本发明专利技术公开了海带/海带多糖提取物的一种新用途，即：海带/海带多糖提取物在制备抗EV71药物中的应用。所述海带多糖提取物的制备方法为以下方法之一：(1)海带水提取物：取海带，用PBS清洗后，加双蒸水煮沸，过滤获煮汁，离心得上清，即得；(2)海带水提醇沉物：取海带，用PBS清洗后，加双蒸水煮开，过滤获煮汁，加入无水乙醇至75～95％，离心，得沉淀，即得；(3)海带DEAE纤维素柱分离组分：将上述水提醇沉物用DEAE纤维素柱分离，用NaCl溶液洗脱，收集洗脱组分，即得。本发明专利技术为海带提取物用于临床治疗EV71感染性疾病提供实验依据，对研制抗EV71药物提供了一定的指导意义，具有重要的参考价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及海带/海带多糖提取物在制备抗EV71药物中的应用。
技术介绍
海带，别称江白菜、昆布，褐藻口游抱子纲海带目海带科海带属，藻体褐色，一般长 2~4米，最长达7米。可分固着器、柄部和叶片=部分。固着器叉形分枝，用W附着海底岩 石。柄部短粗，圆柱形。叶片狭长，带形。生长于水溫较低的海中，分布于中国北部沿海及 朝鲜、日本和苏联太平洋地区沿岩，素有"长寿菜"、"海上之蔬"、"含舰冠军"的美誉。海带 是个体大、生长快、经济价值高的一种大型褐藻，我国北部及东南沿海均有大量养殖。海带营养丰富，含有较多的舰质、巧质，有治疗甲状腺肿大之功效。海带可W冷拌 食用，也可W做热炒菜。除食用外，海带还可W制海带酱油、海带酱、味粉，海带还可W加工 成脆片，海带脆片成为新的海洋类休闲食品。日本人用海带磨成粉，作为红肠等食物的添加 剂，把海带茶作为表示喜庆的高贵食品。工业上用海带提取钟盐、褐藻胶、甘露醇，用来代替 面粉浆纱、浆布，制酒时用作澄清剂。除此之外，海带（昆布）还具有重要的药用价值，如： 《嘉佑本草》记载海带具有催生，治妇人及疗风，亦可作下水药；《本草图经》记载海带"下水 速于海藻";《纲目》提到海带"治水病，瘦瘤，功同海藻";《医林纂要》认为海带"补屯、，行水， 消疲，软坚。消瘦瘤结核，攻寒热瘤痛，治脚气水肿，通喧隔。"据有关文献（MutoS,化imuraK,OoharaM,etal.Polysaccharidesfrommarine 曰Ig曰e曰nd曰ntivir曰1drugscont曰iningthesame曰sactiveingredients.Eur.Patent EP295956, 1988, 21.)报道，海带（昆布）多糖提取物具有抗病毒作用，但到目前为止，尚未 见海带（昆布）多糖提取物抗EV71活性的资料报道。EV7UEnterovirus71)属于小RNA 病毒科（Picornaradae)肠道病毒属巧nterovirus)，是引起婴幼儿手足口病化and化ot andmouthdisease,HFMD)的主要病原。自1969年Schmi化等人在美国首次分离到EV71 病毒，世界各国W及我国大陆及周边地区EV71感染爆发越来越多。到目前为止，EV71感染 没有有效的治疗药物及疫苗。
技术实现思路
阳0化]针对上述现有技术，本专利技术提供了海带/海带多糖提取物的一种新用途，即：海带 /海带多糖提取物在制备抗EV71药物中的应用。具体应用方式为：将海带进行前处理，提取得到海带多糖提取物，用于制备抗EV71药物，如：可将海带多糖提取物与医学上可接受的辅料一起制成胶囊剂、片剂、颗粒 剂、口服液制剂等，将海带多糖提取物进一步纯化也可W制成注射制剂。所述"前处理、提取得到海带多糖提取物"为W下=种方式之一（即海带多糖提取 物的制备方法）：[000引 （1)海带（昆布）水提取物：取海带（昆布），用PBS清洗后，加双蒸水煮沸0. 1~ 3小时，过滤获煮汁，离屯、上清即海带（昆布）水提取物。 (2)海带（昆布）水提醇沉物：取海带（昆布），用PBS清洗后，加双蒸水煮开，过 滤获煮汁，加入无水乙醇至乙醇含量为75~95% (体积百分数），离屯、，得沉淀，即为海带 (昆布）水提醇沉物。 (3)海带（昆布）DEAE纤维素柱分离组分：将上述（2)中的水提醇沉物用DEAE纤 维素柱分离，用浓度范围为0. 05~2M的化C1溶液洗脱，收集0. 05~2M化C1洗脱组分， 即为海带（昆布）DEAE纤维素柱分离组分，将其溶于细胞维持液中备用于试验。 