一方面，本发明专利技术提供了一种多肽，所述多肽包含修饰的血管生成素受体或其片段，其中与血管生成素-1相比，所述多肽优先与血管生成素-2结合。本发明专利技术还提供了编码所述多肽的核酸序列，以及所述多肽在治疗疾病例如癌症和炎症上的药物用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】血管生成素-2特异性Tie2受体 领域 本专利技术涉及用于治疗人和动物的疾病的多肽。具体而言，本专利技术涉及血管生成素-2的 多肽抑制剂以及它们在治疗疾病例如癌症中的用途。 背景 血管生成素-2 (Ang2)为70kDa分泌型配体，它的表达增加涉及一系列的疾病，包括癌 症、脓毒症和成人呼吸窘迫综合征（1、2)。Ang2的主要受体为跨膜酪氨酸激酶Tie2 (3)， 其主要在血管内皮细胞和骨髓细胞上表达（1、4 )。Ang2在发育期间的血管重塑中起重要作 用，但在成人组织中Ang2的浓度通常很低。在疾病中Ang2水平的增加使该分子与相关的 激动剂Angl竞争结合Tie2上的共界面（3)。Angl为保护性蛋白质，其由血管周细胞组成 性产生，其通过抑制炎症、脉管渗漏和内皮细胞死亡来维持血管作用和静止（1、5 )。Ang2对 Angl的拮抗阻止Angl的前静止作用并且有助于Ang2诱导的血管重塑、炎症、渗漏和水肿。 除了对内皮Tie2的作用外，Ang2具有与疾病相关的许多其它效应。例如，目前已显示所述 配体结合并活化内皮整联蛋白以促进出芽式血管生成（6 )，并且Ang2对表达肿瘤侵润Tie2 的单核细胞起作用以促进肿瘤发生（7、8 )。 由于其参与多种疾病过程，已有大量的工作投入到开发Ang2的抑制剂中，所述抑 制剂包括抗体和适体（9-11)。这些以及相关分子的研究结果已是令人鼓舞的，报导指出 Ang2抑制剂促进肿瘤的退化并抑制癌症中的转移性疾病，和在气道炎症中降低白细胞浸润 以及血管重塑（7、10、12、13)。 作为使用用于阻断配体病理水平的抗体的补充方法为细胞因子或配体捕获（14)。 这些分子由受体胞外域片段形成，通常作为可溶性融合蛋白施用，其隐蔽靶配体。在临床应 用中的配体捕获的实例包括依那西普(一种可溶型肿瘤坏死因子-a受体）和阿柏西普(一 种血管内皮生长因子受体-1和血管内皮生长因子受体-2的片段的嵌合融合蛋白）（15)。 配体捕获有显著的益处。通常它们比抗体更小并且具有更好的组织渗透性，它们已识别靶 的生物活性部分，并且通常不需要来自免疫系统的保护。Ang2的特异性配体捕获会是具有 吸引力的治疗剂。然而Ang2的天然受体，Tie2,和Ang2 -样与保护性配体Angl良好结合， 或甚至更好（3、16、17)。 工程改造新蛋白功能的最有效策略之一为定向蛋白进化（18、19)。该方法实质 上概括了在自然进化中历经数百万年，而在实验室内经过数周发生的期望突变的选择和积 累。定向进化包括重复多轮的文库构建，通常在体外，靶蛋白突变形式的表达和选择。不幸 地是，序列空间体外产生和搜索的这种重复方法通常很困难并且为劳动密集的。通过体细 胞超突变（SHM) (20)使它们的免疫球蛋白可变（IgV)区组成性多样化的B细胞系使得新型 抗体特异性的多样化和选择相关联。在Ig基因内的遗传变异，其通过活化诱导的脱氨基酶 (AID)的作用被引入，与在个体细胞上的表面Ig的选择表达相关联（21)。最近已使用这类 细胞系来进化外源性表达的绿荧光蛋白的变体（22、23)。然而，若可在B系中选择期望的表 现型，则理论上该策略对于各种各样的蛋白的定向进化具有巨大的潜力。 因此仍然需要Ang2的改善的抑制剂。具体而言，存在对能够区分Ang2和Angl的 多肽血管生成素抑制剂的需要。
技术实现思路
