本发明专利技术提供了一种识别HPV16阳性宫颈组织的兔源单克隆抗体及其应用，该抗体能够高特异性地检测到组织(包括宫颈癌和宫颈病变)中的生物标志HPV16E7蛋白，从而能够区分与HPV持续感染相关的宫颈癌变组织和宫颈异常或非癌变宫颈上皮组织，可准确诊断高危HPV感染所导致的宫颈癌，特别是能够对早期宫颈病变是否恶变进行风险预警。可有效降低宫颈病变的漏诊率，并改善过度治疗对病人带来的伤害及资源浪费。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物诊断及医药领域，具体地说，本专利技术涉及宫颈癌及宫颈病变组织 中HPV16E7蛋白的鉴定和早期风险预警。
技术介绍
宫颈癌是女性生殖系统的常见恶性肿瘤，位居女性恶性肿瘤第二位，晚期癌5年 生存率低，在世界范围内具有较高的发病率和死亡率。1976年zurHansen提出人乳头瘤病 毒（HPV)可能是性传播致癌因素，并开始研究HPV与宫颈癌之间的关系。目前，许多流行病 学已证实HPV是导致宫颈癌的元凶，还可以引起多种其它肿瘤，包括生殖道、乳腺、消化道 及呼吸道癌症。zurHansen也因此于2008年获得诺贝尔生理学或医学奖。HPV近年来在 我国人群中的传播有增无减，故宫颈癌预防、治疗的研究工作非常重要。 80%的女性在其一生中都会感染HPV病毒，大多数HPV感染在1-2年内会被自 身免疫系统所清除，而持续存在的HPV感染将会演变为高度宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelialneoplasia，CIN)损伤，如CINII和CINIII，甚至进一步演变为宫颈癌。 据统计，约20%的低度宫颈损伤将转变为高度损伤，如果不及时治疗，其中30 %将会进一 步转为恶性肿瘤。多数中晚期子宫颈癌的病理形态显而易见，诊断并不困难。但是，对于 早期子宫颈癌，及其癌前病变的诊断至今依然是研究的重点。在正常宫颈上皮一CIN-宫 颈癌这一进展过程中，除发生了组织学、细胞学形态的相应改变，某些基因结构、功能等都 会发生变化，这些基因可作为这一进展中的分子标志，以便早期发现、诊断CIN和宫颈癌。 如Ki67、pl6INK4A、，hTERT等随CIN级别增高而表达增加（ValentinaF，RenzoB，Serena B，etal.,DetectionofHPVE7Oncoviralproteinincervicallesionsbyanew antibody.ApplimmunohistochemMolMorphol, 2013, 21 (4) : 341-350)。近年来研究显不， 抑癌基因？16??在大部分宫颈癌和癌前病变中过表达，认为可将pl6 ??蛋白作为一种生 物学标志物进行宫颈癌的早期筛查。HPV持续感染是引起宫颈上皮内癌变的主要病毒致病因素，高危型HPV16和18是 宫颈鳞状上皮癌中检出率最高的亚型。新近一些研究显示，pl6INK4A的过表达与HPV持续 感染和宫颈癌密切相关（KalofAN，CooperK.，pl6INK4aimmunoexpression:surrogate markerofhigh-riskHPVandhigh-gradecervicalintraepithelialneoplasia.Adv AnatPathol.2006Jul;13(4):190-4.)D癌症发生过程中病毒DNA整合入人体细胞基因组 内，随着E7蛋白表达控制的缺失将持续表达病毒致癌蛋白E7,使细胞持续分化和发生癌前 病变，导致细胞调控失控，发生永生化。E7蛋白可优先与视网膜母细胞癌蛋白pRAB结合并 使其失活。由于P16 ^4"与pRAB质检存在负反馈调节，HPVE7蛋白是pRAB失活后，使得 pRAB对pl6INK4%负反馈调节作用丧失，从而导致pl6 ??在HPV感染阳性的宫颈鳞癌中有 很高的阳性表达率。2012年7月，美国病理学家协会（CAP)和美国阴道镜和宫颈病理学会 (ASCCP)指南指出，pl6可作为反映HPVE6/E7影响细胞增殖的标志物，有足够证据表明能 够用于低级别肛门-生殖道鳞状上皮病变相关推荐，建议使用特定克隆号（E6H4)的pl6INK4a 抗体作为检测HPV感染是否影响到细胞周期调控的生物标志物。该克隆号是全球唯一获得IVD认证的pl6INK4a抗体。罗氏诊断CINtec组织学pl6 (包含pl6抗体E6H4)已于2014年 5月在中国上市。