本发明专利技术提供了一种耐受高浓度烟碱且具降解烟碱能力的基内苍白杆菌(Ochrobactrum intermedium)，其保藏编号为：CGMCC No.10670，保藏日期为2015年3月30日。此外，本发明专利技术还提供了利用保藏编号为：CGMCC No.10670的基内苍白杆菌降解烟碱并耐受高浓度的烟碱的应用方法。本发明专利技术CGMCC No.10670基内苍白杆菌一种分离的全新的菌株，该基内苍白杆菌能够耐受高浓度的烟碱，耐受浓度高达10g/L。该基内苍白杆菌能够有效的降解烟碱，解决高浓度烟碱废弃物中的烟碱降解。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及基内苍白杆菌新的菌株以及该菌株的应用。
技术介绍
尼古丁，又叫烟喊，属于P比啶 族生物碱，在烟草生物碱中烟碱是最主要生物碱。烟碱是一种中枢神经兴奋剂，吸食后使人 产生生理和心理上的依赖性，是让人成瘾的物质。利用微生物处理来降解烟碱这种方法不 会造成烟香的损失还可以改进烟气品质，可以提高烟叶资源的利用率，有研究开发价值，更 可以有效降低尼古丁对人的健康的损害，减少烟草工业产生的大量的废弃物对生态环境的 污染。因此其开发应用将具有巨大的发展潜力和应用前景。 Brown&Williamson烟草公司利用假单胞菌（Pseudomonasputid)对烟草中的烟 碱进行降解，发现用假单胞杆菌菌液对白肋烟和烤烟的混合烟丝（1 : 1)进行18h处理后， 烟碱含量平均从2. 0 %降到了 0. 85 %。此外，有大量的降解烟碱的微生物被分离出来，包括 假单胞菌、中间苍白杆菌、阴沟肠杆菌、曲霉等。但是这些菌普遍受烟碱耐受性的影响，耐受 烟碱的浓度多小于4g/L，高浓度烟碱的不耐受性影响了其在烟草预处理以及高浓度烟碱废 水的处理领域的应用。为此，本专利技术旨在提供分离筛选一种全新的基内苍白杆菌新的菌株， 并且提供该菌株降解烟碱的方法。
技术实现思路
本专利技术针对目前烟碱降解微生物效率不高，特别是用于降解烟碱的微生物不能 够耐受高浓度的烟碱的现状，筛选具有较好的烟碱耐受性的烟碱降解菌基内苍白杆菌 (Ochrobactrumintermedium)，以及，提供一种该菌株降解烟碱的方法。 本专利技术提供了 一种耐受高浓度烟碱且具降解烟碱能力的基内苍白杆菌 (Ochrobactrumintermedium)，其保藏编号为：CGMCCNo. 10670,保藏日期为 2015年 3 月 30 曰。 进一步的，CGMCCNo. 10670 基内苍白杆菌（Ochrobactrumintermedium)是从青 岛卷烟厂周围土壤中通过选择性培养基分离得到的。 其生物学特征如下： 该菌为革兰阴性杆菌，菌体细胞为短杆状，没有芽孢，在显微镜下观察菌体的大小 为0.2~0.4ymXO. 4~1.1ym。菌体细胞呈短杆状，排列不整齐。在LB固体培养基表 面，菌体形成不透明的浅黄色小菌落，菌落干，边缘不整齐。 上述基内苍白杆菌菌株的经通用引物PCR获得16SrDNA序列与其它多株肠杆菌 的16SrDNA序列有95%的相似性但是不同。 其中上述PCR的引物为fDl:AGAGTITGATCCTGGCTCAG， rP2 ：CGGCTACCTTGTTACGACTT〇 进一步的，本专利技术还公开了耐受高浓度烟碱且具降解烟碱能力的基内苍白杆菌的 应用方法，即，利用保藏编号为：CGMCCNo. 10670的基内苍白杆菌降解烟碱并耐受高浓度的 烟碱。具体为： 保藏编号为：CGMCCNo. 10670的基内苍白杆菌能够在以烟碱作为碳源的培养基里 快速生长并降解烟碱， 烟碱作为碳源的烟碱降解菌培养基配方为：胰蛋白胨3~8g/l，牛肉膏2~5g/l， NaCl3 ~6g/l，MgS04 ? 7H20, 2 ~4g/l，烟碱 3 ~10g/l，pH值 7. 0 ~7. 4,最佳温度为 30 ~ 37。。