本发明专利技术公开了一种开放式培养马铃薯组培苗的霉菌抑菌剂及其使用方法。本发明专利技术采用一定浓度的次氯酸钠作为马铃薯开放式组培的抑菌剂，它对霉菌的抑制效果非常理想，而对马铃薯的生根和生长影响较小，可用于马铃薯的开放式组培，能降低马铃薯试管苗霉菌的污染，为马铃薯工厂化生产试管苗中降低污染率和生产成本提供可行方案。本发明专利技术简单易行，成本低廉，使用效果好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其是一种开放式培养马铃薯组培苗的霉菌抑菌剂。
技术介绍
马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖是马铃薯原原种生产的基础环节，在相对短的时间 内保证和提高试管苗快繁的质量对马铃薯种薯生产具有重要意义。然而，马铃薯脱毒试管 苗快繁过程中经常由于各种原因出现不同菌类的污染，如细菌、霉菌、酵母菌、放线菌等，这 些微生物生长速度快。细菌、酵母菌、放线菌污染经过2~3次转接后可以去掉污染。而霉 菌污染可直接侵入到试管苗组织内部，用一般的消毒方法很难处理，孢子的扩散会造成大 面积的污染，扩展速度很快，且扩散后继代苗仍全部表现为污染。霉菌污染后的试管苗生长 缓慢，长势弱，生根少或不生根，污染苗移栽成活率低，严重影响试管苗的生长，给生产带来 损失。为了解决马铃薯快繁过程中污染的问题，针对马铃薯脱毒试管苗快繁中控制污染发 生的研究工作，已有了一些报道。 陈亚兰（2012)以不同浓度的医用抗生素、防腐剂、化学农药为抑菌剂，培养基经高 温灭菌后直接用注射器注入抑菌物质，研究马铃薯组培苗扩繁中的抑菌效果以及对组培苗 生长及生根的影响。试验结果表明，70%甲基硫菌灵可湿性粉剂和50%多菌灵可湿性粉剂 对马铃薯组培苗生产中最常见的青霉菌、细菌和酵母菌3种菌都具有较好抑制作用，并且 对马铃薯试管苗的生长以及生根产生的负影响最小。 彭广霖等（2012)在MS培养基中分别加入5、10、20、30和40 mg / L次氯酸钠，以 马铃薯组培苗为试验材料，分析对组培苗枯草杆菌(细菌)污染的防治效果。结果表明，经过 2~3次转接后，5和10 mg / L次氯酸钠对马铃薯组培苗枯草杆菌的抑菌效果较好，该浓 度处理组的组培苗未出现污染，且苗木生长较好，但随着浓度的升高防治效果明显下降。 宿飞飞等（2012)采用平板生长抑制法，用苦参、中草药和黑农一号3种植物源杀 菌剂，对植物组织培养中青霉菌抑菌效果进行研究。分别配制成不同浓度梯度的药液，对照 为不加植物源杀菌剂的培养基，经高温高压灭菌后，准确量取一定量的药液加入到热的培 养基中。结果表明，在培养基中加入黑农一号抑菌剂抑制青霉菌的效果最好，浓度在2. 0% 时，抑菌率达100. 0%。 宿飞飞等（2010)在培养基中加入卡那霉素、青霉素、链霉素及青霉素和链霉素配 合使用的抗生素，研究抑菌剂在马铃薯快繁过程中的抑制细菌的效果。结果表明：在培养基 中加入卡那霉素、青霉素 G钠、青霉素和链霉素的混合物都能抑制细菌的污染，但青霉素各 处理不仅能抑制细菌污染，而且对试管苗的生长有明显的促进作用，其中青霉素60 mg · L- 的效果最好，同时抑菌剂的抑菌作用具有时效性。 王春（2004)在马铃薯组织培养中试验了 4种抗生素的抑菌效果。结果表明，培养 基添加20mg / L氨苄西林钠或硫酸链霉素时，能有效抑制品种大西洋试管苗的细菌性 浸染。 杨晨（2012)试验观察了不同浓度的苯甲酸钠和山梨酸钾在马铃薯脱毒试管苗快 繁中的抑菌效果。结果表明，在MS培养基中加入山梨酸钾有明显的抑菌效果，且对试管苗 的生长有明显的促进作用，其中以20 mg / L的用量效果最好。
技术实现思路
