本发明专利技术公开了一种通式（ Ⅰ）的维生素B5（VB5，（R）-N-（3，3-二甲基-2，4-二羟基-1-氧代丁基）-3-丙氨酸钙盐）的偶联物，由维生素B5半抗原与产生抗原性的载体物质钥匙孔蓝蛋白（KLH）偶联而成，其中n为与一个钥匙孔蓝蛋白分子结合的VB5的分子数，n为整数，KLH为钥匙孔蓝蛋白，分子量范围是450 KDa~1300 KDa。本发明专利技术还公开了所述的偶联物的制备方法，即将维生素B5与产生免疫原性的载体物质连接起来，结合为具有诱发动物免疫系统产生抗体的偶联物。本发明专利技术具有方法便捷，快速，特异，准确的特点，为用所述偶联物制备VB5的酶联免疫检测试剂提供了广阔的应用空间。(Ⅰ)。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种维生素类，尤其涉及维生素B5的偶 联物及其制备方法与应用。属维生素免疫检测系统。
技术介绍
本专利技术涉及的下列名称适用于整个说明书和权利要求书： KLH:钥匙孔蓝蛋白（KeyholeLimpetHemocyanin)，Sigma公司PBS:磷酸缓冲液（PhosphateBafTeredSaline) (0.01M,pH=7. 40) 维生素B5:天津希恩思（Heowns)公司产品 三正丁胺：天津光复精细化工研究所产品 氯甲酸异丁酯：北京百灵威（J&K)公司产品 透析袋：北京索莱宝（Solarbio)公司产品 乂85是维生素B族的一种，又名"遍多酸"或"泛酸"。主要作用是参加体内能量的制造， 可以控制脂肪的新陈代谢.它又是大脑和神经必需的营养物质，对于保持皮肤和头发的健 康，对于维持肾上腺的正常机能非常重要。 身体的每一个细胞都需要VB5，否则无法将糖或脂肪转化为能量，也无法利用对氨 基苯甲酸及胆碱。缺乏VBJt，肾上腺特别容易受损，肿大或出血，无法分泌可的松及其他 激素。在任何一种压力下，如疾病、伤害、药物副作用、烫伤、外科手术、情绪低落等，需要更 多的激素时，对VB5的需要量也相应增加。事实上，经常服用VB5与补充可的松同样有效。 缺乏VB5也是造成过敏的主要原因，喂食牛奶的婴儿之中，有60%都曾经有过敏的 现象，母乳喂养的婴儿则没有这种毛病。牛奶、罐装鲜乳及婴儿配方食品中所含的VB5，在消 毒的过程中大部分都已经流失，这种过敏可能终其一生都无法根治。然而，只要营养充足， 特别补充丰富的VB5&维生素C，症状很快就会消失。缺乏VB5，还会有血糖过低、持续倦怠、 眩晕、紧张、头痛甚至晕倒等症状。健康人的血糖因转化为能量而降低时，身体中所储存的 淀粉或肝糖，会立即转化为糖，补充血糖的浓度。如果所储存的肝糖已经消耗完毕，没有吃 其他的食物补充，肾上腺激素会立刻使身体中的蛋白质，特别是淋巴组织分解成脂肪及糖。 这些糖有时候会补充血糖至正常浓度，而一部分转变为肝糖储存起来，以备未来之用。当VB5充足的动物在承受压力时，血糖的浓度仍然维持高水平，储存在肝脏中的淀 粉(肝糖）量立刻增加7倍，准备在任何紧急状态下，随时补充能量。人体与动物一样，缺乏 VBJt，无法制造能将蛋白转化为糖(及脂肪）的肾上腺激素，血糖持续偏低，将导致哮喘、急 躁、胃溃疡等症状。 很多藉助可的松治疗的疾病，例如关节炎、爱迪森氏病（Addison'sdisease)、红斑 狼疮（Lupuserythematosus)等，都是由于缺乏Viy3Zf引起。体重过重又缺VB5的人，容易罹 患关节炎及痛风两种疾病。因为可的松的毒性很强，不可过量使用。补充足量的VB5、维生 素C、抗压力维生素及其他必需的营养素，强化本身的肾上腺功能，自行分泌足够的可的松， 才是对抗疾病的根本之道。VB5在人体中的重要性可见一斑，因此人体中保持足量的VB5是非常重要的，而VB5 的主要来源是某些事物或者保健品，这些物品中VB5含量的检测就变得十分重要。到现在 为止，检测方法有微生物法，高效液相色谱法，其中高效液相色谱法的检测应用最为 广泛。