一株假单胞菌属解磷细菌Y2及其制备的生物有机肥和应用制造技术

本发明专利技术公开了一株假单胞菌属解磷细菌Y2及其制备的生物有机肥和应用。该菌株分离于马铃薯根际，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014年12月25日，保藏编号为CGMCC NO.10242。摇瓶实验结果表明，菌株能够有效降低溶液pH并溶解溶液中难溶性磷；灌菌盆栽试验结果表明，该菌株能够有效促进马铃薯、玉米和烟草植株的生长，同时菌株能够在植株根际大量定殖，发挥促生作用。利用该菌株以及腐熟鸡粪和菜粕研制的粒状生物有机肥施用后，能够显著促进玉米植株的生长。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业微生物领域，提供一株假单胞菌属高效解磷细菌Y2及其研制的 生物有机肥。
技术介绍
磷是植物生长必不可少的营养元素，我国耕地缺磷现象普遍，土壤中无效磷形态 占到95 %，植物几乎不能直接吸收利用。土壤中难溶性磷可分为有机磷和无机磷，其中难溶 性有机磷占土壤全磷的20% -50%。过磷酸钙等磷肥的有效磷含量偏低，而且施用后磷肥 当季利用率为5% - 25%，剩余大部分磷与土壤中的Ca2+、Fe3+以及A13+等结合形成难溶性 磷酸盐，因此，如何提高磷利用率是一个急需解决的问题。植物根际的解磷菌数量不足以和 其他微生物竞争，难以发挥其活性。固氮、解磷、解钾菌株是微生物肥料的主要菌株，因此， 有必要从植物根际自然条件下筛选高效解磷菌株，制成微生物肥料回接到土壤中，确保该 类微生物能够有效定殖于植物根际，以促进植物生长。一些研究者提出一个方案：通过开发 高效解磷微生物肥料，减少化学肥料的使用来提高土壤中有效磷的含量。同时，一些研究者 经过试验证实解磷菌与有机肥料在一起能发挥更好的解磷作用。因此，本专利技术正好把二者 很好地结合起来。 生物有机肥是指特定功能微生物与主要以动植物残体（如畜禽粪便、农作物秸杆 等）为来源并经无害化处理、腐熟的有机物料复合而成的一类兼具微生物肥料和有机肥效 应的肥料。其本质特征是含有特定功能的、表现出一定肥料效应的微生物，这些功能微生物 的生命活动是生物有机肥优于其它肥料的关键因素。生物有机肥发挥作用的关键在于肥料 中有益微生物的数量，因此研究不同的配方和二次固体发酵工艺确保肥料中活菌数达到最 高变得尤为重要。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供一株假单胞菌属解磷细菌Y2及 其应用。 本专利技术的另一目的是提供该细菌制备的生物有机肥及其应用。 本专利技术的目的可通过以下技术方案实现： -株假单胞菌属细菌（Pseudomonassp. )Y2,保藏于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心，保藏日期为2014年12月25日，保藏编号为CGMCCN0. 10242。 菌株Y2在LB平板上的菌落为淡黄色圆形，表面光滑湿润，边缘整齐，具有一定的 黏性，易挑起。在显微镜下所观察到的营养体细胞，革兰氏染色阴性，菌体着色均匀，呈杆 状。酪氨酸水解反应，酪素水解反应，氧化酶反应，接触酶反应，果糖利用，利用柠檬酸盐反 应，从甘油产二羟丙酮反应均呈阳性，甲基红反应，V.P反应，明胶液化反应，赖氨酸脱羧基 反应呈阴性10%NaCl生长。菌株16SrDNA序列构建的系统发育树见图1。菌株Y2位于 Pseudomonassp?分支上，结合生理生化试验将Y2鉴定为假单胞菌属细菌。 本专利技术所述的假单胞菌属细菌Y2在溶解土壤中难溶性磷和/或促进植物生长中 的应用。 本专利技术所述的假单胞菌属细菌Y2在制备溶解土壤中难溶性磷和/或促进植物生 长的生物有机肥中的应用。 由本专利技术所述的假单胞菌属细菌Y2制备的解磷促生生物有机肥。。 -种制备所述的生物有机肥的生产方法，将质量比40%菜柏（干重）和60%的腐 熟鸡粪（干重）堆肥进行均匀混合，将假单胞菌属细菌Y2发酵液接入上述混合物中进行固 体发酵，每吨混合物中加入Y2菌株发酵液50L，固体发酵过程中每天翻堆1次，使固体发酵 温度不超过50°C，发酵5 - 7天后结束，Y2菌株含量可达到1X10sCFU/g(肥料干重）以上； 将上述发酵好的生物有机肥在自然条件下将含水量风干至30%以下，得为粉状生物肥料； 或者最后在温度不超过60°C的条件下将上述发酵好的生物有机肥用造粒机进行造粒，造粒 结束后进行适当风干，让肥料含水量降至25~32%，得粒状生物有机肥料。 