一种血清铁蛋白含量检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，具有准确度高、抗干扰能力强等特点。其包括试剂R1、试剂R2和铁蛋白标准品；试剂R1的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，促凝剂：0.5-5wt％；试剂R2的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，金属螯合剂：3-10mM，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，保护剂：3-10wt％，铁蛋白单克隆抗体F(ab’)2片段致敏的纳米胶乳微粒：0.05-0.5wt％。

【技术实现步骤摘要】
一种血清铁蛋白含量检测试剂盒
本专利技术涉及一种试剂盒，尤其涉及一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，属于医学检测

技术介绍
血清铁蛋白(serumferritsn，SF)简称铁蛋白，是广泛存在于生物机体内的一种贮存铁的可溶组织蛋白，由一个蛋白质外壳和一个铁核心构成。SF的铁核心具有强大的结合铁和贮存铁的能力，以维持机体铁的供应和血红蛋白的相对稳定。研究表明，血清铁蛋白的含量与机体储存铁是成一定比例的，lug/L的血清铁蛋白对应于8-l0mg或每公斤体重120ug储存铁。血清铁蛋白作为一个生物标志物在医学检验中最常应用于评价体内储存铁的状况及诊断缺铁性贫血。不同的检测方法确定的正常参考值都有所差别，通常成年男性血清铁蛋白的正常参考值都在30-300ng/mL左右，成年女性血清铁蛋白的正常参考值在10-160ng/mL左右，血清铁蛋白水平在妊娠期及急性贫血时降低。临床上血清铁蛋白的检测能甄别出缺铁的早期阶段，从而能尽早地采取调整膳食结构或补充铁剂等措施，预防缺铁性贫血的发生。肝脏是合成和储存铁蛋白的主要场所，当肝脏发生炎症，其代谢就发生障碍，铁蛋白随之发生变化。一般肝炎急性期、慢性肝炎活动期、肝硬化活动期，血清铁蛋白显著增高。而且肝细胞损伤越严重，其含量越高。国内报道肝癌患者阳性率高达90％。肝癌患者治疗有效者血清铁蛋白下降，而恶化和再发者升高，持续增高则予后不良，故血清铁蛋白测定可作为疗效监测手段之一。血清铁蛋白还是一个非特异性的肿瘤标志物，如患肝癌、肺癌、胰癌、白血病等时，癌细胞合成的铁蛋白增加，均能使血清铁蛋白升高。目前，定量检测SF的方法主要有放射免疫分析法、酶联免疫分析法、时间分辨焚光免疫分析法、胶体金法和化学发光免疫分析法。每种检测方法都有各自的优势，但在检测准确度、耗时、安全性、检测价格及操作等方面又存在一定局限性，限制了以上检测方法的广泛应用。
技术实现思路
本专利技术目的是为了提供一种准确度高、重复性好、抗干扰能力强、线性范围宽的血清铁蛋白含量检测试剂盒。本专利技术的上述目的可通过下列技术方案来实现：一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，试剂盒包括试剂R1、试剂R2和铁蛋白标准品；试剂R1的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，促凝剂：0.5-5wt％；试剂R2的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，金属螯合剂：3-10mM，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，保护剂：3-10wt％，铁蛋白单克隆抗体F(ab’)2片段致敏的纳米胶乳微粒：0.05-0.5wt％。本专利技术中试剂R1是以5-50mM的缓冲液为母液，向母液中加入电解质、封闭剂、表面活性剂、防腐剂和促凝剂配制而成。本专利技术中试剂R2是以5-50mM的缓冲液为母液，向母液中加入电解质、封闭剂、金属螯合剂、表面活性剂、防腐剂、保护剂和铁蛋白单克隆抗体F(ab’)2片段致敏的纳米胶乳微粒配制而成。在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，铁蛋白标准品为用标准品稀释液稀释至100-1000ng/mL的。在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，标准品稀释液的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，BSA：0.5-3wt％，金属螯合剂：3-10mM，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，保护剂：3-10wt％。本专利技术中标准品稀释液是以5-50mM的缓冲液为母液，向母液中加入电解质、BSA、金属螯合剂、表面活性剂、防腐剂和保护剂配制而成。在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，标准品稀释液的pH为7-8。在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，试剂R1和试剂R2的pH均为7-8。作为优选，试剂R1、试剂R2和标准品稀释剂中的缓冲液均为醋酸-醋酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液或2-吗啉乙磺酸缓冲液中的一种。