本发明专利技术涉及一种连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠制备方法；制备方法为，在羟基磁珠中加入碱液进行活化，得到含活化后羟基磁珠和碱液的混合物Ⅰ；在所得混合物Ⅰ中加入二甲亚砜、环氧氯丙烷和浓度为1mol/L的氢氧化钠，60℃的温度下，搅拌12-14小时，得到环氧活化磁珠；所得环氧活化磁珠中加入碳酸氢钠溶液和乙二胺，50℃下缓慢震荡20小时，得到处理后环氧活化磁珠；所得处理后环氧活化磁珠中加入氢氧化钠溶液和碳酸氢钠溶液，混合均匀后加入溴乙酸，室温下搅拌，制备出连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠；本发明专利技术的方法简单，所制备出的金属螯合磁珠，其金属结合能力强，结合容量大,可用于移除溶液及生物大分子中的金属离子。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种金属螯合磁珠，具体的说是。
技术介绍
在溶液中，金属离子往往和蛋白质、核酸、糖等生物大分子结合在一起，影响我们对这些生物大分子的结构和功能的分析。现有获得脱金属方法是通过加入高浓度的低分子量螯合剂，如Η)ΤΑ和EGTA等，或者通过金属螯合琼脂糖凝胶。前者在移除螯合剂金属复合物的同时缓冲液中的金属离子会重新与大分子结合，影响脱金属效果。目前广泛使用琼脂糖凝胶来对生物大分子进行脱金属处理。琼脂糖的粒度均匀，表面有密度适宜的可反应的活性基团，便于连接金属螯合基团。中国专利申请“四配位体金属螯合层析填料乙二胺二乙酸琼脂糖凝胶制备方法”(申请号CN200910196910.0)和“一种金属螯合琼脂糖凝胶的制备方法及其应用”(申请号CN201110329239.X)公开的方法，采用结合了乙二胺二乙酸(EDDA)或乙二胺二琥珀酸(EDDS)的琼脂糖凝胶进行金属离子的螯合，由于EDDA提供4个金属配位体，EDDS提供6个金属配位体，制得的琼脂糖凝胶的金属螯合能力要比亚氨基二乙酸(IDA，金属配位数为3)的强。但是琼脂糖凝胶在较低压力下结构就会产生压缩破坏，为提高其机械强度，常采用增加交联度的办法，但交联后的琼脂糖凝胶吸附性大大下降；另一方面，琼脂糖凝胶的热稳定性也较差，50°C以上就开始水解，这些缺点使其不能完全满足目前的研究需要。磁珠是近年来发展起来并已广泛应用于医学生物学领域的一种多功能试剂，它由磁性内核和核外包裹的高分子外壳两部分组成，利用磁核对外磁场的响应，可以将磁珠从周围介质中迅速分离出来。中国专利申请“一种金属螯合纳米磁珠，其制备方法及其应用”(申请号CN200610002030.1)公开了一种连接IDA的纳米磁珠，该磁珠与金属离子螯合后，金属离子(如六配位金属N1、Cu、Co和Ca等)上还剩余三个空轨道可以与具有金属结合位点的蛋白质结合，因此以IDA为螯合基制成纳米磁珠吸附蛋白质能力较强，能较好地用于溶液中金属结合蛋白的分离和鉴定，但并不能从大分子中有效地移除金属离子。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，所制备出金属螯合磁珠，其金属结合能力强，结合容量大，可用于移除溶液及生物大分子中的金属离子。—种连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠制备方法，包括以下步骤: 步骤一、羟基磁珠的活化:在羟基磁珠中加入碱液进行活化，得到含活化后羟基磁珠和碱液的混合物I，备用；所述碱液的加入量为使混合物I的PH值达到12-14 ; 步骤二、环氧化:按照混合物1、二甲亚砜、环氧氯丙烷和氢氧化钠溶液的体积比为1:2:1: 4的比例，在上述步骤一所得混合物I中加入二甲亚砜、环氧氯丙烷和浓度为Imol/L的氢氧化钠，60°C的温度下，搅拌12-14小时，除去溶液，所得磁珠洗至中性，即得到环氧活化磁珠，备用； 步骤三、在每1mg上述步骤二所得环氧活化化磁珠中加入3ml碳酸氢钠溶液和2ml乙二胺，置于50°C下缓慢震荡20小时，除去溶液，所得磁珠洗至中性，得到处理后环氧活化磁珠，备用； 步骤四、在每1mg上述步骤三所得处理后环氧活化磁珠中加入3 ml氢氧化钠溶液和2 ml碳酸氢钠溶液，混合均匀后加入0.1~1 g溴乙酸，室温下搅拌10~15小时，除去溶液，所得磁珠洗至中性，即制备出连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠，将其保存于质量浓度为30%乙醇水溶液中，置于4°C下保存，备用。步骤一中所述碱液优选为氢氧化钠溶液或氨水，浓度为5-10 mol/L ;所述轻基磁珠为单分散粒径纳米微球，表面功能基团优选为为硅羟基，粒径为400-600nm。步骤二中所述氢氧化钠溶液和环氧氯丙烷优选为在12-14小时内分5次缓慢加入处于搅拌状态的磁珠中。