本发明专利技术公开了一种复杂基质中二溴氯丙烷残留量的GC-MS/MS检测方法，其特征在于，包括提取、净化、标准工作溶液的配制和气相色谱串联质谱法（GC-MS/MS）测定，采用固相萃取前处理技术与气相色谱串联质谱（GC-MS/MS）结合的方法，实现了动物源性食品中二溴氯丙烷的定性确证和定量检测。快速简便、采用乙酸乙酯、乙腈作为溶剂，毒性小。检出限低至1.15ug/kg，所以灵敏度高。回收率90.57-95.13%，所以选择性强。相对标准偏差2.37-3.71%，所以重现性好。有效的去除了基质的干扰，适用于各种动物源性食品中二溴氯丙烷的检测。
【技术实现步骤摘要】
一种复杂基质中二溴氯丙烷残留量的GC-MS/MS检测方法
本专利技术涉及一种二溴氯丙烷残留量的检测方法，更具体地说，涉及一种采用气相色谱-串联质谱法（GC-MS/MS）定性定量测定动物源性食品等复杂基质中二溴氯丙烷残留量的方法，属于农药残留的检测
技术介绍
二溴氯丙烷，俗称黑药，学名1，2-二溴-3-氯丙烷，英文名称1，2-Dibromo-3-chloropropane（简称：DBCP），CAS号为96-12-8，分子量236.3328，结构式为：二溴氯丙烷是液态熏蒸性杀线虫剂的活性成份。它是一种农业上使用的土壤熏蒸剂，适用于蔬菜、花卉、烟草、草莓等作物的苗床和温室大棚的熏蒸，防治根结线虫、孢囊线虫、短体线虫、螺旋线虫、纽带线虫、矮化线虫等。众多研究表明二溴氯丙烷对人体有剧毒，具有高残留、致畸、致不育的特点。在发现它对人类健康造成不良影响之后，此化合物于1979年被禁止及限制使用。但仍有不法分子为取得高效的种植效果，暗地使用该农药，为社会留下不少隐患。国内外对动物源性食品中二溴氯丙烷的检测研究尚未见开展。已有的关于二溴氯丙烷的检测主要集中在上世纪80年代，且仅仅是针对花生和粮食上的二溴氯丙烷，采用气相色谱技术进行其残留量检测，但前处理手段落后、过程繁琐、检测效率低，且溶剂多为毒性较大的苯、乙烷、浓硫酸等，对人体有较大危害。另外，气相色谱技术无法克服基质干扰、假阳性等问题，不能进行复杂基质中二溴氯丙烷的检测，限制了其使用范围。因此，迫切需要建立一种操作简单、回收率高、重复性好、检出限低、选择性好的方法，适用于动物源性食品等复杂基质中二溴氯丙烷的检测。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是针对以上不足，首次提供一种复杂基质中二溴氯丙烷残留量的GC-MS/MS检测方法，克服传统技术检测步骤繁琐、溶剂毒性较大、灵敏度低、回收率低、重现性差、不适用于动物源性食品等复杂基质的缺陷，采用本专利技术方法，具有快速简便、溶剂毒性小、灵敏度高、选择性强、重现性好，适用于各种动物源性食品中二溴氯丙烷检测的优点。为解决以上问题，本专利技术采取以下技术方案：一种复杂基质中二溴氯丙烷残留量的GC-MS/MS检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）提取：称取粉碎好的样品置于具塞离心管中，加入纯乙腈，均质，再加入氯化钠，再次均质，离心；（2）净化：移取样品提取液上清液于旋蒸瓶中，旋蒸至近干，加入体积比为3:1的乙腈-乙酸乙酯混合溶剂于旋蒸瓶中溶解残渣，经ProElutCARB/NH2固相萃取小柱净化，乙腈-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱液，浓缩至近干后，用体积比为1:1的正己烷-丙酮定容，离心，过膜得样品液；（3）标准工作溶液的配制：采用样品空白基质提取液配制不同浓度标准工作液，然后用标准溶液浓度-色谱峰面积作标准工作曲线；（4）气相色谱串联质谱法（GC-MS/MS）测定将步骤（3）中的各浓度的标准工作液进行GC-MS/MS测定，用标准溶液浓度-色谱峰面积作出标准工作曲线；在相同条件下将步骤（2）中得到的样品液进行GC-MS/MS测定，测得样品中二溴氯丙烷的色谱峰面积，带入标准曲线，得到样品液中二溴氯丙烷的含量，然后根据样品液所代表的质量计算得到样品中二溴氯丙烷的残留量。