本发明专利技术提供水稻转录因子Os05g49170基因CDS序列在提高水稻抗旱能力中的应用，所述应用是通过在水稻中过表达水稻转录因子Os05g49170基因CDS序列，从而提高转基因水稻的抗旱能力。本发明专利技术采用In-fusion技术将水稻转录因子Os05g49170基因CDS序列构建到植物双元表达载体的Ubiquitin启动子的下游，转化水稻，筛选转基因水稻植株。本发明专利技术提供的提高水稻抗旱能力的方法，对于在生产中提高水稻的抗旱性，详细阐明水稻抗旱的分子机理，具有重要的理论价值，并且可以通过转基因手段，提高水稻在干旱条件下的生存能力，因此在生产中同样具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及基因工程领域，具体地说，设及水稻转录因子0s05g49170基因CDS序 列在提高水稻抗旱能力中的应用。
技术介绍
近几年来，因厄尔尼诺现象造成的大范围内周期性降水导致±壤分布失衡W及各 地用水不当等原因，使相当范围内的干旱加剧，农用水源日趋紧张已威胁到粮食安全问题。 水稻是我国最重要的粮食作物，而干旱胁迫是影响水稻生长发育并最终导致减产的重要环 境因素之一。目前，利用分子生物学技术已发现了一些能够提高水稻抗旱能力的基因。随 着分子生物学，细胞遗传学及高新技术的发展，对于水稻抗旱性的研究日趋深入，逐渐开始 从细胞和分子水平对水稻抗旱性进行研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供水稻转录因子0s05g49170基因CDS序列在提高水稻抗旱能 力中的应用。 为了实现本专利技术目的，本专利技术提供的水稻转录因子0s05g49170基因CDS序列在提 高水稻抗旱能力中的应用，所述应用是通过在水稻中过表达水稻转录因子0s05g49170基 因CDS序列，从而提高转基因水稻的抗旱能力。 阳0化]本专利技术中设及的水稻转录因子0s05g49170基因CDS序列如SEQIDNo.1所示。 具体地，前述应用是指采用In-化Sion技术将水稻转录因子0s05g49170基因CDS 序列构建到植物双元表达载体的化iquitin启动子的下游，转化水稻，筛选转基因水稻植 株。 优选地，所述植物双元表达载体的出发载体为PCAMBIA1390。 其中，In-化Sion技术中使用的用于扩增目的基因的引物对为： 正向引物F日'-TCTGCACTAGGTACCTGCAGATGTCCATCTCGCTGCGC-3'反向引物R 5'-ATGGATCCGTCGACCTGCAG GAACAACATC ATCAAGGGGATAA-3' 前述应用中，转化水稻具体为：采用农杆菌介导的方法，将构建的表达载体（SEQ IDNo.2)转入水稻愈伤组织中，用含诱导剂和农杆菌的AAM培养液进行转化，转化后的材 料经过共培养-筛选-分化-生根-转基因苗的锻炼和移栽，筛选转基因水稻植株。 优选地，前述应用中转化的水稻品种为日本晴'kitaake'。 更优选地，前述的应用是利用潮霉素筛选转基因水稻植株。 本专利技术首次利用过表达水稻转录因子0s05g49170基因CDS序列提高水稻的抗旱 能力。本专利技术提供的提高水稻抗旱能力的方法，对于在生产中提高水稻的抗旱性，详细阐明 水稻抗旱的分子机理，具有重要的理论价值，并且可W通过转基因手段，提高水稻在干旱条 件下的生存能力，因此在生产中同样具有重要意义。【附图说明】 图1为本专利技术实施例3中Western Blot检测转基因阳性水稻株系。 图2为本专利技术实施例4中过表达水稻转录因子0s05g49170基因CDS序列的水稻 材料抗旱性提高。其中，PEGOd代表水稻材料在长日照（14h光照/1化黑暗）生长21天， 未经PEG处理；PEGIOd代表水稻材料经PEG处理10天；Rec7d代表水稻材料经PEG处理 10天后，移除阳G，复水7天。 图1和图2中，WT为野生型水稻，0SC0R413-1和0SC0R413-2为转基因株系。【具体实施方式】W下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明， 实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册（SambrookJ&Russell DW,Molecularcloning:a1油oratorymanual, 2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。 