本发明专利技术涉及一种油茶花粉超低温保存方法，包括如下步骤：1、脱水：将收集的油茶花粉放在恒温箱内干燥；2、预冻：油茶花粉经步骤1处理后预冻；3、冷冻：油茶花粉经步骤2后投放液氮中保存；4、解冻：油茶花粉经步骤3液氮保存后解冻。本发明专利技术的有益效果为：本发明专利技术的油茶花粉超低温保存方法能有效抑制花粉衰老，降低其呼吸强度和酶活性，延长油茶花粉寿命，克服油茶种间因花期不遇而造成的杂交育种困难，油茶花粉在液氮中保存半年后，活力仍高达47.05％。干燥时间短，保证花粉活力，利于保存。烘干干燥法投入成本、预冻、解冻成本投入也较低。简单易操作，能有效保证油茶花粉进行杂交的活力，对油茶杂交育种及生产实践具有重要的推广价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物花粉的保存方法，具体涉及。
技术介绍
油茶（Camelliaoleifera)属山茶科（Theaceae)山茶属（Camellia)植物，常绿 灌木或小乔木，适应性强，耐贫瘠，抗干旱，是我国特有的木本油料树种之一，也是改造红壤 的主要树种，被西方誉为"东方橄榄树"。油茶已被我国列为重点研发的食用油料树种。茶 油色清味香，营养丰富，且含天然维生素A和E，耐贮藏，易被人体吸收，能预防和治疗高血 压、心血管疾病，是绿色保健食用油。综上，油茶兼具较高的生态和经济价值。 花粉作为油茶种质的主要形式之一，携带油茶全部基因，具有遗传多样性，是油茶 种质保存以及杂交育种的重要途径。油茶属于自交不亲和植物，种间花期不遇，自然条件下 油茶花粉寿命短，这不利于油茶种质资源研究及其杂交育种，同时也给油茶遗传性状研究 带来许多困难。因此，有必要对油茶花粉进行进一步深入研究。 进行花粉保存研究，是为了在不破坏种质资源的前提下保持花粉活力，延长其寿 命，并以此来克服杂交育种中的时空限制，提高育种效率，有利于新品种的培育，同时为不 同地区种质资源的交换提供了便利。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种油茶花粉超低温保存方 法。 本专利技术的目的是通过如下技术方案来完成的。这种油茶花粉超低温保存方法，该 方法包括如下步骤： (1)脱水：将收集的油茶花粉放在30°C恒温箱内干燥至含水量为11 %~20% ; (2)预冻：油茶花粉经步骤（1)处理后，于-80°C~4°C预冻； (3)冷冻：油茶花粉经步骤⑵后投放液氮中保存； (4)解冻：油茶花粉经步骤（3)液氮保存后，于-80°c~38°C解冻。 作为优选，将经脱水处理的油茶花粉选择26°C或4°C预冻lh，再投入液氮中保存。 作为优选，将经脱水处理的油茶花粉于4°C预冻lh，转入-20°C预冻lh，再置 于-80°C预冻lh，再投入液氮中保存。 作为优选，所述步骤（4)中的解冻方法为：于_80°C复苏lh，转入-20°C冷冻lh，再 置于4°C冷藏lh。 作为优选，所述步骤（4)中的解冻方法为：11°C室温恒温解冻30min。 作为优选，所述步骤（4)中的解冻方法为：38°C水浴解冻3min。 作为优选，所述步骤（4)中的解冻方法为：4°C恒温解冻30min。 本专利技术的有益效果为：本专利技术所述的油茶花粉超低温保存方法能有效抑制花粉衰 老，降低其呼吸强度和酶活性，延长油茶花粉寿命，克服油茶种间因花期不遇而造成的杂交 育种困难，油茶花粉在液氮中保存半年后，活力仍高达47. 05%。本专利技术所述的油茶花粉超 低温保存方法，干燥方法为烘干干燥法，干燥时间短，保证花粉活力，利于保存。烘干干燥法 投入成本、预冻、解冻成本投入也较低。本专利技术所述的油茶花粉超低温保存方法简单易操 作，能有效保证油茶花粉进行杂交的活力，对油茶杂交育种及生产实践具有重要的推广价 值。【附图说明】 图1是本专利技术中预冻及解冻方式对油茶花粉超低温保存的影响示意图。 分别表示预冻及解冻方式对油茶花粉超低温保存的影响，其中，预冻 方式横坐标中1代表不预冻，2代表-26 °C预冻lh，3代表4 °C预冻lh，4表示 4°C(lh) --26°C(lh) --80°C(lh)逐级降温预冻。