使用产后衍生细胞治疗外周血管疾病制造技术

本发明专利技术涉及使用产后衍生细胞治疗外周血管疾病。本发明专利技术公开了这样的组合物和方法，它们使用衍自产后组织如脐带和胎盘的细胞，以刺激和支持外周血管疾病患者的血管发生，改善其血流，再生、修复和改善其被外周局部缺血事件损害的骨骼肌，并保护其骨骼肌免受局部缺血损害。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】使用产后衍生细胞治疗外周血管疾病 本申请是申请日为2006年12月28日，申请号为200680053495. 8 (国际申请号为PCT/US2006/062667)，专利技术名称为"使用产后衍生细胞治疗外周血管疾病"的专利技术专利申请的分 案申请。 相关申请的交叉引用 本申请要求2005年12月28日提交的美国临时专利申请第60/754, 366号的权利， 该临时专利申请的内容通过引用整体结合到本文中。 专利
本专利技术涉及针对外周血管疾病患者特别是外周缺血患者的基于细胞的疗法或再 生疗法的领域。具体的说，本专利技术提供具有以下能力的衍自产后组织的细胞：刺激和支持血 管发生，改善血流，再生、修复和改善受外周缺血事件损害的骨骼肌，和保护骨骼肌免受缺 血损害。 专利技术背景 本说明书通篇引用到各种出版物，包括专利、公布的申请、技术文章和学术文章。 这些被引用的出版物每一个都通过引用整体结合到本文中。 外周血管疾病（PVD)可因血管特别是肢体和在心脏的远端的区域的血管的动脉 硬化闭塞症而引起，导致血流减少和闭塞（occlusion)处周围和下游的组织的氧灌注不 足。PVD常出现在髂血管、股血管和腿弯部血管及锁骨下血管，它的影响可被血栓症、栓子或 创伤加剧。据估计，在美国大约有800万到1200万人受到PVD的折磨，特别是老年人口和 糖尿病患者。 PVD的常见症状包括上下肢和末端（extremities)的痉挛、麻痹、虚弱、肌肉疲劳、 四肢和末端的疼痛、四肢和末端的低温、末端的变色、皮肤干燥或剥落及高血压。最常见的 症状是跛行或者闭塞的血管下游的肌肉的疼痛感、抽紧感和疲劳感，这些感觉在一些形式 的锻炼如步行过程中出现，但休息一段时间后自行消除。 在病理生理学上，闭塞的血管会引起梗阻（obstruction)部位和梗阻部位的远端 的组织的局部缺血。这种局部缺血通常称为外周缺血，意思是它发生在心脏的远端的部位。 局部缺血的严重性因梗阻的大小和数量、梗阻是否接近肌肉或器官及是否有足够的多余血 管系统而异。在较为严重的情况中，局部缺血会导致受影响组织的死亡，可导致受影响肢体 的截肢乃至患者的死亡。 PVD的更为严重病情目前的治疗方法包括化疗方案、血管成形术、固定模插入 (insertionofstents)、重建外科手术（reconstructivesurgery)、旁路移植、受影响组 织的切除术或者截肢术。可惜的是，对于许多患者来说，这些介入方法成功率有限，且许多 患者会经历到病症或症状的恶化。 目前，人们有兴趣使用能分裂和分化的干细胞或者来自其他来源的肌肉细胞（包 括平滑肌细胞和骨骼肌细胞）来帮助组织损害的修复或逆转。干细胞的移植可用作临床 工具来重构靶组织，从而恢复生理和解剖机能。干细胞技术的应用是广泛的，包括组织工 程、基因疗法递送和细胞疗法，后者也就是通过外源供应能产生或含有生物治疗剂的活细 胞或细胞成分将这些生物治疗剂递送到靶部位（有关综述参见Tresco，P.A.etal，（2000) AdvancedDrugDeliveryReviews42:2-37)。干细胞的鉴定已刺激了旨在选择性产生供 再生医学用的特异性细胞类型的研究。 干细胞技术治疗潜力的实现的一个阻碍一直是获得足够数量的干细胞有困难。胚 胎组织或胎儿组织是干细胞的一个来源。已从多种哺乳动物物种（包括人类）分离了胚胎 干细胞和祖细胞，有几种这种细胞类型已被证实能够自我更新和扩展以及分化成多种不同 的细胞谱系。但从胚胎或胎儿来源衍生干细胞已引起了许多伦理和道德问题，这些问题需 要通过鉴定其它来源的多能（multipotent)或多潜能（pluripotent)细胞来进行避免。 