本发明专利技术公开了一种水质在线监测用斑马鱼脱毒及敏感性评价方法，具体包括如下步骤：1)外购斑马鱼筛选；2)斑马鱼驯养；3)敏感性评价；4)驯养时间确定；5)选取按上述方法驯养后的斑马鱼用于水源水质监测。本发明专利技术通过急性毒性试验确定外购斑马鱼的合适驯养时间用于水质监测，经过“脱毒”环节后的试验鱼，敏感性提高，保证了水质监测结果的准确性和稳定性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种水源水质监测预警用市售斑马鱼的驯养、脱毒及其敏感性评价方 法，属于城市输水系统水质监测领域。
技术介绍
从上世纪20年代起，生物监测技术就开始在环境质量检测和评价中应用。生物水 质在线监测应用生物主要包括鱼类、水蚤、双层贝壳和细菌。鱼类是最早被应用于水环境污 染的生物监测物种，近年来随着城市发展的加快，水环境的污染也日益严重，基于国际认证 的斑马鱼为传感生物水质在线监测技术在国内外已被广泛应用。而目前对于水质生物综合 毒性监测预警用鱼没有统一的标准，因自行繁殖或科研院所购买成本较高，水质在线监测 所采用斑马鱼大多从市场购买，而市售斑马鱼为了提高存活率，缩短养殖时间往往喂食抗 生素、激素、饲料添加剂等促生长类物质，这些物质的使用可能会影响斑马鱼对污染物的敏 感性，影响水质监测结果的准确性和稳定性，为此本专利技术以市售斑马鱼为对象，对其进行实 验室驯养脱毒前后污染物敏感性研究，确定合适的驯养时间，筛选敏感性较高的斑马鱼在 用水源水质监测预警。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足，提供一种水质监测用 斑马鱼脱毒及敏感性评价方法，实现斑马鱼进行水质监测数据稳定性和准确性的提高。 为解决这一技术问题，本专利技术提供了一种水质在线监测用斑马鱼脱毒及敏感性评 价方法，具体包括如下步骤： 1)外购斑马鱼筛选：将外购斑马鱼放置于观察箱内观察24h，水温25°C ±2°C、连 续曝气的自来水中，期间不喂食，24h内鱼的死亡率小于10%，则此批鱼可进入养殖箱；否 则弃之不用，重新购入； 2)斑马鱼驯养：将外购斑马鱼放入水温为25°C ±2°C，连续曝气的标准试验水中， 每天开灯12h，进行喂食，清除粪便及食物残渣，进行驯养脱毒，记录斑马鱼驯养开始时间， 驯养期间发现死鱼及时捞出； 3)敏感性评价：以急性毒性试验24h、48h、72h、96h的半致死浓度LC50值作为敏 感性评价指标，取未经驯养以及驯养不同时间的斑马鱼进行本地水原水特征性污染物系列 浓度梯度暴露下急性毒性试验，按GB/T13267-91水质-物质对斑马鱼急性毒性的测定方法 进行；观察24h、48h、72h、96h等时间点各实验组鱼的死亡情况，借助统计软件SPSS计算不 同驯养时间的斑马鱼在特定污染物下24h、48h、72h、96h的半致死率LC50值； 以未驯养斑马鱼为对照组，利用SPSS软件显著性分析检验不同驯养时间鱼的 LC50值与对照组的差异性，当p>0. 05时，认为无显著性差异；0. 01〈p < 0. 05时，认为差异 显著；P < 0. 01时，差异性极显著； 4)驯养时间确定：若驯养时间的LC50值与对照组相比无显著性差异，则继续驯 养，选取下一个驯养时间的LC50值与对照组相比，若仍无显著性差异，重复上述过程，直到 驯养时间η的LC50值与对照组相比，差异显著或驯养时间达到30天则停止该过程；若驯养 时间达到30天LC50值与对照组相比无显著性差异则停止驯养； 若驯养时间η的LC50值与对照组相比，差异显著，同时与驯养时间η+1的LC50值 相比，无显著性差异，则停止驯养； 若驯养时间η的LC50值与对照组相比，差异显著，而与驯养时间η+1的LC50值相 比，仍差异显著，则选取驯养时间η+1与驯养时间η+2进行差异性分析，直到驯养时间N的 LC50值与对照组相比，差异显著，同时与驯养时间Ν+1的LC50值相比，无显著性差异，则停 止驯养； 5)选取按上述方法驯养后的斑马鱼用于水源水质监测。 所述步骤2)斑马鱼驯养中所用的标准试验水，含有0· 22mg/L CaCl2、0. 06mg/L MgS04、0. 06mg/LNaHC03、0. 006mg/LKCl，pH 为 7· 6±0· 2。 所述步骤2)斑马鱼驯养中斑马鱼驯养期间，所喂食食物可为丰年虾，实验室自制 固体食物或者市售不含抗生素及激素类促生长物质的饵料，试验前24h及试验中不喂食。 所述步骤3)敏感性评价方法中特定污染物的选择应根据本地水质特征，选取有 代表性或有突发的风险的污染物进行暴露试验。 所述步骤2)斑马鱼驯养中斑马鱼驯养期间，斑马鱼鱼苗的死亡率高于10%，则需 更换一批新鱼进行驯养。 有益效果：本专利技术通过急性毒性试验确定外购斑马鱼的合适驯养时间用于水质监 测，经过"脱毒"环节后的试验鱼，敏感性提高，保证了水质监测结果的准确性和稳定性。【具体实施方式】 为了理解本专利技术，下面以实施例进一步说明本专利技术，但本专利技术并不限制于此。 