磷酸肌酸钠的纯化方法技术

本发明专利技术公开了磷酸肌酸钠的纯化方法，具体步骤为：将磷酸肌酸钠母液用体积分数为40～70％的乙醇预处理，然后将预处理后的磷酸肌酸钠母液上样，上样后，用0.02～0.15M的电解质溶液作为洗脱液洗脱肌酸，然后用0.2～0.8M的电解质溶液作为洗脱液洗脱磷酸肌酸钠，收集洗脱液，结晶，干燥，得磷酸肌酸钠；本发明专利技术的方法简单，不需要引入硫酸根和钡，安全性好，并且制得的磷酸肌酸钠回收率高，为40％，纯度达到99.80％，符合药用要求。

【技术实现步骤摘要】
磷酸肌酸钠的纯化方法
本专利技术属于化学领域，具体涉及磷酸肌酸钠的纯化方法。
技术介绍
磷酸肌酸是人体内的活性物质。该物质现以磷酸肌酸钠四水合物的形式用于临床，主要用于治疗心学管疾病和代谢性疾病。该药市场巨大，前景广阔，用药人群广泛。在文献报道中，现有的磷酸肌酸钠的纯化工艺是沉淀法或树脂分离法。沉淀法会引入硫酸根离子和钡离子；吉林英联制药公司所用的树脂分离法也引入了硫酸根和钡离子；上述两种离子的毒性非常的大，因此要求在产品中的残留非常的低，而这一要求提高了纯化和结晶的难度，同时为得到合格的产品而降低了收率。有的树脂分离法使用的是氯化钙进行洗脱，尽管未引入硫酸根和钡，但由于磷酸肌酸钙在水中的溶解度极低，因此该方法生产效率也非常低。为解决上述问题，急需一种安全性高、生产效率也高的磷酸肌酸钠纯化方法，纯化的磷酸肌酸钠符合药用要求。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供磷酸肌酸钠的纯化方法，安全性好、生产效率高。为实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案：磷酸肌酸钠的纯化方法，包括如下步骤：1、磷酸肌酸钠的纯化方法，包括如下步骤：(1)将磷酸肌酸钠母液用体积分数为40～70％的乙醇预处理；(2)将预处理后的磷酸肌酸钠母液上样，上样完后，用0.02～0.15M的电解质溶液作为洗脱液洗脱肌酸，然后用0.2～0.8M电解质溶液作为洗脱液洗脱磷酸肌酸钠，收集洗脱液，结晶，干燥，得磷酸肌酸钠。优选的，所述电解质溶液为氯化镁、氯化铵、氯化钠或氯化锌。优选的，所述步骤(1)为将磷酸肌酸钠母液用体积分数为50％的乙醇预处理。更优选的，所述磷酸肌酸钠母液含有肌酸、磷酸肌酸钠、ADP、ATP、镁离子、AMP和氯离子。更优选的，所述磷酸肌酸钠母液由肌酸：ATP的摩尔比在2:1～10:1的范围内、在温度为0～40℃、pH为7～11，镁离子摩尔浓度为0.5～5倍ATP，在固定化兔肌肌酸激酶催化下反应制得。优选的，步骤(2)中，所述上样的流速为1～4BV/h。优选的，步骤(2)中，所述洗脱肌酸的速度为1BV/h-4BV/h。优选的，步骤(2)中，所述洗脱磷酸肌酸钠的速度为4BV/h。优选的，步骤(2)中，所述结晶为在乙醇体积分数为80％-90％、、温度为4～30℃条件下静置12h以上结晶。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的磷酸肌酸钠的纯化方法，该方法不需要使用硫酸根和钡离子，因此安全性好，并且生产效率高，磷酸肌酸钠收率大于40％，纯度高达99.80％，符合药用要求。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图：图1为最大吸附量试验结果。图2为不同上样速度的穿透曲线。图3为不同速度洗脱肌酸的试验结果。图4为不同速度洗脱磷酸肌酸钠的试验结果。图5为自制样品和磷酸肌酸钠标准品200～400nm扫描光谱图(A：自制样品；B：磷酸肌酸钠标准品)。图6为自制样品和磷酸肌酸钠标准品标准品红外光谱图。图7为色谱分析ATP系列物质色谱图。图8为色谱分析磷酸肌酸钠色谱图。具体实施方式下面将结合附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。本专利技术中纯化的磷酸肌酸钠样品为是由肌酸：ATP的摩尔比在2:1～10:1的范围内、反应时间在6h左右、温度5～40℃范围内、pH在9～11、镁离子浓度应在0.5～1.5倍ATP浓度范围内，在固定化兔肌肌酸激酶催化下反应的产物，以下简称为磷酸肌酸钠母液。母液中含大量的肌酸、磷酸肌酸钠、ADP、ATP、镁离子，少量的AMP和氯离子。兔肌肌酸激酶由以下方法制备：(1)取冷冻的兔大腿肌肉380g，去除结缔组织和神经后切成小块，然后加入1100ml浓度为0.01mol/LKCl，再用绞肉机将兔肉打碎；(2)将打碎的兔肉用缝隙为2μm左右的胶体磨破碎5～10分钟；然后在室温(25℃)下搅拌提取30min后，再在0℃条件下，以8000r/min离心10min，弃去沉淀，收集上清液，记为V1；(3)在V1中加入研细的NH4Cl至NH4Cl浓度为0.1mol/L，用5mol/LNH4OH调pH至9.0，然后于室温(25℃)下搅拌30min，加入1.5倍V1体积的95％冷乙醇，再在室温(25℃)下搅拌2.5h，接着在0℃、8000r/min条件下离心10min，弃沉淀，再次收集上清液，记为V2，取样备用；(4)在V2中加入2mol/L的MgSO4(pH＝8.5)至终浓度为0.03mol/L，然后逐滴补加相当于MgSO4体积1.5倍的95％的冷乙醇，加毕搅拌30min，再在0℃、8000r/min条件下离心10min，弃上清液，收集沉淀；(5)将步骤(4)收集的沉淀称重，取少量的沉淀用pH9.0甘氨酸缓冲液进行溶解后，记为V3，备用；剩余的沉淀-20℃保存。本工艺，酶的回收率为9.2％，纯化倍数为6.7，纯度90％左右，符合要求。然后将制得的兔肌肌酸激酶以树脂A为载体进行固定化，其参数为：酶活力(IU)∶树脂(g)≤100、25-35℃范围内、2-5h、pH8-10；固定化酶收率37.4％，活性26IU/g，半衰期265h，最适pH9-11，最适温度25-35℃。由于磷酸肌酸钠母液中含大量的肌酸、磷酸肌酸钠、ADP、ATP、镁离子，少量的AMP、氯离子。其中镁离子为阳离子，在阴离子树脂上不吸附；氯离子在氯型阴离子树脂上无吸附；肌酸在pH7.0的环境中为两性离子状体，理论上在阴离子树脂上也不吸附，实际情况下有极少部分肌酸吸附；AMP的含量非常低，可忽略不计。磷酸肌酸钠、ADP、ATP均有磷酸根，在pH7.0环境中均呈阴离子状态，且磷酸肌酸钠的电荷数＜ADP＜ATP。因此可用阴离子树脂将上述三种物质吸附到树脂上，并且树脂对ADP和ATP的选择能力强，因此可以通过洗脱剂进行分步洗脱从而达到分离的目的。一、磷酸肌酸钠母液预处理肌酸、磷酸肌酸钠、ADP、ATP均微溶于乙醇，在不同浓度的乙醇溶液中，各物质的溶解度不一样，因此取3份磷酸肌酸钠母液适量，每份溶液加入无水乙醇，使乙醇的体积分数分别为40％、50％、60％，溶液产生沉淀，检测上清液各成分的含量，结果如表1所示。表1、反应液预处理试验结果由表1可知，磷酸肌酸钠母液各组分在水-乙醇体系中的溶解度不一致；在50％时，溶液中的ATP+ADP的摩尔数之和/磷酸肌酸钠摩尔数由原来的2～1.25:1变为1:3.3，磷酸肌酸钠损失20％左右；40％的乙醇处理后，ATP和ADP残留太多；而60％的乙醇处理，磷酸肌酸钠的损失在40％左右。综合考虑，最终确定用50％的乙醇进行预处理，不仅极大的提高了树脂对磷酸肌酸钠的交换容量，同时也提高了纯化的效率，降低了生产成本。二、动态吸附与洗脱1)最大吸附量将选择好的1#阴离子树脂经过活化处理后，称取100g装柱，以1BV/h的流速上样预处理后的反应液，测定其最大吸附量，结果如图1所示。结果显示，测定700ml的流出液，其磷酸肌酸钠含量为3.58mg/ml，共吸附4844mg。每克湿树脂在该情况下对磷酸肌酸钠的最大吸附量为48mg左右。2)上样流速的选择分别以1BV/h、2BV/h、4BV/h、8BV/h的上样速度进行上样，监测流出液中的磷酸肌酸钠浓度，绘制穿透曲本文档来自技高网...

