与合成的β‑1,6 葡糖胺寡糖相关的方法和组合物技术

本发明专利技术涉及与合成的β‑1,6葡糖胺寡糖相关的方法和组合物，尤其涉及与载体缀合的合成的寡‑β‑(1→6)‑2‑氨基‑2‑脱氧‑D‑吡喃葡萄糖苷的组合物，以及其制备方法和用途。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】与合成的（3-1,6葡糖胺寡糖相关的方法和组合物 本申请为2009年7月21日提交的、专利技术名称为"与合成的0 -1，6葡糖胺寡糖相 关的方法和组合物"的PCT申请PCT/US2009/004206的分案申请，所述PCT申请进入中国国 家阶段的日期为2011年3月18日，申请号为200980136515. 1。 相关申请 本申请要求分别于2008年7月21日和2009年2月20日提交的美国临时申请 61/135493和61/208155的优先权，两者的全部内容均在此引入作为参考。 政府支持 本专利技术得到了美国国立卫生研究所R01AI046706的部分支持。美国政府在本专利技术 中拥有权利。 专利
本专利技术涉及与合成的寡-P - (1 - 6)-2-氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖苷相关的 组合物和方法，其中所述的寡-P - (1 - 6) -2-氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖苷在本文中与 寡-0 - (1 - 6) -D-葡糖胺或寡葡糖胺互换使用。 专利技术背景 葡萄球菌（Staphylococci)是正常栖息并寄居在人类皮肤与粘膜上的革兰氏阳 性细菌。如果在手术或其它创伤过程中皮肤或粘膜受损，葡萄球菌就有机会进入内部组织， 引起感染发生。如果葡萄球菌局部增殖或者进入淋巴或血液系统，可能造成严重感染并发 症，例如与葡萄球菌型菌血症有关的并发症。这些并发症包括感染性休克、心内膜炎、关节 炎、骨髓炎、肺炎以及各种器官的脓肿。 葡萄球菌包括产生游离凝固酶的凝固酶阳性有机体和不产生游离凝固酶的凝固 酶阴性有机体。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)是最常见的凝固酶阳性葡萄球 菌。金黄色葡萄球菌通常造成局部感染，或者是血管外部位或者是血管内部位，最终都可能 导致菌血症。金黄色葡萄球菌还是急性骨髓炎的主要原因，并导致葡萄球菌性肺炎感染。此 外，金黄色葡萄球菌是造成大约1-9%细菌性脑膜炎病例和10-15%脑脓肿的原因。 凝固酶阴性葡萄球菌已有至少31个已知的种类，其包括表皮葡萄球菌 (S. epidermidis)、腐生性葡萄球菌（S. saprophyticus)、人葡萄球菌（S. hominis)、 沃氏葡萄球菌（S. warneri)、溶血性葡萄球菌（S. haemolyticus)、腐生葡萄球菌 (S. saprophiticus)、科氏葡萄球菌（S. cohnii)、木糖葡萄球菌（S. xylosus)、模仿葡萄球 菌（S. simulans)和头葡萄球菌（S. capitis)。表皮葡萄球菌是与静脉内进入装置有关的最 经常的致感染物，也是原发性医院菌血症最常见的分离物。表皮葡萄球菌还与人工瓣膜心 内膜炎有关。 葡萄球菌还是动物细菌感染的通常来源。例如，葡萄球菌性乳腺炎是反刍动物例 如牛、绵羊和山羊的常见问题。此疾病通常使用抗生素治疗以减少感染，但是此治疗过程花 费昂贵，并且仍会造成乳液产量的损失。迄今为止所鉴定的最有效的疫苗是皮下给药的活 的完整金黄色葡萄球菌疫苗。然而，给药活疫苗具有感染的风险。基于此原因，许多研究者 试图制备灭活的金黄色葡萄球菌疫苗，和/或分离可以诱导针对金黄色葡萄球菌免疫的荚 膜多糖或者细胞壁成分。 有时在疫苗中使用载体化合物以提高针对抗原的免疫反应。例如，某些疫苗中的 载体可用于刺激对抗原性部分（moiety)响应的T细胞辅助。天然存在的抗原性部分或天 然存在的物质的片段有时更不顺从且更不易操作和/或缀合至其他部分例如载体化合物， 这会降低此类疫苗的治疗效果。
