本发明专利技术公开了HER2基因扩增的检测引物组及试剂盒，该HER2基因扩增的检测引物组，包括HER2引物组和GAPDH内参引物组，两组引物分别包括其目标基因的上下游扩增引物以及Taqman荧光探针，本发明专利技术提供的试剂盒包括该引物组以及阳性质控品和阴性质控品。利用本发明专利技术的检测引物组和试剂盒可以快速、简便地检测乳腺癌患者中HER2基因是否发生扩增，相比FISH法，具有检测灵敏度高、时间短、一般1.5到2小时即可得到反应结果，并且成本低、假阳性少，适合于大规模临床开展。从而实现对HER2基因扩增快速、有效且准确的检测，保证及时的病例诊治及治疗效果监测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因检测
，具体涉及HER2基因扩增的检测引物组及试剂盒。
技术介绍
乳腺癌是女性肿瘤中发病率较高的癌症之一。因乳腺癌初期病症不明显，确诊时 往往已是恶性，严重危害妇女生命。2002年全球乳腺癌发病达到120万，到2010年，这个数 据超过了 160万。同时，2010年乳腺癌导致了 42. 5万例女性死亡。中国是乳腺癌发病率增 长最快的国家之一，中国抗癌协会公布的统计数字显示，我国近年来乳癌发病率正以每年 3%的速度递增，成为城市中死亡率增长最快的癌症，发病年龄也呈逐渐年轻化的趋势。中国 女性乳腺癌的发病年龄从三十岁开始增加，而且发病后就诊相对较晚，约有百分之三十五 的患者就诊时已经是中晚期。在我国妇女中，乳腺癌的发病率和死亡率均呈逐年上升势头， 中国主要城市10年来乳腺癌发病率增长了 37%，死亡率增长了 38. 9%，农村死亡率增长了 39.7%。在北京、上海、天津等大城市，乳腺癌已占据妇女恶性肿瘤发病的首位。数据显示， 几个大城市的乳腺癌发病率已从1979年的每十万人口里有19人上升到2010年的每十万 人口里有50~60人。 寻找有效的治疗手段一直是肿瘤学界研究的方向。现在已知，大约25~30%的乳腺 癌有HER2基因扩增。此外，不同比例的卵巢癌，前列腺癌，胃癌及肺癌也可能有HER2过度表 达的现象存在。正确检测和评定乳腺癌的J1ER2基因扩增状态对乳腺癌的临床治疗和预后 判断至关重要。赫赛汀（Here印tin)于1998年首次获批，它作为一种免疫治疗药物，能特异 性地抑制具有HER2癌基因扩增的癌细胞的生长，使病人预后大大改善。2012年6月8日， 新的乳腺癌药物Perjeta获得FDA的批准，在临床试验中，与现有标准护理相比，Perjeta使 癌症的恶化推迟了额外6个月。但与Herceptin相同，此药物也仅适用于HER2扩增阳性的 乳腺癌患者。因此可知，癌细胞HER2基因扩增是决定Herceptin和Perjeta是否有效的关 键性指标。 现阶段国内外一般采用免疫组织化学（IHC)法检测HER2受体蛋白表达状态和荧 光原位杂交（fluorescenceinsituhybridization，FISH)法检测HER2基因扩增水平。其 中IHC检测结果只能作为前期初步筛查使用，IHC检测具有成本低、技术简单、便于操作等 特点，常是临床检测的首选。但IHC容易受到组织影响，缺乏标准化，结果判断存在主观差 异，造成不同实验室之间的IHC检测结果可能存在差异。HER2的FISH检测具有较高的准确 性、灵敏度和特异性，其结果在不同实验室间一致性较高，目前是检测J1ER2基因扩增的"金 指标"。但是FISH存在仪器价格昂贵、检测周期长、患者收费高、检测者专业知识和实验室 条件的限制，检测试剂一直被国内或国外1、2个厂家所垄断，只能在具有资质的大医院进 行，造成大量人员不能得到及时的诊断而失去个体化用药的机会，因此急需一种高灵敏度、 准确度、易于操作标准化、多样化检测等优势检测方法。 有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
为了解决现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种常规的、适合大众医院的HER2 基因扩增检测产品，具体为一组HER2基因扩增的检测引物组，可以实现快速准确的检测， 适合制备成检测试剂大规模临床使用。 本专利技术的另一目的是提供包括该HER2基因扩增的检测引物组的试剂盒。 该HER2基因扩增的检测引物组，其特征在于，包括HER2引物组和GAPDH内参引物 组，其中 HER2引物组包括： 上游引物HER2(R)_F:如SEQIDNO: 1所示的核苷酸序列， 下游引物册1?2〇?)-1?:如3￡〇10勵:2所示的核苷酸序列， Taqman荧光探针HER2(R)-FP:如SEQIDN0:3所示的核苷酸序列在5'端标记荧光报 告基团，除5'端标记荧光淬灭基团； GAPDH内参引物组： 上游引物GAPDH-F:如SEQIDN0:4所示的核苷酸序列， 下游引物64?011-1?:如3￡〇10勵:5所示的核苷酸序列， Taqman荧光探针GAPDH-FP:如SEQIDN0:6所示的核苷酸序列在5'端标记荧光报告 基团，除5'端标记荧光淬灭基团。 