本专利技术的目的是：提供一种开放式培养马铃薯组培苗的霉菌抑菌剂及其使用方 法，它能降低马铃薯试管苗中霉菌的污染，降低污染率和生产成本。 本专利技术解决技术问题采用如下技术方案：开放式培养马铃薯组培苗的霉菌抑菌 剂，以次氯酸钠作为唯一成分。 开放式培养马铃薯组培苗的霉菌抑菌剂的使用方法，将次氯酸钠加入开放式培养 马铃薯组培苗的培养基中，使其占培养基总质量的0. 5%。 在进行开放式培养前，先采用次氯酸钠溶液对开放式培养的器具进行清洗，再用 冷开水洗涤器具，再按流程进行开放式培养。 为了验证本专利技术的技术效果，专利技术人进行了如下实验： 1试验材料 1. 1霉困 试验用的霉菌菌种是从污染的组培苗中分离获得。 1.2抑菌类试剂 大蒜素：Solarbio, Ig进口分装，培养基烧开融化或灭菌稍冷时加入，由于价高，仅用 于试验2。 新鲜大蒜：市场购买。称取50g新鲜大蒜，水果搅拌机打碎，用50ml无菌水溶 解，3层纱布过滤，再用进口的无菌过滤器过滤。大蒜素在高温下易被破坏，而失去杀菌作 用，因此培养基烧开融化或灭菌稍冷时加入，用于试验3。按大蒜约含1%的大蒜素计算 (资料来源：网讯），50g大蒜中含有0.5g (即500mg)大蒜素。通过过滤获得的溶液体积为 64ml, Iml的新鲜大蒜液中含有大蒜素7. 8mg,试验3的新鲜大蒜液用量为5ml,即含大蒜素 大约 40mg/L。 次氯酸钠：天津富宇精细化工有限公司生产，有效氯成分为彡10%，500ml装。 植培灵：上海宇涵生物科技有限公司生产，产品批号为141218, 100ml。 益培隆：上海宇涵生物科技有限公司，产品批号141015, 10g。 多菌灵 a :Aladdin, C9H9N3O2, Mff=191. 19,分析纯（％) lg，价高，仅用于试验 1。 多菌灵b :加拿大凯姆科尔生化科学(集团)有限公司生产，进口 400g装，80%WP，用 于试验2和试验3。 1.3培养基 菌类和马铃薯试管苗生长培养基均为购买的MS培养基(恒因公司购买)。 1.4马铃薯组培苗 本试验采用"费乌瑞它"突变选育5-6代稳定的株系37A、以及在西藏引进的红皮黄肉 的马铃薯"西红"组培苗为试验材料，以未加抑菌剂的原株系为对照。 试验方法与结果 2. 1试验1 2. I. 1试验日期与地点：2015年2月10日，贵州省生物技术研究所实验室。 2. I. 2试验处理设置 1) 次氯酸钠（C):浓度梯度为0. 0%(CK)，0. 005%，0. 01%，0. 02%，0. 03%;每瓶接种马铃薯 组培苗8株，每个处理5瓶（以下处理均同）； 2) 多菌灵 a(DJ) :0%(CK)，15mg/L, 30mg/L, 45mg/L, 60mg/L, 75mg/L; 3) 益培隆（Y) : 0. 0% (CK)，0. 3% (厂家推荐浓度）； 4) 植培灵（Z) :0·0%(□()，2.5ml/L (厂家推荐浓度)。 2. 1. 3培养基处理及数据统计：全部培养基用灭菌锅灭菌处理。随机抽取3瓶20 株观察株高和生根情况。 2. 1. 4试验结果 1)C 处理的株高（5.99cm)明显高于对照（5. 19 cm)、DJ (3.87cm)、Y(3. 58cm)、 Z(3. 65cm)处理。DJ处理的植株高度（3. 87cm)与对照（2. 51cm)相比略高于对照(表1)。 2) C处理随处理浓度加大植株高度逐渐增加；DJ处理的植株高度在45mg/L浓度 范围内随浓度的加大而增加，超过这个浓度，株高随浓度加大而降低(表1 )。 3)据观察，与CK相比，DJ、Y、Z 3个处理的根明显生长不良，95%以上植株的根为 0-2条，而且较短（0. 3-0. 5cm)。而C处理的根为3-8条，长度为3-5cm，与CK相近。 2. L 5第1次试验结果总结 1) 试验采用的浓度对处理间植株高度的影响差异不明显； 2) DJ、Y、Z 3个处理的根生长受抑制； 3) 全部试验没有污染。 根据第1次试验结果，调整试验设本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种开放式培养马铃薯组培苗的霉菌抑菌剂，其特征在于：以次氯酸钠作为唯一成分。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄先群，毛堂芬，李丽，刘竹梓，彭杨，
申请(专利权)人：贵州省生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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