这些方法准确，稳定，可靠，可以作为标准方法。但仪器法价格昂贵，费时较长，且造 成有机溶剂污染，需要大型仪器设备，需要专门的技术人员，所以难于用于现场操作。酶联 免疫检测法（ELISA)提供了一种极好的扫描手段。该法具有快速，准确，简易，不需要专门 人员操作等优点，这使得ELISA法成为一种理想的，可用于常规扫描的检测方法。酶联免疫 检测法的核心是需要高质量的抗体。大多数维生素包括VBjP是小分子有机化合物，不具 有免疫原性，称之为半抗原。所以，必须把这些化合物转变成能引发动物免疫系统产生抗体 的免疫原(又称之为完全抗原)。经检索，目前国内尚无VB5含量检测的ELISA试剂盒，因此 研究免疫原合成及抗体制备就显得十分必要。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术要解决的问题是：提供一种能引发动物免疫系 统产生针对VB5有特异反应的抗体的免疫原，即VB5的偶联物及其制备方法。同时，本专利技术 还提供了所述的VB5的偶联物作为免疫原在制备VB5特异反应抗体中的应用。 本专利技术的VB5偶联物，有VB5半抗原与产生抗原性的载体物质钥匙孔蓝蛋白构成。 本专利技术所述的乂85的偶联物，其结构通式如（I)其中m为与一个钥匙孔蓝蛋白结合的VB5的分子个数，所述n为整数1~20,KLH为钥 匙孔蓝蛋白（KeyholeLimpetHemocyanin)，分子量范围是 450KDa~ 1300KDa; 上述偶联物显示出如下物化特征： (1)外观：白色粉末固体 上述的偶联物，其特征是：所述n为整数5~15，KLH分子量范围是450KDa~1300 KDa0 上述的VB5的偶联物的制备方法是：将VB5与产生免疫原性的载体物质连接起来， 结合为具有诱发动物免疫系统产生抗体的偶联物，并保持该偶联物的生物活性不变。 上述的VB5的偶联物的制备方法，由如下步骤完成： (1) 溶液A的制备：在冰浴中，将维生素B5溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF)中，全溶解后 向其中滴加三正丁胺，搅拌0.5h，再滴加入3. 82W氯甲酸异丁酯，反应Ih，反应生成活 性中间体； (2) 溶液B的制备：将KLH溶于pH为7. 38~7. 56,浓度为0? 01M~0. 02M的磷酸缓冲溶 液中，配成5mg/ml的溶液，备用； (3) 分别取溶液A和溶液B，在4°C温度下，把溶液A逐滴加入到不断搅拌状态下的溶液 B中，反应过夜，得溶液C; (4) 溶液C用上述磷酸缓冲液搅拌透析70~80小时，再改用蒸馏水透析20~30小时，每 6h更换一次透析液； (5) 冻干透析液，得到白色维生素B5的偶联物。 在上述的偶联物的制备方法中：步骤（1)所述VB5与三正丁胺、氯甲酸异丁酯摩 尔比为I:1.I:1. 4。 在上述的VB^偶联物的制备方法中：步骤（3)所述的VB5与钥匙孔蓝蛋白的质量 数比为1 :1。 本专利技术所述的VB5的偶联当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种VB5的偶联物，由（R）‑N‑3，3‑二甲基‑2，4‑二羟基‑1‑氧代丁基）‑3‑丙氨酸钙盐（VB5）半抗原与产生免疫原性的载体物质偶联而成，所述载体物质为优选蛋白质，蛋白片段，合成多肽或半合成多肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郗日沫，许坤，孟萌，尹永梅，张丽沙，李小刚，董亚庆，王玉芬，宋兆瑞，龙浩，
申请(专利权)人：天津三箭生物技术有限公司，南开大学，李小刚，
类型：发明
国别省市：天津;12
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