产后组织如脐带和胎盘作为干细胞的另选来源已引起人们兴趣。例如，已描述了 通过胎盘的灌注或从脐带血或组织进行的收集来回收干细胞的方法。从这些方法获取干细 胞的限制因素一直是所获得的脐带血体积或细胞数量不足，还有从这些来源获得的细胞群 体存在异质性或缺乏表征。 具有分化成一批（anarrayof)骨骼肌谱系、周细胞谱系或血管谱系的能力的基 本上均质的这种细胞群体，如能得到可靠的、良好表征的和充裕的供应，在以下各种诊断性 和治疗性应用中将会是有利的：骨骼肌修复、再生和改善，血管发生的刺激和/或支持，和 外周缺血事件后血流的改善，特别是在PVD患者中。 专利技术概述 本专利技术的一个方面涉及用于治疗患有外周血管疾病的患者的方法，所述方法包括 将产后衍生细胞以能有效治疗外周血管疾病的量给予该患者，其中所述产后衍生细胞衍自 基本上没有血液的人胎盘或脐带组织；其中所述细胞能够在培养中自我更新和扩展，和具 有分化成至少骨骼肌、血管平滑肌、周细胞或血管内皮表型的细胞的潜力；其中所述细胞需 要L-缬氨酸用于生长并能在至少约5%氧中生长；其中所述细胞还包含以下特征中的至少 一个：a)在培养中倍增至少约40次的潜力；b)在包被或未包被的组织培养容器上的贴壁 和扩展，其中包被组织培养容器包含明胶、层粘连蛋白、胶原、聚鸟氨酸、玻连蛋白或纤连蛋 白的包被层；c)组织因子、波形蛋白和a-平滑肌肌动蛋白中的至少一个的产生；d)⑶10、 CD13、CD44、CD73、CD90、PDGFr-a、PD-L2 和HLA-A，B，C中的至少一个的产生；e)CD31、CD34、 CD45、CD80、CD86、CD117、CD141、CD178、B7-H2、HLA-G和HLA-DR，DP，DQ中的至少一个的 产生的缺乏，这通过流式细胞术来检测；f)相对于成纤维细胞、间充质干细胞或髂嵴骨髓 细胞这些人细胞而言，至少一个编码以下物质的基因的基因表达提高：白细胞介素8 ;网硬 蛋白（reticulonU;趋化因子（C-X-C模体）配体1(黑素瘤生长刺激活性，a);趋化因子 (C-X-C模体）配体6(粒细胞趋化蛋白2);趋化因子（C-X-C模体）配体3 ;肿瘤坏死因子， a诱导蛋白3 ;C型凝集素超家族成员2 ;Wilms肿瘤1 ;醛脱氢酶1家族成员A2 ;肾素；氧 化低密度脂蛋白受体1 ;人类（Homosapiens)克隆IMAGE:4179671 ;蛋白激酶CG;假拟蛋 白DKFZp564F013 ;在卵巢癌1中下调；和来自克隆DKFZp547klll3的人类基因；g)相对于成 纤维细胞、间充质干细胞或髂嵴骨髓细胞这些人细胞而言，至少一个编码以下物质的基因 的基因表达减少：矮身材同源框2 ;热激27kDa蛋白2 ;趋化因子（C-X-C模体）配体12 (基 质细胞衍生因子1);弹性蛋白（主动脉瓣上狭窄、Williams-Beure综合征）；人类mRNA; cDNADKFZp586M2022 (来自克隆DKFZp586M2022);间充质同源框2 (生长停滞特异性同源 框）；sineoculis同源框同源物1 (果蝇）；晶状体蛋白，aB;形态发生2的凌乱缔合激活 剂；DKFZP586B2420蛋白；类似于neuralin1 ;四连蛋白（纤溶酶原结合蛋白）；src同源性 3 (SH3)和半胱氨酸富集域；胆固醇25-羟化酶；矮子相关转录因子-3 ;白细胞介素11受体， a;前胶原C肽链内切酶增强子；卷曲同源物7(果蝇）；假拟基本文档来自技高网...

【技术保护点】
脐带组织衍生的细胞在制备用于治疗外周局部缺血的药物中的用途，其中所述脐带组织衍生的细胞衍生自基本上没有血液的人脐带组织，能够在培养中自我更新和扩展，具有分化的潜力，产生CD10、CD13、CD44、CD73、CD90、PDGFr‑α和HLA‑A，B，C，不产生CD31、CD34、CD45、CD117、CD141或HLA‑DRPQ。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：AJ金，
申请(专利权)人：伊西康公司，
类型：发明
国别省市：美国;US