人：国立大学法人神户大学，东丽株式会社，公益财团法人东京都医学综合研究所，印度尼西亚大学，印度尼西亚科学院LIPI，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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