用于保持已手术去除的组织中的癌细胞活力的方法和试剂技术

一种组合物和方法，其用于生成试剂以及这些试剂的组合物，这些试剂用于通过用低摩尔浓度的协同化学品以及激素生长促进剂显著调节细胞代谢来稳定和保持已被手术切除的癌组织的活力以及暂停和/或终止凋亡(细胞死亡)，同时保持手术切除的组织的正常基因表达谱。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生成用于已手术切除的癌组织的稳定、保存和活力的试剂以及试剂组 合物的方法。
技术介绍
几十年来，用来检测来自切除组织的癌细胞的用于病理分析的手术组织收集已经 成为癌症诊断的标准实践。当前的组织样品收集方案要求将切除组织收集并置于福尔马林 溶液中，并随后将其运送到病理实验室进行染色和分析。遗憾的是，福尔马林固定细胞（例 如，杀死细胞）并且在这一过程中引起细胞完整性的显著改变，从而在准确地进行基因组 检测（RNA、mRNA和蛋白质生物标志物分析，和基因表达研究）分析的能力方面产生问题。 分子技术，如采用实时聚合酶链反应技术（RT-PCR)进行的基因组检测，已发展到 某些癌症可以匹配于特定的化学疗法的程度，该化学疗法已被证明响应于在癌细胞中发现 的某些基因表达谱。因此，能够获得从患者切除的癌细胞的准确基因表达谱允许通过设计 个性化的化学疗法以及其他处理来进行个性化健康照护。这是治疗范例的非常重要的转 变，并将代表在不久的将来的医护标准。 已在福尔马林中保存的癌组织样品并非用于完成基因表达分析的活的组织样品。 福尔马林并非对组织样品实现基因表达分析的良好试剂的一个原因是，福尔马林导致蛋白 质缓慢交联成网状网络，并且由于有价值的靶蛋白质没有针对降解得到保护，因此它们可 能被福尔马林处理破坏。 此外，随着福尔马林渗透组织样品，发生细胞死亡（凋亡）。癌细胞是独特的，因为 它们具有代谢性预程序化凋亡，从而在福尔马林中发生加速的凋亡。随着组织样品中的细 胞死亡，总细胞群体的子集裂解并释放宽范围的内部调节酶，这些内部调节酶进一步导致 细胞死亡加速。这些酶中的许多酶将降解或破坏靶核酸〇嫩4嫩、11^嫩、调节蛋白以及在分 子基因组分析中使用的相关生物标志物。在固定过程中，福尔马林杀死了组织样品中的细 胞，而基因表达可成为不稳定的，并且关键基因的基因组表达可变得欠表达或过表达，从而 产生某些癌基因的表达的不准确值。这是在基于来自选定基因的特定mRNA的水平作出化 学疗法决定时的主要问题。因此，当前不可能对在福尔马林中固定的癌细胞获得准确的基 因组检测。 还应当注意的是，用福尔马林固定组织样品中的蛋白质和细胞需要约48小时才 发生。这使得福尔马林过程不能非常准确地确定在从患者收集组织时有什么样的基因表 达。 通常，从组织固定获得的遗传数据的科学有用性与组织的质量和该组织对于基因 组检测的有用性直接相关。目前，福尔马林固定在获得准确的基因表达信息方面并不是非 常有用的。因此，需要这样的试剂：其用于固定组织样品，以使得所收集的样品包含用于遗 传检测的准确基因表达标志物。 还需要不像福尔马林那样危险的组织样品固定试剂。遗憾的是，福尔马林给使用 者带来显著的癌症风险，以及关于含福尔马林产品的使用和处置的重要州及联邦规定。 本专利技术公开了用于制备允许收集从患者中手术去除的癌组织的试剂和试剂组合 物的方法，其中组织样品中的癌细胞的遗传细胞信息保持在活的状态，使得组织样品适合 于基因表达分析。
技术实现思路
本专利技术公开了制备用于组织样品如活检样品的细胞活力试剂的新方法，该细胞活 力试剂允许样品中细胞的基因表达分析。 在制备用于组织样品的试剂的方法的大多数实施方案中，该方法包括：提供至少 一种离液剂（Chaotrope)，提供至少一种稳液剂（kosmotrope)，提供螯合剂，提供缓冲液， 提供凋亡底物，提供代谢调节剂，以及将所述离液剂、稳液剂、螯合剂、缓冲液、凋亡底物以 及代谢调节剂以能够进行组织样品的基因表达分析的方式混合。 在制备用于组织样品的试剂的方法的许多实施方案中，所述凋亡底物是癌细胞凋 亡底物并且所述组织样品是手术切除的癌组织。 在本专利技术方法的大多数实施方案中，在用于组织样品的试剂中，所述离液剂的最 终浓度为约0. 