一方面，本公开提供了一种多肽，其包含修饰的血管生成素受体或其片段，其中与结合 血管生成素-1相比，所述多肽优先结合血管生成素-2。 在一个实施方案中，所述血管生成素受体为Tie2。优选地所述多肽包含修饰的 Tie2胞外域。 在一个实施方案中，所述多肽包含人Tie2的变体，所述变体包含相对于SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:2或它们的片段的1至30个氨基酸变异。 在另一个实施方案中，所述多肽包含SEQ ID N0:2或SEQ ID NO: 1的残基23-210 的变体，与SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 1的残基23-210相比，所述变体包含1至30个氨基 酸取代、缺失或插入。 在另一个实施方案中，所述多肽与SEQ ID NO: 1或SEQ ID N0:2中的至少50个氨 基酸残基具有至少90%序列同一性。 所述多肽优选包含相对于SEQ ID NO: 1或SEQ ID N0:2或其片段的一个或多个 突变，所述突变选自以下：F161G、F161I、AR167、AH168、V154L、P171A、E169D、V170I 和 T226S〇 在优选的实施方案中，所述多肽包含突变F161I。在另一个优选的实施方案中，所 述多肽包含突变F161G。在另一个优选的实施方案中，所述多肽包含突变AR167/AH168。 在一个特别优选的实施方案中，所述多肽包含突变F161I、AR167和AH168。在另一个特 别优选的实施方案中，所述多肽包含突变F161G、AR167和AH168。 在一个实施方案中，所述多肽与SEQ ID N0:3的至少50个氨基酸残基具有至少 90%序列同一性，例如所述多肽可包含SEQ ID N0:3的至少50个氨基酸残基。 在某些实施方案中，如上文所述的片段长度为至少50个氨基酸残基。 在一个实施方案中，所述多肽以至少10:1的亲和比率与Ang2和Angl结合。例如， 所述多肽可以小于10nM的心与Ang2结合，和/或所述多肽可以大于1yM的K,与Angl结 合。 在另一个方面，本专利技术提供编码如上文所述的多肽的核酸。 在一个实施方案中，所述核酸包含SEQ IDN0:4或SEQ IDN0:5或它们的一部分 的变体，所述变体包含一个或多个核苷酸取代、缺失或插入，如图9或图10A中所示。 在另一个方面，本专利技术提供包含如上文所述的核酸的表达载体。 在另一个方面，本专利技术提供包含如上文所述的表达载体的宿主细胞。 在另一个方面，本专利技术提供药物组合物，所述药物组合物包含如上文所述的多肽 或核酸以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。 在另一个方面，本专利技术提供如上文所述的多肽、核酸或药物组合物，其用于预防或 治疗血管生成素-2-介导的疾病或病症。 在另一个方面，本专利技术提供如上文所述的多肽、核酸或药物组合物的用途，其用于 制备预防或治疗血管生成素-2-介导的疾病或病症的药物。 在另一个方面，本专利技术提供预防或治疗有其需要的个体的血管生成素-2-介导的 疾病或病症的方法，所述方法包括向所述个体施用药物有效量的如上文所述的多肽、核酸 或药物组合物。 在一个实施方案中，所述疾病或病症为癌症、炎症、脓毒症、血管生成、水肿、视网 膜病、老年黄斑变性或高血压。 本专利技术的实施方案提供Tie2胞外域的变体形式，其优选结合Ang2并且可被用来 阻断该配体的破坏作用，而并不抑制Angl的保护性作用。这通过结合SHM驱动的基因多样 化与在B细胞系内的表面展示以进化具有优先结合Ang2的Tie2胞外域的形式而实现。 附图简述 图1.受体胞外域的定向进化。（A)在超突变的B细胞内的定向进化策略。（B)人Angl 和Ang2的受体结合P-结构域的比对。（C)结合Tie2的残基1-442并用于定向进化的表面 表达构建物的示意性呈现。（D)用表面表达构本文档来自技高网...
【技术保护点】
多肽，所述多肽包含修饰的血管生成素受体或其片段，其中与结合血管生成素‑1相比，所述多肽优先结合血管生成素‑2。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：NPJ布林德尔，JE塞尔，
申请(专利权)人：医疗研究局，莱斯特大学，
类型：发明
国别省市：英国;GB
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