解冻方式横坐标中1表示38°C温水 浴解冻 3min，2 表示 11°C室温解冻 30min，3 表示-80°C(lh) - -26°C(lh) - 4°C(lh)逐 级升温解冻，4代表4°C恒温解冻30min。 图2是本专利技术中"长林4号"油茶花粉不同含水量保存半年后萌发率； 图3是本专利技术中"赣5"油茶花粉不同含水量保存半年后萌发率； 图4是本专利技术中"91号"油茶花粉不同含水量保存半年后萌发率。【具体实施方式】 下面通过【具体实施方式】对本专利技术作进一步阐述，实施例将帮助更好地理解本发 明，但本专利技术并不仅仅局限于下述实施例。 实施例1 : ，包括如下步骤： 步骤（1)脱水处理：将恒温箱调制30°C恒温，将收集的500mg"长林4号"油茶新 鲜花粉均匀平铺在硫酸纸上，放入恒温箱内，烘干干燥至含水量13. 48%; 步骤⑵预冻处理：将脱水后的"长林4号"油茶花粉，分别经过_26°C预冻lh、 4°C预冻lh、4°C(lh) --26°C(lh) --80°C(lh)逐级降温预冻以及不预冻，投入液氮中保 存； 步骤（3)解冻处理："长林4号"油茶花粉液氮保存30天后，38温°(：水浴解冻3min， 测花粉生活力，确定"长林4号"油茶花粉的最佳预冻方法为-26°C预冻lh。 表1"长林4号"油茶花粉经不同预冻方式预冻，超低温保存30天后花粉萌发率。 实施例2 : 步骤（1)脱水处理：将恒温箱调制30°C恒温，将收集的500mg"赣5"油茶新鲜花 粉均匀平铺在硫酸纸上，放入恒温箱内，烘干干燥至含水量于14. 17%; 步骤⑵预冻处理：将脱水后的"赣5"油茶花粉，分别经过_26°C预冻lh、4°C预 冻lh、4°C(lh) - -26°C(lh) - -80°C(lh)逐级降温预冻以及不预冻，投入液氮中保存； 步骤（3)解冻处理："赣5"油茶花粉液氮保存30天后，38°C水浴解冻3min，测花 粉生活力，确定"赣5"油茶花粉的最佳预冻方法为-26°C预冻lh。 表2 "赣5"油茶花粉经不同预冻方式预冻，超低温保存30天后花粉萌发率。 实施例3: 步骤（1)脱水处理：将恒温箱调制30°C恒温，将收集的500mg"91号"油茶新鲜花 粉均匀平铺在硫酸纸上，放入恒温箱内，烘干干燥至含水量于15. 52%; 步骤⑵预冻处理：将脱水的"91号"油茶花粉，分别经过_26°C预冻lh、4°C预冻 lh、4°C(lh) --26°C(lh) --80°C(lh)逐级降温预冻以及不预冻，投入液氮中保存； 步骤（3)解冻处理："91号"油茶花粉液氮保存30天后，38°C水浴解冻3min，测花 粉生活力，确定"91号"油茶花粉的最佳预冻方法为-26°C预冻lh。 表3 "91号"油茶花粉经不同预冻方式预冻，超低温保存30天后花粉萌发率。 头施例4 步骤⑴脱水处理：将恒温箱调制30°C恒温，将收集的500mg"长林4号"油茶新 鲜花粉均匀平铺在硫酸纸上，放入恒温箱内，烘干干燥至含水量于13.48%; 步骤（2)冷冻处理：将干燥的"长林4号"油茶花粉，经_26°C预冻lh后，投入液氮 中保存；步骤（3)解冻处理："长林4号"油茶花粉当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种油茶花粉超低温保存方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：(1)脱水：将收集的油茶花粉放在30℃恒温箱内干燥至含水量为11％～20％；(2)预冻：油茶花粉经步骤(1)处理后，于‑80℃～4℃预冻；(3)冷冻：油茶花粉经步骤(2)后投放液氮中保存；(4)解冻：油茶花粉经步骤(3)液氮保存后，于‑80℃～38℃解冻。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姚小华，龙伟，常维霞，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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