【技术保护点】
磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将磷酸肌酸钠母液用体积分数为40～70％的乙醇预处理；(2)将预处理后的磷酸肌酸钠母液上样，上样完后，用0.02～0.15M的电解质溶液作为洗脱液洗脱肌酸，然后用0.2～0.8M电解质溶液作为洗脱液洗脱磷酸肌酸钠，收集洗脱液，结晶，干燥，得磷酸肌酸钠。

【技术特征摘要】
1.磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将磷酸肌酸钠母液用体积分数为50%的乙醇预处理；（2）将预处理后的磷酸肌酸钠母液上样，上样完后，用0.05M的电解质溶液作为洗脱液洗脱肌酸，然后用0.4M电解质溶液作为洗脱液洗脱磷酸肌酸钠，收集洗脱液，结晶，干燥，得磷酸肌酸钠。2.根据权利要求1所述磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于：所述电解质溶液为氯化镁、氯化铵、氯化钠、硫酸钠或氯化锌。3.根据权利要求1或2所述磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于：所述磷酸肌酸钠母液含有肌酸、磷酸肌酸钠、ADP、ATP、镁离子、AMP和氯离子。4.根据权利要求3所述磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于：所述磷酸肌酸钠母液由肌酸：...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈真文，廖凤霞，李玉林，程永刚，肖中元，郭伟，毛先兵，
申请(专利权)人：西南药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;85