步骤三中所述碳酸氢钠溶液的浓度优选为0.1-0.5mol/Lo步骤四中所述氢氧化钠溶液的浓度优选为1~5 mol/L，碳酸氢钠溶液的浓度优选为 0.2~2mol/Lo步骤二、步骤三和步骤四中所述洗至中性的方法优选为，先采用蒸馏水洗，再用稀醋酸洗，最后用蒸馏水洗至中性。有益效果是: 本专利技术的连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠制备方法，以单分散的硅羟基磁珠为基质，性质稳定，经环氧活化后，进一步合成三羧甲基乙二胺(TED)，获得连接TED的金属螯合磁珠；该制备方法，制备工艺简单，易于放大，使用方便，本专利技术的连接TED的金属螯合磁珠含有三个羧基，形成的螯合中心含有5个配位体，当二价金属离子结合后，金属离子仅剩下一个空轨道与蛋白质结合，使蛋白很容易从螯合位点分离出来。将该磁珠加入溶液后可快速移除溶液及生物大分子中的金属离子，方便对生物大分子的结构和功能进行分析。该方法尤其适合复合重金属污染环境下生长的植物蛋白质中重金属离子的移除。【具体实施方式】—种连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠制备方法，包括以下步骤: 步骤一、羟基磁珠的活化:在羟基磁珠中加入碱液进行活化，得到含活化后羟基磁珠和碱液的混合物I，备用；所述碱液的加入量为使混合物I的PH值达到12-14 ; 步骤二、环氧化:按照混合物1、二甲亚砜、环氧氯丙烷和氢氧化钠溶液的体积比为1:2:1: 4的比例，在上述步骤一所得混合物I中加入二甲亚砜、环氧氯丙烷和浓度为Imol/L的氢氧化钠，60°C的温度下，搅拌12-14小时，除去溶液，所得磁珠洗至中性，即得到环氧活化磁珠，备用； 步骤三、在每1mg上述步骤二所得环氧活化化磁珠中加入3ml碳酸氢钠溶液和2ml乙二胺，置于50°C下缓慢震荡20小时，除去溶液，所得磁珠洗至中性，得到处理后环氧活化磁珠，备用； 步骤四、在每1mg上述步骤三所得处理后环氧活化磁珠中加入3 ml氢氧化钠溶液和2 ml碳酸氢钠溶液，混合均匀后加入0.1~1 g溴乙酸，室温下搅拌10~15小时，除去溶液，所得磁珠洗至中性，即制备出连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠，将其保存于质量浓度为30%乙醇水溶液中，置于4°C下保存，备用。步骤一中所述碱液优选为氢氧化钠溶液或氨水，浓度为5-10 mol/L ;所述轻基磁珠的表面功能基团为硅羟基，粒径为400-600nm。步骤二中所述氢氧化钠溶液和环氧氯丙烷优选为在12-14小时内分5次缓慢加入处于搅拌状态的磁珠中。步骤三中所述碳酸氢钠溶液的浓度优选为0.1-0.5mol/Lo步骤四中所述氢氧化钠溶液的浓度优选为1~5 mol/L，碳酸氢钠溶液的浓度优选为 0.2~2mol/Lo步骤二、步骤三和步骤四中所述洗至中性的方法优选为，先采用蒸馏水洗，再用稀醋酸洗，最后用蒸馏水洗至中性。以下实施例用于说明本专利技术的技术方案，并不对本专利技术的保护范围有任何形式的限定；实施例中所述羟基磁珠购买于洛阳惠尔纳米科技有限公司。实施例1 在Iml 10mg/ml羟基磁珠中加入6 mol/L氢氧化钠溶液充分活化后，得到含活化后羟基磁珠和碱液的混合物I ;6 mol/L氢氧化钠溶液加入量为可使混合物I的pH值达到12 ;在混合物加I中加入2ml 二甲亚砜、I ml环氧氯丙烷和4ml I mol/L氢氧化钠溶液(I ml环氧氯丙烷和4ml氢氧化钠溶液在缓慢搅拌下，14小时内分5次加入，每次间隔2.8小时)，于60°C下缓慢搅拌过夜后过夜，然后水洗、稀醋酸洗、水洗，得到的环氧活化磁珠。然后对环氧活化磁珠本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一、羟基磁珠的活化：在羟基磁珠中加入碱液进行活化，得到含活化后羟基磁珠和碱液的混合物Ⅰ，备用；所述碱液的加入量为使混合物Ⅰ的pH值达到12‑14；步骤二、环氧化：按照混合物Ⅰ、二甲亚砜、环氧氯丙烷和氢氧化钠溶液的体积比为1:2:1: 4的比例，在上述步骤一所得混合物Ⅰ中加入混合物Ⅰ、二甲亚砜、环氧氯丙烷和浓度为1 mol/L的氢氧化钠， 60℃的温度下，搅拌12‑14小时，除去溶液，所得磁珠洗至中性，即得到环氧活化磁珠，备用；步骤三、在每10mg上述上述步骤二所得环氧活化化磁珠中加入3ml碳酸氢钠溶液和2ml乙二胺，置于50℃下震荡20小时，除去溶液，所得磁珠洗至中性，得到处理后环氧活化磁珠，备用；步骤四、在每10mg上述步骤三所得处理后环氧活化磁珠中加入3 ml氢氧化钠溶液和2 ml碳酸氢钠溶液，混合均匀后加入0.1~1 g 溴乙酸，室温下搅拌10~15小时，除去溶液，所得磁珠洗至中性，得到连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：袁东，张红晓，张羽，
申请(专利权)人：洛阳理工学院，
类型：发明
国别省市：河南;41
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