蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)是天然虫草生长和发育后期重要的一种内生真菌，其液体发酵过程中分泌到发酵液中的多糖组分有多种生物活性。本发明专利技术人在对蝙蝠蛾拟青霉中性胞外多糖进行了大量的药效学研究的基础上，深入开发了该胞外多糖在用于肠道菌群和微环境调节方面的治疗作用，增加了蝙蝠蛾拟青霉中性胞外多糖的新用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及一种骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖的新用途，具体设及一种骗幅蛾拟青 霉中性胞外多糖的改善肠道菌群和微环境中的用途。
技术介绍
骗幅蛾拟青霉（Paecilomyceshepiali)是天然冬虫夏草分化成熟后期的一种重 要内生真菌，其中化学组成分析表明骗幅蛾拟青霉的化学组成与天然冬虫夏草更为接近， 含有虫草素、甘露醇、虫草多糖、生物碱类等多种生物活性物质，具有抗氧化、抗肿瘤、抗福 射、调节机体免疫能力等多种生物功能。现阶段，采用人工虫草内生真菌进行液体发酵已成 为人工虫草制品的重要来源。其中，我们研究发现在用该菌株进行液体培养时，其菌丝体能 将大量的多糖类聚合物即胞外多糖分泌到发酵液中。多项研究显示，食药用菌胞外多糖具 有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等多种生物功能。 近年来，越来越多的研究表明大量未被胃肠道直接吸收的膳食营养物质可W被肠 道微生物代谢，并引起菌群结构及其代谢产物的改变进而影响机体健康。人体肠道内栖居 着大量的微生物，数量可达10"，种类可在500种W上，编码了约100万基因，且大多为人体 不具有功能基因。肠道微生物广泛参与了多种膳食成分的代谢，大量研究表明肠道微生物 构成与机体病原菌防御、免疫功能和多种代谢性疾病都有重要联系。而膳食中不易消化的 多糖如纤维素、菊粉糖、抗性淀粉和其它非淀粉多糖等进入大肠后会被其中数量和种类众 多的肠道微生物所代谢，从而引起肠道微生态环境改变。但相较于功能性低聚糖，多糖类的 肠道调节功能研究还较少。 研究表明，具有特定结构的多糖可W被大肠内的细菌代谢并能引起肠道菌群结构 的改变，同时可产生对肠道和机体健康有益作用的短链脂肪酸。如Ibr址im和Anishetty 通过对厚壁菌口、拟杆菌口和放线菌口基因组数据库所编码的多糖类代谢相关酶基因的分 析表明肠道微生物可W建立起碳水化合物宏代谢组网络（meta-met油olomenetwork)作为 机体代谢的延伸。化等采用体外发酵模型研究了云芝糖肤任S巧对肠道菌群的调节作用及 对体系中短链脂肪酸产量的影响，结果表明PSP可W显著提高发酵体系中双歧杆菌、乳酸 菌的比例，降低梭状菌、葡萄球菌、肠球菌比例，但对大肠杆菌没有显著影响，同时短链脂肪 酸的测定表明PSP可W增加乙酸、丙酸、下酸等短链脂肪酸和乳酸的产量。而关于骗幅蛾拟 青霉胞外多糖在该方面的活性还未见报道，为此，本研究深入研究了该菌所产生的胞外多 糖对肠道微生物和肠道微环境的影响，研究结果可W为该多糖作为益生元产品开发提供理 论基础。
技术实现思路
阳0化]本专利技术目的在于公开一种骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖在改善肠道菌群组成和微 环境W及在保健品和功能性食品中的应用。 本专利技术提供了骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖在提高人体肠道益生菌增殖效率和短 链脂肪酸产量中的作用w及在保健品和功能性食品中的应用。 所述的骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖是通过下述方法制备的： (1)从保存于±豆斜面培养基的骗幅蛾拟青霉（Paecilomyceshepiali)HNl菌株 的母种中挖取大小约为0. 5cmX0. 5cm菌丝体块，接种于装有lOOmL种子培养基的容量为 250mL的=角瓶中，于20°C下静止培养12小时后，120巧m下振荡培养培养72小时，即可获 得种子液。种子培养基组成为：葡萄糖30.OOg/l，酵母膏6.OOg/l，憐酸二氨钟1. 50g/l，硫 酸儀 0. 50g/l，麦芽汁 10.OOg/l，±豆汁 10.OOg/L，抑 6. 5 ; 似取步骤（1)中的种子液接种于装有200血发酵培养基的容量为500血的^角 瓶中，按发酵培养基体积的2%接入种子液，于20°C下静止培养12小时后，然后在12化pm 下振荡培养培养120小时后，将发酵产物于4000转/分钟条件下离屯、15分钟后，收集上 清液即为骗幅蛾拟青霉（Paecilomyceshepiali)HNl菌株发酵液。