提供了包含含有突变的外显子的条件Acvr1等位基因的经遗传修饰的小鼠，其在诱导后转化成突变型外显子表型，其中突变型外显子表型包括异位骨形成。提供了包含侧翼连接有位点特异性重组酶识别位点的以反义方向排列的突变型Acvr1外显示子5的小鼠，其中所述小鼠还包含识别位点特异性重组酶识别位点的位点特异性重组酶，其中所述重组酶在小鼠暴露于他莫西芬后被诱导。在暴露于他莫西芬后，所述重组酶被表达并作用于RRS‑侧翼连接的突变型外显子5，以及以有义方向放置突变型外显子5并且缺失野生型外显子。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】具有条件AcvH突变型等位基因的啮齿类动物 相关申请的交叉引用 本申请是2013年3月13日提交的US 61/778,814的非临时申请，其出于所有目 的通过引用整体并入。 以计算机可读形式存在的序列表的引用 本申请包括2014年2月21日创建的大小为1千字节的文本文件439616SEQLIST. txt (其通过引用并入）中的序列。 领域 具有Acvrl基因的突变型等位基因的经遗传修饰的非人动物；包含Acvrl基因的 条件突变体的核酸构建体；展示进行性骨化性纤维发育不全（FOP)的表型特征的非人动 物。展示异位骨形成的经遗传修饰的小鼠。含有子宫外但非子宫内表达的条件突变型ACRVl 等位基因的非人动物。 背景 Acrvl是骨形态发生蛋白（BMP)的I型受体。人Acvrl基因中的某些突变，包括产 生氨基酸修饰R206H突变的突变，与疾病进行性骨化性纤维发育不全（FOP)强相关（参见， 例如，美国专利申请公开号 2009/0253132 ;也参见，Pignolo, R.J. (2011)Fibrodysplasia Ossificans Progressiva:Clinical and Genetic Aspects,Orphanet Journal of Rare Diseases，6:80, 1-6)。R206H突变，除其它以外，据信增强受体对活化的灵敏度并且使 其对沉默更具抗性。在Acvrl中具有R206H突变的嵌合小鼠发展FOP样表型（参见，例 如，Chakkalakal 等人(2012)An Acvrl R206H knock-in mouse has fibrodysplasia ossificans progressiva, J. Bone and Mineral Res. 27:1746-1756)〇 Acvrl中的某些突变，例如导致R206H Acvrl蛋白突变的那些突变，在小鼠中是围 产期致死性的。当突变是围产期致死性时，不可能通过非人动物的种系传递包含突变的敲 入基因。例如，上述研究需要利用嵌合小鼠的工作，所述嵌合小鼠在一些细胞中具有指定的 突变，但不能在种系中传递该突变；因此，还未建立在种系中包含R206H突变的稳定且有用 的小鼠品系。仍然存在对可在种系中传递是围产期致死性的或胚胎致死性的ACRVl突变以 产生用于例如产生非人动物（其展示与ACRVl突变相关的表型例如F0P、FOP特征，或相关 病症的特征、或相关病症）的后代的非人动物的需要。 概述 提供了在它们的种系中包含含有Acvrl基因的修饰的核酸序列的经遗传修饰的 非人动物。 提供了在它们的种系中包含含有Acvrl基因的条件遗传修饰的核酸序列的经遗 传修饰的非人动物，其中所述遗传修饰使得非人动物易于异位骨形成。 提供了在它们的种系中包含含有包含条件突变型Acvrl外显子的条件遗传修饰 的核酸序列的经遗传修饰的非人动物，其中条件突变型Acvrl外显子的表达的诱导赋予非 人动物对异位骨形成的易感性。在一个实施方案中，所述突变型Acvrl外显子是外显子5。 在具体实施方案中，所述突变表达具有拥有R2026H突变的外显子5的Acvrl-编码的蛋白。 提供了条件地表达突变型Acvrl等位基因的非人动物。在不同方面，突变型Acvrl 等位基因是赋予表达所述等位基因的非人动物病理表型的等位基因。在不同方面，非人动 物包含上游和下游侧翼连接有位点特异性重组酶识别位点（SRRS)的Acvrl等位基因的突 变型外显子，并且非人动物包含识别SRRS的重组酶，其中所述重组酶是可诱导的。 