miRNA-924在肝硬化诊疗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了miRNA-924在肝硬化诊疗中的应用，通过检测miRNA-924的表达水平可用于诊断病人是否患有肝硬化。本发明专利技术公开了miRNA-924在制备肝硬化诊断试剂盒中的应用，同时公开了miRNA-924在制备治疗肝硬化的药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，涉及一种。
技术介绍
肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，是各种病因长期作用而形成的弥漫性肝损 害，是多种慢性肝病病情发展的终末阶段，其主要发病机制是肝星状细胞的增殖、活化。肝 硬化起病隐匿，病情发展缓慢，晚期并发症多，预后差、病死率高。在我国大多数为肝炎后肝 硬化，少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。 miRNA是天然存在于体内的21-22nt的非编码RNA分子，是一类通过转录后基因 沉默对靶基因表达进行调节的RNA。据估计，生物体内约有1/3的基因受miRNA的调控。 miRNA与RISC的复合体通过碱基配对可与靶基因mRNA5' -UTR或者3' -UTR中的互补序列 相结合，抑制蛋白质翻译，或是引发mRNA降解，从而负调控靶基因的表达。 检测miRNA的表达水平可以为癌症的临床诊断提供参考。而miRNA的异常表达直 接导致一些与疾病发生相关基因的表达异常，诱发癌症的发生。已有报道证明miRNA可以 通过调控靶基因mRNA的表达，在肝硬化中起重要作用。本专利技术首次发现miRNA-924的在肝 硬化患者中的表达量远远低于对照正常组，miRNA-924的表达异常和肝硬化的发生发展相 关，这为肝硬化的miRNA的临床治疗提供了基础。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供miRNA-924在肝硬化诊断和治 疗中的应用。相比传统的肝硬化的诊断方法，使用miRNA来诊断肝硬化具有及时性、灵敏 性、特异性、，从而使患者了解病情，进而采取相应的预防和治疗措施。 为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案： 本专利技术提供了miRNA-924在制备诊断肝硬化的产品中的应用，所述miRNA-924选 自以下组中的至少一种：miRNA-924初始miRNA、miRNA-924前体miRNA、成熟miRNA-924 ;所 述miRNA-924初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA-924 ;所述miRNA-924前 体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA-924。 进一步，所述miRNA-924是成熟miRNA-924,核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO. 1所示。 应当知道，本专利技术的miRNA-924包括组成型核酸分子的功能等同物，即变体，其显 示完整miRNA-924核酸分子相同的功能，它们可能通过核苷酸残基的缺失、置换或者插入 而突变。 本领域人员熟知，为了保证miRNA的稳定性，可以在miRNA的一端或者两端增加保 护性碱基，如TT，也可对miRNA碱基进行修饰，但是不影响miRNA的功能。因此，本领域技术 人员熟知，在不影响miRNA-924功能的条件下，对miRNA-924进行碱基修饰或者在两端增加 碱基获得的序列同样包含在本专利技术的保护范围之内。 虽然在某些【具体实施方式】中所使用的是成熟miRNA-924,但是本领域技术人员 可以预期，初始miRNA(pri-miRNA-924)、前体miRNA(pre-miRNA-924)将可以获得与成熟 miRNA-924同样的技术效果，因为细胞有能力进一步将初始miRNA(pri-miRNA-924)、前体 miRNA(pre-miRNA-924)加工为成熟miRNA-924。 本专利技术的miRNA-924核酸分子可以以单链或双链的形式存在。成熟的miRNA-924 主要呈单链形式，而miRNA-924前体是部分自互补的，以形成双链结构。本专利技术的核酸分子 可以是RNA、DNA、PNA、LNA的形式。 本专利技术提供了miRNA-924在高通量测序平台中的应用。通过高通量测序能获知待 检测样本中miRNA-924的表达水平，将待测样本的结果同健康人的样本相比，容易判断待 测样本是否患有肝硬化。因此，通过高通量测序获知miRNA-924表达水平与肝硬化的发生 发展相关的应用同样包含在本专利技术的保护范围之内。 本专利技术提供了一种诊断肝硬化的产品，所述产品能够通过检测miRNA-924的表达 水平来诊断肝硬化。 进一步，上面所述的产品包括芯片或试剂盒；其中，所述芯片包括固相载体；以及 固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于上面所述 的miRNA-924的部分或全部序列。所述试剂盒包括用于检测上面所述的miRNA-924的表达 水平的试剂，所述检测miRNA-924表达水平的试剂包括针对miRNA-924的引物和/或探针。 进一步，上面所述的寡核苷酸探针还可包括针对现有技术中已经报道的可用于诊 断肝硬化的miRNA的寡核苷酸探针。将多种miRNA的检测探针放置在同一芯片上通过检测 多种miRNA指标联合诊断肝硬化的情况也包含在本专利技术的保护范围之内。上面所述试剂还 包括针对现有技术中已经报道的诊断肝硬化miRNA的引物和/或探针。将多种miRNA的检 测引物和/或探针放置在同一试剂盒中通过检测多种miRNA指标联合诊断肝硬化的情况也 包含在本专利技术的保护范围之内。 进一步，所述固相载体包括所述固相载体可采用基因芯片领域的各种常用材料， 例如但不限于尼龙膜，经活性基团（如醛基、氨基等）修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑 料片等。 所述的miRNA芯片的制备可采用本领域已知的生物芯片的常规制造方法，例如， 如果固相载体采用的是修饰玻片或硅片，探针的5'端含有氨基修饰的聚dT串，可将寡 核苷酸探针配制成溶液，然后采用点样仪将其点在修饰玻片或硅片上，排列成预定的序 列或阵列，然后通过放置过夜来固定，就可得到本专利技术的miRNA芯片。如果核酸不含氨 基修饰，则其制备方法也可参照：王申五主编的《基因诊断技术-非放射性操作手册》； J.L.erisi,V.R.Iyer,P. 0.BROWN.Exploringthemetabolicandgeneticcontrolof geneexpressiononagenomicscale.Science，1997 ;278:680和马立人，蒋中华主编?生 物芯片.北京：化学工业出版社，2000,1-130。 本专利技术提供了上面所述的miRNA-924在制备治疗肝硬化药物中的应用。 进一步，所述药物包含促进所述miRNA-924表达或增强miRNA-924功能的试剂。 所述促进miRNA-924表达或增强miRNA-924功能的试剂的靶标不限于miRNA-924本身，还 包括miRNA-924的上下游，例如：编码miRNA-924的基因组序列，miRNA-924靶基因、调控 miRNA-924的蛋白或者基因。 进一步，促进miRNA-924表达或增强miRNA-924功能的试剂包括蛋白、寡核苷酸、 小分子化合物。 优选地，所述的试剂是miRNA-924的模拟物、miRNA-924的激动剂、前体 miRNA-924、携带miRNA-924 的载体。 根据miRNA-924序列设计出它的模拟物或激动剂，miRNA-924的模拟物是化学合 成的小RNA，miRNA-924的激动剂是经过特殊标记和化学修饰的双链小RNA，将miRNA-924模 拟物或者激动剂转移到人体内后，它们能够明显上调miRNA-924的表达。 本专利技术提供了一种治疗肝硬本文档来自技高网...

【技术保护点】
miRNA‑924在制备诊断肝硬化的产品中的应用，其特征在于，所述miRNA‑924选自以下组中的至少一种：miRNA‑924初始miRNA、miRNA‑924前体miRNA、成熟miRNA‑924；所述miRNA‑924初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA‑924；所述miRNA‑924前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA‑924。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙锦云，杨承刚，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11