， 烟碱作为碳源的烟碱降解菌培养的转速为100~140r/min， 烟碱作为碳源的烟碱降解菌培养在250ml的三角瓶中的装液量为40~80ml， 烟碱作为碳源的烟碱降解菌培养的培养时间为24~36小时， 烟碱降解培养基的灭菌条件为110~120°C，灭菌20~30分钟。 进一步的，保藏编号为：CGMCCNo. 10670的基内苍白杆菌能够在以烟碱作为碳源 的培养基里快速生长并降解烟碱，发现：利用该基内苍白杆菌能够在l〇g/l的烟碱浓度的 培养基中生长，在含有6g/l的培养基中能够降解烟碱。 进一步的，烟碱作为碳源的烟碱降解菌培养基中的复合氮源还可以为： 酵母浸膏、尿素、氯化铵等。 S卩，烟碱作为碳源的烟碱降解菌培养的复合氮源可以是牛肉膏和蛋白胨，但不局 限于牛肉膏和蛋白胨。 本专利技术CGMCCNo. 10670基内苍白杆菌一种分离的全新的菌株，该基内苍白杆菌能 够耐受尚浓度的烟喊，耐受浓度尚达l〇g/L。该基内苍白杆菌能够有效的降解烟喊，解决尚 浓度烟碱废弃物中的烟碱降解。 保藏信息： 菌株名称：基内苍白杆菌（Ochrobactrumintermedium) 参据的生物材料（株）CAS22083-74-5-SDQD 保藏日期：2015年3月30日 保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC) 保藏编号：CGMCCNo. 10670 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。【附图说明】 图1筛选获得菌株的烟碱降解能力 图2基内苍白杆菌的烟碱耐受性【具体实施方式】 - ：菌株筛选 1 ?培养基及培养条件：烟碱作为碳源的烟碱降解菌培养基配方为：胰蛋白胨3~8g/l，牛肉膏2~5g/ 1，NaCl3 ~5g/l，MgS04 ? 7H20,2 ~4g/l，烟碱 8 ~10g/l，pH值 7. 0 ~7. 4。最佳温度为 30~37°C，转速为100~140r/min，在250ml的三角瓶中的装液量为40-~80ml。 烟碱作为碳源的烟碱降解菌培养的培养时间为24~36小时。 上述烟碱作为碳源的烟碱降解培养基的灭菌条件为112°C灭菌30分钟。 上述培养基中添加1 %~1. 5%的琼脂制备成固体培养基用于菌株筛选。2.筛选 方法： 取烟厂、烟区周围土样按照lg样品5ml水溶解，将水样置于室温24小时活化然后 用无菌吸管从此试管中吸取lml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制 成10 \ 10 2、10 3、10 4、10 5、10 6不同稀释度的土壤。 取不同浓度的稀释土壤菌液涂布到以添加1%~1. 5%的琼脂的烟碱降解菌筛选 培养基制成的固体培养基培养皿上，培养36小时后挑取单菌落进行液体培养，并进行烟碱 降解试验和烟碱耐受性试验。经筛选共获得菌株12株，选取生长较快5株进行下一步实验。 二：烟碱降解的验证 取上述烟碱作为碳源的烟碱降解菌培养基，按照1~5%的接种量接种活化后的 基内苍白杆菌，接种于装有2mlLB培养基的试管中，生长到菌体密度为0D600大约1左右当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种耐受高浓度烟碱且具降解烟碱能力的基内苍白杆菌(Ochrobactrum intermedium)，其保藏编号为：CGMCC No.10670，保藏日期为2015年3月30日。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王倩，刘好宝，苏玉龙，史素娟，毛静静，张鸽，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37
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