提供了包含引起（在一个实施方案中，在杂合子中；在一个实施方案中，在纯合子 中）、促进非人动物异位骨化、或使非人动物对异位骨化易感的Acvrl等位基因的修饰的非 人动物。 提供了包含Acvrl等位基因的条件突变的非人动物，其中所述突变型Acvrl等位 基因不在子宫内表达，并且不在围产期表达，并且其中所述非人动物以条件方式表达突变 型Acvrl等位基因，其中所述条件表达通过向非人动物施用目标化合物来诱导。 提供了包含条件突变型外显子的修饰的Acvrl基因座，其中所述条件突变型外显 子在实验性诱导的诱导后表达。 在一个方面，提供了经遗传修饰的Acvrl基因座，其以反义方向包含突变型外显 子，在上游和下游侧翼连接SRRS。在一个实施方案中，所述基因座存在于非人动物中，所述 非人动物还包含识别侧翼连接所述突变型外显子的SRRS的诱导型重组酶基因。 在一个方面，提供了包含以反义方向含有突变型外显子的经修饰的Acvrl基因座 的非人动物，其中所述突变型外显子在上游和下游侧翼连接有RSSR，当通过识别RSSR的重 组酶作用时所述RSSR被定向来指导倒转。在一个实施方案中，所述突变型外显子在倒转后 替代Acvrl基因座的对应野生型外显子。在一个实施方案中，非人动物还包含诱导型重组 基因，其中诱导型重组酶基因的重组酶识别RSSR。在具体实施方案中，所述RSSR是Iox位 点或其变体，所述重组酶是Cre，并且所述重组酶可由他莫西芬诱导。在具体实施方案中，所 述重组酶是Cre-ERT2。在一个实施方案中，非人动物是啮齿类动物，例如小鼠或大鼠。在具 体实施方案中，啮齿类动物是大鼠，并且所述突变型Acvrl外显子是外显子5。 在一个方面，提供了包含含有编码R206H突变的突变型外显子5 (e5)的核酸构建 体的经遗传修饰的小鼠，其中所述突变型e5以反义方向存在，并在上游和下游侧翼连接有 被定向来指导突变型e5的倒转的RSSR ;并且所述小鼠包含编码能够使反义突变型e5外显 子倒转成有义方向的重组酶的诱导型重组酶基因。 在一个方面，提供了在小鼠的种系中的Acvrl基因座上包含核酸构建体的经遗传 修饰的小鼠，其中所述核酸构建体，相对于Acvr 1基因的转录方向，包含以有义方向含有 野生型型e5基因和以反义方向含有突变型e5等位基因的构建体，其中野生型e5等位基 因的上游是与正好位于反义突变型e5的下游（相对于Acvri基因的转录方向）的第二 RSSR(RSSR2)相容的第一 RSSR(RSSRl)，其中RSSRl和RSSR2被定向来指导倒转。所述构 建体还包含置于野生型e5与突变型反义e5之间的第三RSSR (RSSR3)，并且所述构建体还 包含与RSSR3相容的并且位于RSSR2的下游（相对于Acvrl基因的取向的方法）的第四 RSSR(RSSR4)，其中RSSR3和RSSR4被定向来指导倒转。每一个RSSR(l-4)被相同的诱导型 重组酶识别。 在一个实施方案中，所述诱导型重组酶存在于小鼠的种系中。 在一个实施方案中，所述RSSR位点可被Cre重组酶识别。 在一个实施方案中，RSSRl和RSSR2是1οχ2372位点；RSSR3和RSSR4是IoxP位 点，并且诱导型重组酶是CreERT2(参见，例如，图1)。 在一个实施方案中，RSSRl和RSSR2是IoxP位点；RSSR3和RSSR4是1οχ2372位 点，并且诱导型重组酶是CreERT2(参见，例如，图1)。 在一个实施方案中，CreERT2存在于R0SA26基因座（例如，Gt (R0SA26) Sor &本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种经遗传修饰的非人动物，其在其种系中包含将Acvr1基因的外显子从野生型表型突变成异位骨化表型的条件突变。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·N·艾科诺米德斯，S·J·哈特赛尔，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。