以下是对上述技术方案的进一步说明：步骤（1）中样品若为动物肝脏等含水量较少的样品，需加入称样量五分之一的水，浸泡半小时后进行提取。步骤（4）中气相色谱条件为：色谱柱HP-5MS毛细管色谱柱，30*0.25*0.25；进样口温度250℃；载气：He气，不分流模式进样，进样量1uL；恒流模式，柱流量1.0mL/min；程序升温：初温50℃保持2min,以每分钟5℃的速度升至180℃，保持5min，然后以每分钟20℃的速度升至210℃，保持5min；传输线温度250℃。质谱条件为：离子源温度：250℃；电离模式：EI；碰撞气：高纯氩；多反应监测扫描模式SRM，二溴氯丙烷的母离子为156.8-157.2，子离子分别为74.8-75.2和76.8-77.2。步骤（4）中测定样品和标准工作溶液时，若两者相应农药的保留时间一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中所选择的离子均出现，且离子丰度比与标准溶液一致，则可判断样品中残留此种农药，若不能同时满足上述两个条件，则判断不含该种农药。回收率为90.57-95.13%，检出限为1.15ug/kg，相对标准偏差RSD为2.37-3.71%。本专利技术采用以上技术方案，与传统技术相比，具有以下优点：采用固相萃取前处理技术与气相色谱串联质谱（GC-MS/MS）结合的方法，实现了动物源性食品中二溴氯丙烷的定性确证和定量检测。快速简便、采用乙酸乙酯、乙腈作为溶剂，毒性小。检出限低至1.15ug/kg，所以灵敏度高。回收率90.57-95.13%，所以选择性强。相对标准偏差2.37-3.71%，所以重现性好。有效的去除了基质的干扰，适用于各种动物源性食品中二溴氯丙烷的检测。下面结合实施例对本专利技术作详细说明。附图说明附图1为添加在空白猪肉基质中的二溴氯丙烷标液的选择离子色谱图；附图2为空白猪肉样品的选择离子色谱图；附图3为添加在空白猪肉基质中的二溴氯丙烷标液的质谱图。具体实施方式现以以下实施实例来说明本专利技术，但并不是限制本专利技术的范围。实施例1：下面以猪肉为例，说明二溴氯丙烷残留量的GC-MS/MS检测方法，（1）样品前处理称取样品10.00g，置于100mL塑料离心管中，加入40mL乙腈溶液，高速均质1min，再加入5g氯化钠，再高速均质1min，以4000r/min的转速离心5min；取出20mL乙腈层于250mL尖底旋蒸瓶中，在旋蒸仪上蒸至近干，加入体积比为3:1的3mL乙腈-乙酸乙酯混合溶剂于旋蒸瓶中溶解残渣，待净化；将ProElutCARB/NH2小柱装在固相萃取装置上，在小柱中先加入2g无水硫酸钠，再用体积比为3:1的8mL乙腈-乙酸乙酯混合溶剂预淋洗小柱，保持流速约为1mL/min；将溶解液过柱，再用3mL乙腈-乙酸乙酯混合溶剂洗旋蒸瓶过柱。然后用体积比为3:1的25mL乙腈-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集全部洗脱液于250mL尖底旋蒸瓶中，置于旋蒸仪上旋蒸至近干，用体积比为1:1的正己烷-丙酮定容至2mL，离心10min后用0.45um滤膜过滤得样品液，供GC-MS/MS分析。（2）气相色谱串联质谱法（GC-MS/MS）测定将不同浓度的标准工作液进行GC-MS/MS测定，用标准溶液浓度-色谱峰面积作出标准工作曲线；在相同条件下将样品液进行GC-MS/MS测定，测得样品中二溴氯丙烷的色谱峰面积，带入标准曲线，得到样品液中二溴氯丙烷的含量，然后根据样品液所代表的质量计算得到样品中二溴氯丙烷的残留量。