技术实现思路
本专利技术提供了用于产生抗原性组合物诸如但不限于疫苗的新方法和化合物。特别 是，本专利技术提供了用于修饰寡糖抗原的新方法。这些方法包括寡糖的受控合成，所述寡糖 (a)包含预定顺序的单糖单体且（b)与载体化合物缀合。所得到的缀合物（conjugate)更 能够刺激（通过诱导或增强）针对目标微生物多糖抗原的免疫反应。如本文所描述的那样， 此类免疫反应可用于治疗和/或预防各种感染，包括但不限于葡萄球菌感染。 本专利技术的各方面涉及特殊的连接体（linker)(或连接因子或间隔基或连接剂，这 些术语在本文中可互换使用），以及他们在合成缀合物中的应用。特别感兴趣的是寡糖和各 种载体化合物的缀合物。这些寡糖包括寡-0 - (1 - 6) -D-葡糖胺（本文称为：连接的葡糖 胺），其包含通过P -(1 - 6)连接彼此相连的葡糖胺单体。构成该连接的葡糖胺的各单体 中的一个或多个可以是N-乙酰化的。因此，单体可以是D-葡糖胺或N-乙酰-D-葡糖胺单 体，并且该连接的葡糖胺可以包含确定顺序的一种或两种类型的这些单体（或单糖，在本 文中该术语可互换使用）。本专利技术的寡葡糖胺还在其"还原"末端包含间隔基，所述间隔基 具有含硫醇的基团。该间隔基用于将该寡葡糖胺与载体相连。载体可以包含氨基酸（诸如 肽或蛋白质），尽管他们并不限于此。 因此，在一方面，本专利技术提供了以下实施方案： 1?式I的化合物 其中X是任意的原子或基团，Y是硫保护基，并且n大于1。 2.实施方案1的化合物，其中Y是酰基。 3.实施方案1或2的化合物，其中Y是乙酰基，并且所述化合物具有式II的结构12 其中Ac是乙醜基。 2 4.实施方案1的化合物，其中所述化合物是式I的活化的酯。 5.实施方案1的化合物，其中所述化合物是式I的活化的酯的氰基、叠氮基或卤素 衍生物。 6.实施方案4的化合物，其中所述化合物具有式III的结构 (4-乙酰基硫烷基丁酸N-羟基琥珀酰亚氨基酯） 其中Ac是乙醜基。 7.实施方案4的化合物，其中所述化合物具有式IV的结构： (4-乙酰基硫烷基丁酸N-硝基苯基酯） 其中Ac是乙醜基。 8.合成4-乙酰基硫烷基丁酸N-羟基琥珀酰亚氨基酯（式III)的方法，该方法包 括 使4-乙酰基硫烷基丁酸（式V) 其中Ac是乙醜基， 与三氟乙酸N-羟基琥珀酰亚氨基酯（CF3COOSu)反应，得到4-乙酰基硫烷基丁 酸N-羟基琥珀酰亚氨基酯（式III)。 9.合成4-乙酰基硫烷基丁酸N-硝基苯基酯（IV)的方法，该方法包括 使4-乙酰基硫烷基丁酸（式V) 其中Ac是乙醜基， 与三氟乙酸N-硝基苯基酯（CF3C00pNp)反应，得到4-乙酰基硫烷基丁酸N-硝基 苯基酯（式IV)。 10.合成与载体缀合的寡糖的方法，该方法包括 使寡糖首先与具有式Va或Vb结构的化合物反应 其中m是选自1至10的数字，p是选自1至20的数字，并且R是H或烷基， 其次与式I、II、III或IV的化合物反应，和 随后与载体反应， 其中所述的寡糖是P-1-6连接的葡糖胺。 11.组合物，该组合物包含 载有0-连接的连接体的寡糖，其中所述的连接体包含 12.实施方案11的组合物，其中所述的寡糖是P -1-6连接的葡糖胺。 13.实施方案10或11的组合物，其中所述寡糖为2-20个单体长。 14.实施方案10或11的组合物，其中所述寡糖为5-11个单体长。 15.实施方案10或11的组合物，其中所述寡糖为7、9或11个单体长。 16.实施方案15的组合物，其中所述的寡糖是100%乙酰化的。 17.实施方案15的组合物，其中所述的多糖是少于50%乙酰化的。 18.包含寡糖-本文档来自技高网...

【技术保护点】
式I的化合物其中X是任意的原子或基团，Y是硫保护基，并且n大于1。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：G·B·皮埃尔，N·尼凡蒂埃夫，Y·茨韦特科夫，M·格宁，
申请(专利权)人：布赖汉姆妇女医院，
类型：发明
国别省市：美国;US