经实验证明，海带（昆布）的上述不同提取物对EV71均有显著的抑制作用： 阳〇1引 a.海带（昆布）水提取物：抑制EV71在畑细胞出现CPE，TC为11.98±1.42ug/血， IC50 为 520. 28 + 10. 34ng/mL，TI为 23. 03;抑制EV71 在肥L发生CPE，TC为 13. 24+1.Slug/ 血，IC50 为 601. 25 + 9. 84ng/mL，TI为 22. 02。 阳〇1引 b.海带（昆布）水提醇沉物：抑制EV71在畑细胞出现CPE，TC为23. 37 + 2. 45ug/ 血，IC50为310. 15+12. 12ng/mL，TI为75. 35 ;抑制EV71在肥L发生CPE，TC为35. 54+3. 77ug/mL，IC50为299. 97+1. 14ng/mL，TI为118. 48。 C.海带（昆布）DEAE纤维素柱分离组分：抑制EV71在畑细胞出现CPE，TC为 32. 57+3. 04ug/mL，IC50为20. 87+2. 05ng/mL，TI为1560. 61 ;抑制EV71在肥L出现CPE， TC为41. 25+5. 21ug/mL IC50为22. 68+3. 22 y g/mL TI为1818. 78。 为便于观察与比较，上述内容详见表1。 表1海带（昆布）多糖提取物抑毒试验结果 从表1可W看出，海带（昆布）各提取物对EV71均有显著的抑制作用，运提示海 带不仅具有软坚、散结、消炎、平喘、通行利水、桂脂降压等功效，而且在治疗病毒感染性疾 病领域存在潜在的应用价值，对EV71感染性疾病的治疗意义尤为重大。本专利技术为海带提取 物用于临床治疗EV71感染性疾病提供实验依据，对研制抗EV71药物提供了一定的指导意 义，具有重要的参考价值。 为了更好地理解本专利技术的实质，下面将结合实施例对本专利技术作进一步的说明。【附图说明】 图1为肥L细胞对照：未感染EV71的肥L细胞（200X)。 图2为肥L细胞感染E71病毒：肥L细胞出现完全CPE(200X)。 阳02引 图3为畑细胞对照：未感染EV71的畑细胞（200X)。 图4为畑细胞感染E71病毒：畑细胞出现完全CPE(200X)。图5为海带（昆布）DEAE纤维素柱分离组分抑制EV71感染肥L细胞的CPE:加入 海带（昆布）DEAE纤维素柱分离组分后EV71在肥L细胞上的C阳明显减轻（200X)，其中， A为肥L细胞对照，B为多糖在肥L细胞上的毒性，C为多糖干预后，D为病毒对照。 阳0巧]图6为海带（昆布）DEAE纤维素柱分离组分抑制EV71感染畑细胞的CPE:加入 海带（昆布）DEAE纤维素柱分离组分后EV71在畑细胞上的CPE明显减轻（200X)，其中， A为畑细胞对照，B为多糖在畑细胞上的毒性，C为多糖干预后，D为病毒对照。 阳0%] 图7为海带（昆布）DEAE纤维素柱分离多糖组分抑制EV71在RD细胞上的增殖能 力。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明。[002引下述实施例中所设及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有 的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所设及的实验方法，检 测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。 实施例1 :海带（昆布）多糖水提取物抗EV71的作用研究 (1)海带（昆布）多糖水提取物的制备： 阳03U 取海带（昆布）200g，用PBS冲洗干净后，组织匀浆器匀浆，加500ml去离子水煮沸 15min;纱布过滤出去固体组织后lOOOOg离屯、lOmin，上清（本文档来自技高网...
【技术保护点】
海带/海带多糖提取物在制备抗EV71药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李志会，李鹏，岳盈盈，宋楠楠，李冰清，孟红，秦立增，
申请(专利权)人：山东省医学科学院基础医学研究所，山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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