进一步优选为磷酸盐缓冲液。作为优选，试剂R1、试剂R2和标准品稀释剂中的电解质均为氯化钠、氯化钙中的一种。进一步优选为氯化钠。作为优选，试剂R1、试剂R2的封闭剂均为BSA、酪蛋白、明胶、马血清、与偶联抗体不同来源的IgG中的一种。作为优选，试剂R1、试剂R2和标准品稀释剂中的表明活性剂均为TritonX-100、吐温-20或布里杰-35中的一种。进一步优选为吐温-20。作为优选，试剂R1、试剂R2和标准品稀释剂中的防腐剂均为叠氮钠或proclin系列中的一种。作为优选，试剂R1中的促凝剂为PEG2000、PEG4000、PEG6000、PEG8000、硫酸葡聚糖钠中的一种。进一步优选为PEG6000。作为优选，试剂R2和标准品稀释剂中的金属螯合剂均为EDTA。作为优选，试剂R2和标准品稀释剂中的保护剂均为葡萄糖、蔗糖、海藻糖中的一种。在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，铁蛋白单克隆抗体F(ab’)2片段致敏的纳米胶乳微粒通过将两株配对的铁蛋白单克隆抗体分别经过酶切、纯化后获得的F(ab’)2片段与纳米胶乳微粒偶联后得到。在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，纳米胶乳微粒的粒径为50-300nm。进一步优选为200nm。在上述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒中，纳米胶乳微粒为表面带有羧基功能基团的聚苯乙烯胶乳微粒。本专利技术采用化学交联方法，将具有高特异性、高亲和力的铁蛋白抗体偶联至聚苯乙烯胶乳微粒表面的羧基官能团上，当此微球与含有待测样本混合时，在合适的反应条件下，抗体与样本中抗原特异结合，形成抗原-抗体-胶乳微粒复合物，在短时间内迅速聚集在一起，改变反应液的散光或透光性能，并且在一定范围内，反应液吸光度值变化与待测样本中的抗原含量成正比关系，利用标准品绘制标准曲线，便可根据样本吸光度值变化测定待测物含量。利用IgG抗体制备免疫比浊试剂的一个限制是易于受到测试样品类风湿因子引起的干扰。类风湿因子(RF)是抗人IgG分子Fc片段上抗原决定族的特异性抗体。大多动物来源的IgG类抗体，Fc段与人IgG的Fc段具有较高的同源性，能被RF识别并结合，所以在待测物质为阴性、RF阳性的检测样本中，免疫检测试剂有可能被RF捕获产生信号，从而导致假阳性结果。胃蛋白酶能酶切作用于IgG抗体连接两重链的二硫键靠C端处，使IgG抗体裂解成F(ab’)2片段和Fc片段。F(ab’)2片段由两个Fab’片段通过二硫键连接，保留了抗体的结合点。经过proteinG亲和纯化获得的F(ab’)2片段与IgG相比，F(ab’)2的特点是去掉了Fc段包括其被类风湿因子识别的位点，因此用F(ab’)2片段制备的胶乳增强免疫比浊试剂就不会受到类风湿因子的干扰，提高检测的准确度与特异性。与现有技术相比，本专利技术利用胶乳增强免疫比浊法研制的血清铁蛋白含量检测试剂盒具有准确度高、重复性好、抗干扰能力强、线性范围宽等特点，并能在多种全自动生化分析仪、特种蛋白分析仪上使用，更利于SF检测试剂盒在临床上的推广应用。附图说明图1为本专利技术实施例1血清铁蛋白含量检测试剂盒的定标曲线；图2为本专利技术实施例1血清铁蛋白含量检测试剂盒的线性范围曲线；图3为本专利技术实施例1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和铁蛋白标准品；所述试剂R1的组分为：缓冲液：5‑50mM，电解质：100‑200mM，封闭剂：0.5‑3wt％，表面活性剂：0.05‑0.5wt％，防腐剂：0.05‑0.5wt％，促凝剂：0.5‑5wt％；所述试剂R2的组分为：缓冲液：5‑50mM，电解质：100‑200mM，封闭剂：0.5‑3wt％，金属螯合剂：3‑10mM，表面活性剂：0.05‑0.5wt％，防腐剂：0.05‑0.5wt％，保护剂：3‑10wt％，铁蛋白单克隆抗体F(ab’)2片段致敏的纳米胶乳微粒：0.05‑0.5wt％。

【技术特征摘要】
1.一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和铁蛋白标准品；试剂R1的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，促凝剂：0.5-5wt％；试剂R2的组分为：缓冲液：5-50mM，电解质：100-200mM，封闭剂：0.5-3wt％，金属螯合剂：3-10mM，表面活性剂：0.05-0.5wt％，防腐剂：0.05-0.5wt％，保护剂：3-10wt％，铁蛋白单克隆抗体F(ab’)2片段致敏的纳米胶乳微粒：0.05-0.5wt％；其中铁蛋白单克隆抗体F(ab’)2片段致敏的纳米胶乳微粒通过将两株配对的铁蛋白单克隆抗体分别经过酶切、纯化后获得的F(ab’)2片段与纳米胶乳微粒偶联后得到。2.根据权利要求1所述的一种血清铁蛋白含量检测试剂盒，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈媛，许琴，陈思思，方蓉，张闻，周海滨，王建飞，
申请(专利权)人：宁波瑞源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33