发酵培养基配方为：薦 糖50g/l，酵母膏1. 50g/l，硫酸锭5.OOg/l，憐酸二氨钟1. 50g/l，硫酸儀0. 05g/l，±豆汁 15.OOg/l，麦芽汁 15.OOg/L，pH6. 5 ; (3)将步骤（2)中获得的骗幅蛾拟青霉（PaecilomyceshepialUHNl菌株发酵液， 50°C减压浓缩至原体积的1/2,加3倍体积的无水乙醇，沉淀12小时，用80%乙醇洗涂3次 后，在4000转/分钟条件下离屯、15min收集沉淀即可获得胞外粗多糖； (4)将步骤（3)制得的胞外粗多糖通风挥去乙醇，加少量去离子水复溶后，用氯仿 和正下醇体积比为4 : 1的混合溶液脱蛋白3次后，将水相溶液冷冻干燥获得粗多糖冷冻 干粉； (5)将步骤（4)所得粗多糖溶解后，上样于DEAE-52纤维素柱，并用去离子水进行 洗脱，收集洗脱液进行减压浓缩，去离子水透析72小时，浓缩后冷冻干燥，即得到中性胞外 多糖组分。制备的中性胞外多糖组分为灰白色粉末，其中多糖含量94. 36%，蛋白质含量 4. 58%，分子量为1. 78X105,单糖组成为甘露糖：核糖：鼠李糖：葡萄糖：半乳糖：阿拉 伯糖=53.62 : 3.20 : 3.51 : 13. 10 : 14. 17 : 2. 24。 下面对本专利技术做进一步的解释和说明： 人粪样体外厌氧混合培养实验 通过使用健康人群的粪样收集年龄为25-30岁之间的身体健康受试者新鲜全便 加入适量0.Imol/LpH7. 2的PBS缓冲液中，然后置于厌氧培养箱中用縱满混合器混合均 匀作为厌氧发酵多糖的原始菌样备用。接种及中性胞外多糖的体外厌氧混合培养：分别设置空白组、阳性对照组和样品 组，空白组只加入含氮基础培养基，阳性对照组和样品组除加入含氮基础培养基外，分别加 入终浓度为Img/血的经灭菌处理的低聚果糖（K)巧和骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖组分，每 组设3个平行。然后在厌氧培养箱内分别按体积比1 : 9接种步骤（1)所配制的人粪便混 合液，混匀后置于37°C厌氧培养箱中发酵培养，分别在0、12、24、36、4化时分别取500yL发 酵液进行分析，其中150yL用于SCFA的分析，100yL用于细胞FI甜计数，250yL用于测 定多糖变化。采用高效液相色谱0PLC)法测定厌氧发酵体系中不同时间的短链脂肪酸含 量。【附图说明】 图1骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖在体外厌氧发酵体系中代谢变化 图2骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖对发酵体系中甲酸产量的影响 图3骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖对发酵体系中乙酸产量的影响 图4骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖对发酵体系中丙酸产量的影响 图5骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖对发酵体系中下酸产量的影响 阳022] 图6骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖对发酵体系中乳酸产量的影响 图7骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖对发酵体系中总酸产量的影响【具体实施方式】 下面通过实施例，对本专利技术作进一步描述。 阳02引实施例1 : 阳0%] 骗幅蛾拟青霉中性胞外多糖的制备： (1)从保存于±豆斜面培养基的骗幅蛾拟青霉（Paecilomyceshepiali)HNl菌株 的母种中挖取大小约为0. 5cmX0. 5cm菌丝体块，接种于装有lOOmL种子培养基的容量为 250mL的=角瓶中，于20°C下静止培养12小本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种蝙蝠蛾拟青霉中性胞外多糖的新用途，具体特征包括：(1)蝙蝠蛾拟青霉中性胞外多糖对肠道益生菌的促增殖作用；(2)蝙蝠蛾拟青霉中性胞外多糖促进肠道多种短链脂肪酸的产量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：武忠伟，李勇超，陈向东，康壮丽，王明艳，何承云，
申请(专利权)人：河南科技学院，
类型：发明
国别省市：河南;41
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