实施例1水稻转录因子0s05g49170基因CDS序列的获得及表达载体的构建 在植物转录因子数据库（ht1:p://;rice.plan忧iology.msu.edu/analyses_ search_locus.shtml)中找到0s05g49170基因，根据其CDS序列设计PCR扩增引物，W野 生型日本晴'kitaake'水稻总CDNA为模板，进行PCR扩增获得水稻转录因子0s05g49170 基因CDS序列，其核巧酸序列如SEQIDNo. 1所示。按照PrimeSTAR聚合酶扩增体系和 反应程序进行PCR扩增。然后利用In-化Sion技术，将PCR扩增产物纯化后克隆到带有 化iquitin启动子的过表达载体PCAMBIA1390上，经测序鉴定得到与目的基因（即水稻转 录因子0s05g49170基因CDS序列）完全相同的序列，，构建的表达载体命名为ubi:L0C_ 0s05g49170(沈QIDNo. 2)。 阳02UIn-化Sion技术中使用的用于扩增目的基因的引物对为： 正向引物F日'-TCTGCACTAGGTACCTGCAGATGTCCATCTCGCTGCGC-3'反向引物R5'-ATGGATCCGTCGACCTGCAGGAACAACATCATCAAGGGGATAA-3' 实施例2转基因水稻植株的获得取水稻'kitaake'成熟种子，人工或机械脱壳，挑选饱满光洁无菌斑的种子经消毒 之后接种到诱导培养基上进行诱导培养。选择外观良好，生长力好的水稻愈伤组织为受体 材料，采用农杆菌介导法将Ubi:L0C_0s05g49170转入水稻愈伤组织中，用含有100yM的乙 酷下香酬和OD值为0. 7的农杆菌的AAM培养液进行转化，将转化液浸泡过的愈伤组织置于 共培养基上进行共培养，25°C暗培养3d后置于筛选培养基上培养约30d，每IOd继代一次。 然后将筛出的抗性愈伤转移到分化培养基上分化约20山每IOd继代一次。将分化出绿色小 苗的抗性愈伤转移到生根培养基上生根，待约7d长出发达根系后炼苗，并计算转化所获转 基因苗数，共获得70个转基因植株。炼苗7d后转移至大田生长。 本实施例中设及的培养基配方如下： 诱导培养基：N6大量+B5微量+NB有机+铁盐+铜钻母液巧.5mg/L2, 4D+0. 6g/L 酸水解酪蛋白+2. 878g/L脯氨酸+0. 5g/L谷氨酷胺+30g/L薦糖，W水配制，调抑至5. 8~ 5. 9后加入植物凝胶4g/L。 共培养基：N6大量+B5微量+NB有机+铁盐巧.5mg/L2, 4D+0. 5g/L谷氨酷胺 +0. 6g/L酸水解酪蛋白+lOg/L葡萄糖+30g/L薦糖，W水配制，调pH至5. 2后加入植物凝胶 4g/L。灭菌后，50°C左右加入AS(乙酷下香酬）100~200yg/mL。 筛选培养基：N6大量+B5微量+NB有机+铁盐+铜钻母液巧.5mg/L 2, 4D+0.6g/L 酸水解酪蛋白+2. 878g/L脯氨酸+0. 5g/L谷氨酷胺+30g/L薦糖，W水配制，调抑至5.8~ 5. 9后加入植物凝胶4g/L。灭菌后加入35mg/L潮霉素（购自上海纽津生物技术有限公司）。 W30]分化培养基：MS无机+MS-B5微量+MS有机+铁盐+MS-铜钻母液+0. 05mg/L NAA巧.Omg/LKinetin(激动素）+30g/L山梨醇巧g/L水解酪蛋白+30g/L薦糖，W水配制， 调抑至5.8~5. 9后加入植物凝胶4g/L。 实施例3转基因阳性株系的鉴定 为检测水稻转录因子0s05g49170基因CDS序列已在水稻中过表达，利用Flag抗 体（购自A本文档来自技高网...
【技术保护点】
水稻转录因子Os05g49170基因CDS序列在提高水稻抗旱能力中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘斌，张春雨，赵涛，李宏宇，刘军，林辰涛，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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