所述的生产方中所述的Y2发酵液通过以下方法制备：将保藏号为CGMCCN010242 的假单胞菌Y2接种到LB培养液中，进行液体发酵生产，发酵生产的条件为：pH值自然，发 酵温度范围30~35°C，搅拌速度为170~200转/分钟，发酵时间为40h，使发酵液中含菌 量彡1X101。个/mL。 所述的生产方法中所用腐熟后的鸡粪堆肥其发芽指数为98%以上，有机质质量比 含量彡45%，有机氮质量比含量为2 - 3%，含水量质量比为25 - 30%。 所述促生生物有机肥料中Y2活菌数多lX10sCFU/g(肥料干重），全氮含量为 2. 5 - 3. 5%，总氮磷钾养分为6 - 8%、有机质含量彡40%。 本专利技术所述的促生生物有机肥在溶解土壤中难溶性磷和/或促进植物生长中的 应用。 有益效果： 本专利技术主要利用Y2制备的生物有机肥根际有益，高效定殖与植物根际，发挥解磷 作用，从而促进作物生长。专利产品应用后，促生效果好，适合蔬菜作物产区大面积使用。该菌株及其效应验证与其它菌株相比具有如下优点： 1)本专利所获得的解磷菌株Y2为假单胞菌属高效解磷细菌，同时分离于植物根 际，因此，应用时，相比于其他菌株能够更加有效的在植物根际大量定殖，从而高效发挥解 磷促生功能，具有显而易见的优势。 2)研究结果表明，本专利分离获得的解磷菌，在多季盆栽试验中表现出显而易见 的稳定促生能力。 该菌株研制的生物有机肥与目前市场上的产品相比具有如下优点： 1)本专利技术产品利用鸡粪和菜柏为固体发酵原料，能够有效促进功能菌在肥料堆体 中的发酵。 2)肥料产品中含有丰富的有机质、游离氨基酸、氮、磷、钾营养元素，能给作物提供 适宜的生长环境。 3)肥料产品中大量的功能菌，能够高效溶解土壤中难溶性无机磷以及肥料和土壤 中的有机磷，减少化学肥料的施用，增加土壤肥力，试验结果表明，在蔬菜营养生长期上施 用本产品后，能显著促进作物生长。【附图说明】 图1基于菌株Y2的16SrDNA基因序列采用邻接法建立的系统发育树 图2第一季马铃薯促生盆栽效果图 图3第二季马铃薯促生盆栽效果图 图4第一季玉米促生盆栽效果图 图5第二季玉米促生盆栽效果图 图6烟草促生盆栽效果图 图7解磷菌Y2根际定殖情况图 图8解磷菌Y2研制的生物有机肥促生效果图 生物材料保藏信息Y2,分类命名为Pseudomonasfrederlksbergensi，保藏于中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生 物研究所，保藏日期为2014年12月25日，保藏编号为CGMCCN0. 10242。【具体实施方式】 实施例1、功能菌株的分离及鉴定 剪取5g马铃薯根至盛有45mL无菌水的三角瓶中，170rpm振荡30min制成悬液，然 后依次配备浓度为10 3、10 4、10 5、10 6的土壤稀释液。从10 4、10 5、10 6稀释液中取0.lmL溶 液分别涂布于磷酸钙盐无机磷培养基和卵黄培养基上（每个浓度在各培养基上重复3次）。 分离解有机磷和无机磷细菌平板分别在30°C下培养3d和5d后，取出观察，选择在固体培养 基平板上产生透明圈的菌落初步认定为解磷细菌，划线纯化后，于4°C冰箱保存留待进一步 研究。最终分离获得一株菌株命名为Y2,具有优异的解磷效果。 其中所用磷酸钙盐无机磷培养基配制方法为，以配制1L培养基为例：葡萄糖10g， (NH4)2S040 . 5g，NaCl0? 3g，KC1 0? 2g，FeS本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株假单胞菌属细菌(Pseudomonas sp.)Y2，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014年12月25日，保藏编号为CGMCC NO.10242。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：沈其荣，李荣，赵买琼，张瑞福，刘小玉，沈标，
申请(专利权)人：南京农业大学，海南泰谷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32