上述引物组中，Taqman荧光探针的荧光淬灭基团优选标记在探针核苷酸序列的 3'端。 本专利技术针对HER2转录组受体结构域设计特异性引物，选择GAPDH为内参对照。PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分 别标记一个报告荧光报告基团和一个淬灭荧光报告基团。探针完整时，报告基团发射的荧 光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时Taq酶的5' -3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧 光报告基团和淬灭荧光报告基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一 条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。 作为优选方案，上述HER2基因扩增的检测引物组中，荧光报告基 团为6-羧基焚光素（6-carboxyfluorescein，FAM)、六氯-6-甲基焚光素 (Hexachlor〇-6_methylfluorescein，HEX)、VIC焚光染料、四氣 _6_ 駿基焚光素（tetrachl oro-6-carboxyfluorescein，TET)、駿基-X-罗丹明（Carboxy-x-rhodamine，R0X)、6_ 駿基 四甲基罗丹明（6-carboxytetramethylrhodamine，TAMRA)、横酰罗丹明（Sulforhodamine 101，TexasRed)、6-羧基-4'，5' -二氯-2'，7' -二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯（6-Carb oxy-f，5' -dichloro_2,，7' -dimethoxyfluorescein，JOE)、花菁 3 (cyanine3,Cy3)、花菁 3.5(〇5^11；[1163.5，073.5)、花菁5(05^11；[1165，075)和花菁5.5(05^11；[1165.5，075.5)中的 至少一种；荧光淬灭基团为6-羧基四甲基罗丹明、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基）苯甲酸、黑 洞淬灭剂1、黑洞淬灭剂2和黑洞淬灭剂3中的至少一种。以上荧光报告基团和荧光淬灭基 团均为现有市售商品。 其中黑洞淬灭剂 1(BlackHoleQuencher1，BHQ1)、黑洞淬灭剂 2(BlackHole Quencher2，BHQ2)、黑洞淬灭剂 3(BlackHoleQuencher3，BHQ3)、4_(4_ 二甲基氨基苯偶 氮基）苯甲酸（4_(4'-(1;[11161:1171&111；[110口1161171&20)&61120;[0&(^(1，0厶130￥1)为生物搜索技术 公司（Biosearch Technologies, Inc)的产品。 优选的，当荧光淬灭基团选自4-(4_二甲基氨基苯偶氮基）苯甲酸时，荧光报告基 团选自6-羧基荧光素、四氯-6-羧基荧光素、6-羧基-4'，5' -二氯-2'，7' -二甲氧基荧 光素琥珀酰亚胺酯、六氯-6-甲基荧光素、花本文档来自技高网...
【技术保护点】
HER2基因扩增的检测引物组，其特征在于，包括HER2引物组和GAPDH内参引物组，其中HER2引物组包括：上游引物HER2(R)‑F：如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，下游引物HER2(R)‑R：如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，Taqman荧光探针HER2(R)‑FP：如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列在5’端标记荧光报告基团，除5’端标记荧光淬灭基团；GAPDH内参引物组：上游引物GAPDH‑F：如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列，下游引物GAPDH‑R：如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，Taqman荧光探针GAPDH‑FP：如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列在5’端标记荧光报告基团，除5’端标记荧光淬灭基团。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：丁朋举，贾哲，王林海，刘沛，
申请(专利权)人：北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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