本发明专利技术公开了Turrapubin A在制备神经保护药物中的应用，属于药物领域。研究发现应用20μmol/LAβ25-35能有效建立体外培养的大鼠嗜铬瘤细胞株PC12凋亡模型；Turrapubin A能部分对抗Aβ25-35诱导的PC12凋亡，可以进一步研究开发成制备神经保护的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化合物TurrapubinA的新用途，具体涉及TurrapubinA在制备神经 保护药物中的应用。
技术介绍
Chun-MaoYuan等人首次分离纯化出化合物TurrapubinA，并将成果发表在著 名天然产物杂志（BioactiveLimonoidandTriterpenoidConstituentsofTurraea pubescens，J.Nat.Prod.，2013, 76,1166-1174)〇 目前尚未有该化合物关于神经保护的活性报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种TurrapubinA的医药用途。 上述目的是通过如下技术方案实现的： TurrapubinA在制备神经保护药物中的应用，所述TurrapubinA化学结构式如 下， 【附图说明】 图1 :MTT代谢率检测A25 35对PC12细胞的毒性作用； 图2:A0 25 35对PC12细胞LDH释放率的影响； 图3:A0 25 35和/或TurrapubinA对PC12细胞LDH释放率的影响。【具体实施方式】 下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容。 实施例1:TurrapubinA的分离制备及结构确证 TurrapubinA的制备方法同文献报道的制备方法（BioactiveLimonoidand TriterpenoidConstituentsofTurraeapubescens，J.Nat.Prod.，2013,76,1166-1174)〇 结构确证：白色无定形粉末，HR-ES頂S显示+m/z为637. 2633,分子式为 C33H420n，不饱和度为13。红外光谱表明化合物含有羟基（3441cm3和羰基1735cm3基团。 核磁共振氢谱数据 8H(ppm，DMS0-d6,600MHz) :H-1 (5. 54,d，J= 3. 8)，H-2(2. 47,dd，J= 14. 7, 3. 8)，H-2 (2. 98,m)，H-5 (2. 38,m)，H-6 (2. 27,m)，H-6 (3. 31，d，J= 18. 8)，H-9 (3. 37， d，J= 7.0)，H-ll(5.36,dd，J= 7.0,11.5)，H-12 (5.68,d，J= 11.5)，H-15 (3. 75， s)，H-16(l. 83,dd，J= 11. 6,13. 8)，H-16(2. 20,dd，J= 13. 8,6. 4)，H-17(2. 98,m)， H-18 (0? 87,s)，H-19 (1. 68,s)，H-21 (7. 02,s)，H-22 (6. 05,s)，H-23 (7. 29,s)，H-28 (0? 96， d)，H-29(l. 08,s)，H-30(5. 04,s)，H-30(5. 39,s)，7-0Me(3. 58,s)，l-〇Ac(l. 91，s)， 11- 0Ac(1.97，s)，12-0Ac(1.75，s);核磁共振碳谱数据Sc(ppm，DMS0-d6，150Hz) :78.4(CH， 1-C)，37. 0(CH2, 2-C)，211. 8 (C，3-C)，49. 1 (C，4-C)，44. 8(CH，5-C)，31. 7 (CH2,6-C)， 174. 5(C，7-C)，134. 1 (C，8-C)，51. 0(CH，9-C)，46. 2(C，10-C)，72. 3(CH，11-C)，74. 8(CH， 12-C)，44. 8 (C，13-C)，71. 3 (C，14-C)，59. 7 (CH，15-C)，33. 2 (CH2,16-C)，37. 4 (CH，17-C)， 12. 9(CH3,18-C)，17. 5(CH3,19-C)，122. 0(C，20-C)，140. 2(CH，2卜C)，110. 9(CH，22-C)， 142. 7 (CH，23-C)，24. 8 (CH3, 28-C)，24. 5 (CH3, 29-C)，123. 1 (CH2, 30-C)，51. 4 (CH3, 7-0Me)， 170. 1 (C，l-〇Ac)，21. 3(CH3a_0Ac)，169. 8(C，ll-〇Ac)，21. 4(CH3,ll-〇Ac)，170. 5(C， 12-OAc)，21. 0(CH3,12-OAc)。结构确证数据与文献报道一致，因此可以确定本专利技术制备的 化合物即为文献报道的TurrapubinA。 实施例2:TurrapubinA的药理作用试验 -、材料和仪器 A0 25 35购于美国sigma公司。TurrapubinA自制，制备方法见实施例1，HPLC归 一化纯度大于98%。MTT(四唑氮蓝）购于美国Amresco公司。LDH测定试剂盒购于南京 建成生物有限公司。吖啶橙（A0)购于美国sigma公司。溴化乙啶（EB)购于美国sigma公 司。RNase酶购于美国sigma公司。蛋白酶K购于美国sigmaAnnexin公司。V-FITC细 胞凋亡检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司。D-MEM/F12培养基干粉购于美国 GibcoL公司。马血清购于美国hycLon公司。胎牛血清购于杭州四季青生物工程有限公司。 多聚赖氨酸（PLL)购于美国sigma公司。 低温高速离心机（美国Heraeus)，二氧化碳培养箱（美国SHELL/JB)，超净工作 台（苏州净化设备厂），雷勃MK3酶标仪（芬兰Thermolabsystems)，焚光显微镜（德国 Leica)，流式细胞仪EpicsXL(美国CouLter公司），电泳系统（北京六一仪器厂），雷勃MK3 酶标仪（芬兰Thermolabsystems)，焚光显微镜（德国Leica)，流式细胞仪EpicsXL(美国 CouLter公司），电泳系统（北京六一仪器厂）。 二、试验方法 1、细胞培养 ?(：12细胞生长于含10%马血清、5%胎牛血清的0-1^11作12培养液（37°(：，体积分 数为〇. 05的C02，饱和湿度），常规传代。实验时培养器皿用0. 005%PLL溶液（分子量为 150, 000-300, 000)包被，增加PC12细胞对培养器皿黏附力。 2、A0 25 35凝聚态处理A0 25 35溶于无菌双蒸水，终浓度为2.Ommol/L，分装，-20°C保存，临用前，37°C孵育 4-7d〇 3、药物对PC12细胞的处理 对数生长期的PC12细胞按一定的密度分别接种于培养板中，待其生长稳定后，将 细胞分组，即对照组，A0 25 35诱导凋亡组以及TurrapubinA干涉A0 25 35诱导凋亡组。其 中A0 25 35诱导凋亡组，以培养液加入凝聚态的A0 25 35储存液，配制一定浓度的工作液，分 别加入细胞培养板，每孔再分别加入细胞悬液，C02培养箱培养。每小组均设3个平行孔；其 次依据20ymol/LA0 25 35，设定TurrapubinA干涉凋亡组，细胞以不同浓度TurrapubinA 预处理lh，再分别予终浓度20ymol/LA0 25 35培养。 4、MTT法测定细胞存活率 取对数生长期的细胞以2-5X 105/mL的初始浓度分别接种于96孔培养板中每孔 160 y L，待其生长稳定后，加本文档来自技高网...
【技术保护点】
Turrapubin A在制备神经保护中的应用，所述Turrapubin A化学结构式如下，
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张利文，
申请(专利权)人：张利文，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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