本发明专利技术公开了Turrapubin A在制备神经保护药物中的应用,属于药物领域。研究发现应用20μmol/LAβ25-35能有效建立体外培养的大鼠嗜铬瘤细胞株PC12凋亡模型;Turrapubin A能部分对抗Aβ25-35诱导的PC12凋亡,可以进一步研究开发成制备神经保护的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化合物TurrapubinA的新用途,具体涉及TurrapubinA在制备神经 保护药物中的应用。
技术介绍
Chun-MaoYuan等人首次分离纯化出化合物TurrapubinA,并将成果发表在著 名天然产物杂志(BioactiveLimonoidandTriterpenoidConstituentsofTurraea pubescens,J.Nat.Prod.,2013, 76,1166-1174)〇 目前尚未有该化合物关于神经保护的活性报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种TurrapubinA的医药用途。 上述目的是通过如下技术方案实现的: TurrapubinA在制备神经保护药物中的应用,所述TurrapubinA化学结构式如 下, 【附图说明】 图1 :MTT代谢率检测A25 35对PC12细胞的毒性作用; 图2:A0 25 35对PC12细胞LDH释放率的影响; 图3:A0 25 35和/或TurrapubinA对PC12细胞LDH释放率的影响。【具体实施方式】 下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容。 实施例1:TurrapubinA的分离制备及结构确证 TurrapubinA的制备方法同文献报道的制备方法(BioactiveLimonoidand TriterpenoidConstituentsofTurraeapubescens,J.Nat.Prod.,2013,76,1166-1174)〇 结构确证:白色无定形粉末,HR-ES頂S显示+m/z为637. 2633,分子式为 C33H420n,不饱和度为13。红外光谱表明化合物含有羟基(3441cm3和羰基1735cm3基团。 核磁共振氢谱数据 8H(ppm,DMS0-d6,600MHz) :H-1 (5. 54,d,J= 3. 8),H-2(2. 47,dd,J= 14. 7, 3. 8),H-2 (2. 98,m),H-5 (2. 38,m),H-6 (2. 27,m),H-6 (3. 31,d,J= 18. 8),H-9 (3. 37, d,J= 7.0),H-ll(5.36,dd,J= 7.0,11.5),H-12 (5.68,d,J= 11.5),H-15 (3. 75, s),H-16(l. 83,dd,J= 11. 6,13. 8),H-16(2. 20,dd,J= 13. 8,6. 4),H-17(2. 98,m), H-18 (0? 87,s),H-19 (1. 68,s),H-21 (7. 02,s),H-22 (6. 05,s),H-23 (7. 29,s),H-28 (0? 96, d),H-29(l. 08,s),H-30(5. 04,s),H-30(5. 39,s),7-0Me(3. 58,s),l-〇Ac(l. 91,s), 11- 0Ac(1.97,s),12-0Ac(1.75,s);核磁共振碳谱数据Sc(ppm,DMS0-d6,150Hz) :78.4(CH, 1-C),37. 0(CH2, 2-C),211. 8 (C,3-C),49. 1 (C,4-C),44. 8(CH,5-C),31. 7 (CH2,6-C), 174. 5(C,7-C),134. 1 (C,8-C),51. 0(CH,9-C),46. 2(C,10-C),72. 3(CH,11-C),74. 8(CH, 12-C),44. 8 (C,13-C),71. 3 (C,14-C),59. 7 (CH,15-C),33. 2 (CH2,16-C),37. 4 (CH,17-C), 12. 9(CH3,18-C),17. 5(CH3,19-C),122. 0(C,20-C),140. 2(CH,2卜C),110. 9(CH,22-C), 142. 7 (CH,23-C),24. 8 (CH3, 28-C),24. 5 (CH3, 29-C),123. 1 (CH2, 30-C),51. 4 (CH3, 7-0Me), 170. 1 (C,l-〇Ac),21. 3(CH3a_0Ac),169. 8(C,ll-〇Ac),21. 4(CH3,ll-〇Ac),170. 5(C, 12-OAc),21. 0(CH3,12-OAc)。结构确证数据与文献报道一致,因此可以确定本专利技术制备的 化合物即为文献报道的TurrapubinA。 实施例2:TurrapubinA的药理作用试验 -、材料和仪器 A0 25 35购于美国sigma公司。TurrapubinA自制,制备方法见实施例1,HPLC归 一化纯度大于98%。MTT(四唑氮蓝)购于美国Amresco公司。LDH测定试剂盒购于南京 建成生物有限公司。吖啶橙(A0)购于美国sigma公司。溴化乙啶(EB)购于美国sigma公 司。RNase酶购于美国sigma公司。蛋白酶K购于美国sigmaAnnexin公司。V-FITC细 胞凋亡检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司。D-MEM/F12培养基干粉购于美国 GibcoL公司。马血清购于美国hycLon公司。胎牛血清购于杭州四季青生物工程有限公司。 多聚赖氨酸(PLL)购于美国sigma公司。 低温高速离心机(美国Heraeus),二氧化碳培养箱(美国SHELL/JB),超净工作 台(苏州净化设备厂),雷勃MK3酶标仪(芬兰Thermolabsystems),焚光显微镜(德国 Leica),流式细胞仪EpicsXL(美国CouLter公司),电泳系统(北京六一仪器厂),雷勃MK3 酶标仪(芬兰Thermolabsystems),焚光显微镜(德国Leica),流式细胞仪EpicsXL(美国 CouLter公司),电泳系统(北京六一仪器厂)。 二、试验方法 1、细胞培养 ?(:12细胞生长于含10%马血清、5%胎牛血清的0-1^11作12培养液(37°(:,体积分 数为〇. 05的C02,饱和湿度),常规传代。实验时培养器皿用0. 005%PLL溶液(分子量为 150, 000-300, 000)包被,增加PC12细胞对培养器皿黏附力。 2、A0 25 35凝聚态处理A0 25 35溶于无菌双蒸水,终浓度为2.Ommol/L,分装,-20°C保存,临用前,37°C孵育 4-7d〇 3、药物对PC12细胞的处理 对数生长期的PC12细胞按一定的密度分别接种于培养板中,待其生长稳定后,将 细胞分组,即对照组,A0 25 35诱导凋亡组以及TurrapubinA干涉A0 25 35诱导凋亡组。其 中A0 25 35诱导凋亡组,以培养液加入凝聚态的A0 25 35储存液,配制一定浓度的工作液,分 别加入细胞培养板,每孔再分别加入细胞悬液,C02培养箱培养。每小组均设3个平行孔;其 次依据20ymol/LA0 25 35,设定TurrapubinA干涉凋亡组,细胞以不同浓度TurrapubinA 预处理lh,再分别予终浓度20ymol/LA0 25 35培养。 4、MTT法测定细胞存活率 取对数生长期的细胞以2-5X 105/mL的初始浓度分别接种于96孔培养板中每孔 160 y L,待其生长稳定后,加本文档来自技高网...
【技术保护点】
Turrapubin A在制备神经保护中的应用,所述Turrapubin A化学结构式如下,
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:张利文,
申请(专利权)人:张利文,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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