1摩尔（Molar)至约2摩尔，所述稳液剂的最终浓度为约0. 1摩尔至约2 摩尔，所述螯合剂的最终浓度为约〇. 1摩尔至约2摩尔，且所述凋亡底物的最终浓度为约 0. 001摩尔至约0. 5摩尔。 在本专利技术方法的某些实施方案中，所述离液剂选自SCN(硫氰酸钠）、H2PO4、HCO3、 1、Cl、NO3、NH4、Cs、K+、（NH4)C+胍、胍的所有盐、Br或Rb。 在制备所述试剂的方法的一些实施方案中，所述至少一种稳液剂选自甘油、三甲 胺N-氧化物、依克多因（Ectoine)、aa_海藻糖、3-二甲基锍丙酸盐、葡萄糖、葡聚糖或D-乳 糖。 在其他实施方案中，所述螯合剂选自EDTA、EGTA或BABTA。 在本专利技术方法的另一实施方案中，所述缓冲液选自BIS-TRIS、BIS-TRIS丙烷、 HEPES、HEPES钠盐、MES、MES钠盐、MOPS、MOPS钠盐、钠盐或磷酸钠缓冲液（单碱式、三碱式 PO4) 〇 在所述方法的又一实施方案中，所述凋亡底物选自DMS0、瘦素、甘氨酸甜菜碱 (Glycinebeatine)、柠檬酸钾、三甲胺、脯氨酸、NDSB195、ML-精氨酸、木糖醇、亚硒酸钠、 NDSB201、CuCL2SCTAB。 在一些实施方案中，所述代谢调节剂选自极性非质子溶剂、DMS0、丙酮、N，N-二 甲基甲酰胺或乙腈。 在大多数实施方案中，制备所述试剂的方法进一步包括将所述试剂的各种组分按 照以下的相继顺序添加至净化水的整分试样中：添加至少一种离液剂，接着添加所述螯合 剂，接着添加所述代谢调节剂，接着添加第一稳液剂，接着添加所述缓冲液，接着添加不同 于第一稳液剂的第二稳液剂，最后接着添加所述凋亡底物。 在本专利技术的许多实施方案中，所述离液剂是SCN(硫氰酸钠），所述第一稳液剂是 甘油而所述第二稳液剂是aa-海藻糖，所述螯合剂是EDTA，所述缓冲液是磷酸钠缓冲液（单 碱式、三碱式PO4)，所述细胞凋亡底物是瘦素，且所述代谢调节剂是DMS0。 在另一实施方案中，制备用于分析组织样品的试剂的方法包括：提供净化水的 整分试样；将所述试剂的组分按照以下顺序添加至所述净化水中：添加硫氰酸钠、H)TA、 DMS0、甘油、磷酸钾缓冲液以及aa-海藻糖，接着添加人瘦素；以及在各种组分的各次添加 之间以允许组织样品或活检组织的准确基因表达分析的方式混合所述组分。 在一些实施方案中，制备用于分析组织样品的试剂的方法包括：提供净化水的整 分试样；将所述试剂的组分按照以下顺序添加至所述净化水中：添加至少一种离液剂，接 着添加螯合剂，接着添加代谢调节剂，然后添加第一稳液剂，然后添加缓冲液，接着添加不 同的第二稳液剂，接着添加凋亡底物；以及在各次组分添加之间以允许组织样品的准确基 因表达分析的方式混合所述组分。 在大多数实施方案中，用于制备组织样品的、允许基因表达分析的试剂包含：至少 一种离液剂、至少一种稳液剂、螯合剂、缓冲液、凋亡底物以及代谢调节剂。 为分析癌组织样品，所述凋亡底物是癌细胞凋亡底物。 对于所述试剂的大多数实施方案，所述离液剂的最终浓度为约0. 1摩尔至约2摩 尔，所述至少两种稳液剂中每种稳液剂的最终浓度为约〇. 1摩尔至约2摩尔，所述螯合剂的 最终浓度为约〇. 1摩尔至约2摩尔，且所述凋亡底物的最终浓度为约0. 001摩尔至约0. 5 摩尔。 在所述试剂的具体实施方案中，所述离液剂是SCN(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备用于组织样品的试剂的方法，该方法包括：提供至少一种离液剂；提供至少一种稳液剂；提供螯合剂；提供缓冲液；提供凋亡底物；提供代谢调节剂；以及将所述离液剂、稳液剂、螯合剂、缓冲液、凋亡底物和代谢调节剂以特定的顺序混合，以便能够进行置于所述试剂中的组织样品的基因表达分析。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：托尼·K·贝克，
申请(专利权)人：特拉基应用基因组学有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US