本专利技术的在线监测用斑马鱼脱毒及敏感性评价方法，具体包括如下步骤： (1)购得斑马鱼一批，观察箱内24h死亡率小于10%，进入养殖箱，记录时间； (2) -部分用于急性毒性试验研究，剩余的放入实验室水温25°C ±2°C，连续曝 气的标准试验水中驯养，每天喂食、清除粪便及食物残渣，喂食丰年虾及实验室自制固体食 物； (3)选取Zn' Cr6+、马拉硫磷、苯酚四种污染物进行外购斑马鱼急性毒性试验，方 法按照GB/T13267-91水质-物质对淡水鱼（斑马鱼）急性毒性规定进行，污染物浓度设定 参照表1 ; 表1急性毒性试验浓度梯度设定 (3)分别采用实验室驯养15d、30d的斑马鱼参考步骤⑵进行四种污染物的急性 毒性试验，试验前24h停止喂食； (4)观察急性毒性试验中24h、48h、96h等时间点各实验组鱼的死亡情况，借助数 理统计软件SPSS计算不同驯养时间的斑马鱼在特定污染物下24h、48h、96h的半致死率 LC50 值； (5)根据0d、15d、30d的LC50,选取合适的水质监测用斑马鱼的驯养时间； (6)整个30d的驯养期此批斑马鱼的死亡率低于10%;否则此批斑马鱼弃之不用； (7)结果见表2,四种污染物暴露下，驯养15d、30d的斑马鱼LC50值较驯养0天比 均有降低，说明斑马鱼对污染物的敏感性提高，通过SPSS软件分析驯养Od和15d、30d的 LC50值有显著性差异，而15d、30d的LC50无显著性差异，得出外购斑马鱼需在实验室驯养 30天以后用于水质监测方可取得更为准确的结果。 表 2 本专利技术上述实施方案，只是举例说明，不是仅有的，所有在本专利技术范围内或等同本 专利技术的范围内的改变均被本专利技术包围。【主权项】1. ，其特征在于，具体包括如下步 骤： 1) 外购斑马鱼筛选：将外购斑马鱼放置于观察箱内观察24h，水温25°C ±2°C、连续曝 气的自来水中，期间不喂食，24h内鱼的死亡率小于10%，则此批鱼可进入养殖箱；否则弃 之不用，重新购入； 2) 斑马鱼驯养：将外购斑马鱼放入水温为25°C ±2°C，连续曝气的标准试验水中，每天 开灯12h，进行喂食，清除粪便及食物残渣，进行驯养脱毒，记录斑马鱼驯养开始时间，驯养 期间发现死鱼及时捞出； 3) 敏感性评价：以急性毒性试验24h、48h、72h、96h的半致死浓度LC50值作为敏感性 评价指标，取未经驯养以及驯养不同时间的斑马鱼进行本地水原水特征性污染物系列浓度 梯度暴露下急性毒性试验，按GB/T13267-91水质-物质对斑马鱼急性毒性的测定方法进 行；观察24h、48h、72h、96h等时间点各实验组鱼本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种水质在线监测用斑马鱼脱毒及敏感性评价方法，其特征在于，具体包括如下步骤：1)外购斑马鱼筛选：将外购斑马鱼放置于观察箱内观察24h，水温25℃±2℃、连续曝气的自来水中，期间不喂食，24h内鱼的死亡率小于10％，则此批鱼可进入养殖箱；否则弃之不用，重新购入；2)斑马鱼驯养：将外购斑马鱼放入水温为25℃±2℃，连续曝气的标准试验水中，每天开灯12h，进行喂食，清除粪便及食物残渣，进行驯养脱毒，记录斑马鱼驯养开始时间，驯养期间发现死鱼及时捞出；3)敏感性评价：以急性毒性试验24h、48h、72h、96h的半致死浓度LC50值作为敏感性评价指标，取未经驯养以及驯养不同时间的斑马鱼进行本地水原水特征性污染物系列浓度梯度暴露下急性毒性试验，按GB/T13267‑91水质‑物质对斑马鱼急性毒性的测定方法进行；观察24h、48h、72h、96h等时间点各实验组鱼的死亡情况，借助统计软件SPSS计算不同驯养时间的斑马鱼在特定污染物下24h、48h、72h、96h的半致死率LC50值；以未驯养斑马鱼为对照组，利用SPSS软件显著性分析检验不同驯养时间鱼的LC50值与对照组的差异性，当p>0.05时，认为无显著性差异；0.01<p≤0.05时，认为差异显著；p≤0.01时，差异性极显著；4)驯养时间确定：若驯养时间的LC50值与对照组相比无显著性差异，则继续驯养，选取下一个驯养时间的LC50值与对照组相比，若仍无显著性差异，重复上述过程，直到驯养时间n的LC50值与对照组相比，差异显著或驯养时间达到30天则停止该过程；若驯养时间达到30天LC50值与对照组相比无显著性差异则停止驯养；若驯养时间n的LC50值与对照组相比，差异显著，同时与驯养时间n+1的LC50值相比，无显著性差异，则停止驯养；若驯养时间n的LC50值与对照组相比，差异显著，而与驯养时间n+1的LC50值相比，仍差异显著，则选取驯养时间n+1与驯养时间n+2进行差异性分析，直到驯养时间N的LC50值与对照组相比，差异显著，同时与驯养时间N+1的LC50值相比，无显著性差异，则停止驯养；5)选取按上述方法驯养后的斑马鱼用于水源水质监测。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：贾瑞宝，逯南南，孙韶华，宋武昌，马中雨，
申请(专利权)人：山东省城市供排水水质监测中心，
类型：发明
国别省市：山东;37
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