因此，在HPV感染导致的高度宫颈非典型增生和宫颈癌病人的上皮细胞内 持续表达的E7蛋白，在宫颈癌的发病机制中位于pl6INK4a的上游，其本身也可作为高度宫颈 损伤和宫颈癌检测的一个肿瘤标志物。目前宫颈组织常用的诊断方法是苏木精-伊红染色法（H&E)，尽管H&E判读是目 前对CIN进行分级的标准，但易受到病理医师主观因素以及宫颈上皮化生、萎缩、修复的变 化等因素的影响，进而导致H&E判读的重复性差、诊断准确度不够高。临床上迫切需要更 客观、更准确的诊断标准。临床HPVE7检测目前没有合适的抗体主要有两个原因：1、HPV 蛋白在临床组织或细胞样本中表达量较低，需要高亲和力的抗体进行检测；2,HPV病毒在 现有的标准组织培养技术下不能在实验室培养存活；3,E7蛋白本身存在免疫抑制，使得采 用E7蛋白免疫动物不能获得很好的免疫反应。在这种情况下我们提供一种HPV16E7蛋白 的单隆抗体及检测HPVE7过表达的方法。该单克隆抗体能够特异的结合肿瘤细胞内源的 HPV16/18E7蛋白。诊断CINI、CINII和CINIII必须依据H&E的形态判断，借助于本方 法通过检测生物标志物E7蛋白能够准确地了解癌前病变，提高CIN等级判读的准确性，确 保对患者进行准确的分流以采取适当的随访、治疗措施。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种识别HPV16E7蛋白的单隆抗体及在宫颈癌检测和风 险预警中的应用。 在本专利技术的第一方面，提供了一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区包括以 下三个互补决定区⑶R:SEQIDN0. :4 所示的CDR1，SEQIDN0. :6 所示的CDR2,和SEQIDN0. :8 所示的CDR3。 在另一优选例中，所述重链可变区具有SEQIDN0. : 10所示的氨基酸序列。 本专利技术的第二方面，提供了一种抗体的重链，所述的重链具有如本专利技术第一方面 所述的重链可变区，和 重链恒定区。 在另一优选例中，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源。 本专利技术的第三方面，提供了一种抗体的轻链可变区，所述轻链可变区具有选自下 组的互补决定区⑶R:SEQIDN0. : 12 所示的CDR1'，SEQIDN0. : 14 所示的CDR2'，和SEQIDN0. : 16 所示的CDR3'。 在另一优选例中，所述的轻链可变区具有SEQID N0. : 18所示的氨基酸序列。 本专利技术的第四方面，提供了一种抗体的轻链，所述的轻链具有如本专利技术第三方面 所述的轻链可变区，和 轻链恒定区。 在另一优选例中，所述的轻链恒定区为人源、鼠源或兔源。 本专利技术的第五方面，提供了一种抗体，所述抗体具有： (1)如本专利技术第一方面所述的重链可变区；和/或 (2)如本专利技术第三方面所述的轻链可变区。 在另一优选例中，所述抗体具有：如本专利技术第二方面所述的重链；和/或如本专利技术 第四方面所述的轻链。 在另一优选例中，所述的抗体为特异性抗HPV的抗体；优选地，所述抗体为特异性 抗HPV16的抗体；更优选地，所述抗体为特异性抗HPV16E7蛋白的抗体。较佳地，所述抗体 还具有特异性抗HPV18E7蛋白的功能。 在另一优选例中，所述的抗体包括：单链抗体、双链抗体、单克隆抗体、嵌合抗体 (如人兔嵌合抗体）、鼠源抗体、兔源抗体或人源化抗体。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗体的重链可变区，其特征在于，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQ ID NO.:4所示的CDR1，SEQ ID NO.:6所示的CDR2，和SEQ ID NO.:8所示的CDR3；优选地，所述重链可变区具有SEQ ID NO.:10所示的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：常小迦，时成龙，韩凤丽，施丽君，
申请(专利权)人：艾托金生物医药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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