本发明专利技术公开了Pedinophyllol B在制备血管保护性药物中的应用，属于药物领域。通过MTT法和LDH活性检测证实Pedinophyllol B对H2O2氧化损伤ECV-304细胞具有保护作用；通过细胞上清液MDA含量、SOD活性、GSH-Px活性的测定，证实Pedinophyllol B有清除自由基和活性氧的抗氧化特性，可以进一步研究开发成制备血管保护性药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化合物PedinophyllolB的新用途，具体涉及PedinophyllolB在制 备神经保护药物中的应用。
技术介绍
NaLiu等人首次分离纯化出化合物PedinophyllolB，并将成果发表在著名天 然产物杂志JournalofNaturalProduct上（HighlyOxygenatedent-Pimarane-Type DiterpenoidsfromtheChineseLiverwortPedinophylluminterruptumand TheirAllelopathicActivities，J.Nat.Prod.，2013, 76,1647-1653)。目前尚未有该化合物的活性报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种PedinophyllolB的医药用途。 上述目的是通过如下技术方案实现的： PedinophyllolB在制备血管保护性药物中的应用，所述PedinophyllolB化学结 构式如下， 【具体实施方式】 下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容。 实施例I:PedinophyllolB的分离制备及结构确证PedinophyllolB的制备方法同文献报道的制备方法（HighlyOxygenated ent-Pimarane-TypeDiterpenoidsfromtheChineseLiverwortPedinophyllum interruptumandTheirAllelopathicActivities?J.Nat.Prod. ?2013?76?1647-1653) 〇 结构确证：分子式为C2C)H2803,不饱和度为7c3核磁共振氢谱数据5H(ppm，DMS〇-d6， 500MHz) :H-2 (2. 82,dt，J= 4. 9,13. 3)，H-2 (2. 23,m)，H-3 (1. 79-1. 83,m)，H-5 (2. 39,dd， J= 3. 8,12.6)，H-6 (2.28,m)，H-7 (6.80,d，J= 4.8)，H-Il(1.96,dt，J= 17. 9, 2. 5)， 36，m)，H-12(1. 73，m)，H-12(2. 24，m)，H-15(5. 70，dd，J= 10. 7,17. 6)，H-16(5. 07， d，J= 10. 7)，H-16 (4. 83,d，J= 17. 6)，H-17 (I. 23,s)，H-18 (I. 02,s)，H-19 (I. 19,s)， H-20(1.19,s);核磁共振碳谱数据Sc(ppm，DMS0-d6，150Hz) :218.5(C，1-C)，37.1(CH2， 2-C)，41. 5 (CH2, 3-C)，32. 7 (C，4-C)，44. 2 (CH，5-C)，24. 6 (CH2, 6-C)，137. 8 (CH，7-C)， 138. 4 (C，8-C)，76. 8 (C，9-C)，54.I(C，10-C)，26. 8 (CH2,11-C)，31.I(CH2,12-C)，50. 8 (C， 13-C)，203.I(C，14-C)，142. 5 (CH，15-C)，115.I(CH2,16-C)，24. 8 (CH3, 17-C)，32. 0 (CH3， 18-C)，22. 4 (CH3,19-C)，15. 4 (CH3, 20-C)。结构确证数据与文献报道一致，因此可以确定本 专利技术制备的化合物即为文献报道的PedinophyllolB。 实施例2:PedinophyllolB的药理作用试验 -、材料和仪器 血管内皮细胞（ECV-304)由山东大学医学院免疫教研室馈赠。PedinophyllolB 自制，HPLC归一化纯度大于98%。RPMI-1640干粉培养基、胰蛋白酶购于美国Gibeo公司。 胎牛血清购于天津TBD公司。MTT、琼脂糖、AilllexinV-FITC购于美国Sigma公司。LDH、 MDA、SOD、GSH-Px测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。DMSO购于中国医药（集团） 上海化学试剂有限公司。苏木素购于福州迈新生物技术有限公司。Rhodaminel23购于美国 Solarbic公司。阳性药川考嗪购自上海源叶生物科技有限公司。 倒置光学显微镜（日本OlymPus公司），二氧化碳培养箱（美国FormaScientific 公司），电子分析天平（ER-182A型）（日本A&D公司），超净工作台（2HJH-1209型）（上 海智城分析仪器制造有限公司），流式细胞仪（FACSVantage型）（美国BeetonDiehnson 公司），恒温振荡器（江苏太仓市实验设备厂），2420Viet〇r3多标记分析仪（美国Perki 此ImerLifeseienee公司），721型可见紫外光栅分光光度计（上海精密科学有限公司）， 电热恒温水浴箱（上海医疗仪器三厂生产），酶联免疫检测仪（MK3Multiskan)(上海 ThLabsystem仪器公司）。 二、试验方法 1、细胞培养ECV-304细胞以RPMI-1640培养基于37°C，5%CO2培养箱中传代培养。镜下观察， 待细胞汇合率达到70%以上时用胰蛋白酶消化传代，以生长稳定的第3-5代细胞制备细胞 悬液。 2、细胞分组及处理 取生长良好的ECV-304细胞制成细胞悬液，接种于96孔、24孔、6孔细胞培养板 或培养皿中，37°C，5%CO2培养24h。随机分为六组：①正常组；②H2O2模型组（150ymol/ L);③川考嘆（TMP) (50ymol/L)+H202组；④PedinophyllolB(10iimol/L)+H202组； ⑤PedinophyllolB(50ymol/L)+H2O2组；⑥PedinophyllolB(100ymol/L)+H2O2组。 3、实验项目及检测指标 3.IMTT法检测细胞活力 将生长良好的ECV-304细胞制备成5XIO4AiL的细胞悬液，按每孔100yL接种 于96孔板，置37°C，5%CO2孵育24h。细胞分组及处理上。继续培养6h和12h后，每孔加 入10yLMTT溶液（终浓度0? 5mg/L)置37°C，5%CO2培养箱孵育4h后，每孔加入100yL DMSO,静置IOmin后振荡60s，30min内置酶联免疫检测仪上检测570nm处吸光度值（OD5J。 按公式：细胞损伤抑制率=(用药组0D57。-模型组OD5J八正常组0D57。-模型组 OD5JX100%，计算细胞损伤抑制率。 3.2LDR释放率测定 取生长良好的ECV-304细胞制成IXIO5AiL的细胞悬液接种于24孔板，置37°C， 5%C0J?育24h。细胞分组及处理同上。继续培养6h和12h，收集培养上清液。PBS洗涤2 次后，每孔加入 〇.5mL细胞裂解液（150mmol/LNaCl，150mmol/LTris-HCI，lmmol/LEDTA， 1%TritonX-100)，于4°C静置15min后振荡数分钟，10000rpm，4°C离心IOmin收集细胞裂 解液，参照LDH试剂盒说明书分别测定上清液和细胞裂解液中的LDH活性。 按公式：LDH释放率=上清液中本文档来自技高网...
【技术保护点】
Pedinophyllol B在制备血管保护性药物中的应用，所述Pedinophyllol B化学结构式如下，
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林天样，
申请(专利权)人：林天样，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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