（3）色谱条件和质谱条件色谱条件：色谱柱HP-5MS毛细管色谱柱，30*0.25*0.25；进样口温度250℃；载气：He气，不分流模式进样，进样量1uL；恒流模式，柱流量1.0mL/min；程序升温：初温50℃保持2min,以每分钟5℃的速度升至180℃，保持5min,然后以每分钟20℃的速度升至210℃，保持5min；传输线温度250℃。质谱条件:离子源温度：250℃；电离模式：EI；碰撞气：高纯氩；多反应监测扫描模式SRM,二溴氯丙烷的母离本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种复杂基质中二溴氯丙烷残留量的GC‑MS/MS检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）提取：称取粉碎好的样品置于具塞离心管中，加入纯乙腈，均质，再加入氯化钠，再次均质，离心；（2）净化：移取样品提取液上清液于旋蒸瓶中，旋蒸至近干，加入体积比为3:1的乙腈‑乙酸乙酯混合溶剂于旋蒸瓶中溶解残渣，经ProElut CARB/NH2固相萃取小柱净化，乙腈‑乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱液，浓缩至近干后，用体积比为1:1的正己烷‑丙酮定容，离心，过膜得样品液；（3）标准工作溶液的配制：采用样品空白基质提取液配制不同浓度标准工作液，然后用标准溶液浓度‑色谱峰面积作标准工作曲线；（4）气相色谱串联质谱法（GC‑MS/MS）测定将步骤（3）中的各浓度的标准工作液进行GC‑MS/MS测定，用标准溶液浓度‑色谱峰面积作出标准工作曲线；在相同条件下将步骤（2）中得到的样品液进行GC‑MS/MS测定，测得样品中二溴氯丙烷的色谱峰面积，带入标准曲线，得到样品液中二溴氯丙烷的含量，然后根据样品液所代表的质量计算得到样品中二溴氯丙烷的残留量。
【技术特征摘要】
1.一种猪肉中二溴氯丙烷残留量的GC-MS/MS检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）样品前处理称取样品10.00g，置于100mL塑料离心管中，加入40mL乙腈溶液，高速均质1min，再加入5g氯化钠，再高速均质1min，以4000r/min的转速离心5min；取出20mL乙腈层于250mL尖底旋蒸瓶中，在旋蒸仪上蒸至近干，加入体积比为3:1的3mL乙腈-乙酸乙酯混合溶剂于旋蒸瓶中溶解残渣，待净化；将ProElutCARB/NH2小柱装在固相萃取装置上，在小柱中先加入2g无水硫酸钠，再用体积比为3:1的8mL乙腈-乙酸乙酯混合溶剂预淋洗小柱，保持流速约为1mL/min；将溶解液过柱，再用3mL乙腈-乙酸乙酯混合溶剂洗旋蒸瓶过柱；然后用体积比为3:1的25mL乙腈-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集全部洗脱液于250mL尖底旋蒸瓶中，置于旋蒸仪上旋蒸至近干，用体积比为1:1的正己烷-丙酮定容至2mL，离心10min后用0.45um滤膜过滤得样品液；（2）气相色谱串联质谱法GC-MS/MS测定将不同浓度的标准工作液进行GC-MS/MS测定，用标准溶液浓度-色谱峰面积作出标准...
【专利技术属性】
技术研发人员：许文娟，刘永强，李凯，孙军，
申请(专利权)人：许文娟，
类型：发明
国别省市：山东;37
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