本发明专利技术涉及抗微生物的cathelicidin肽LL-37，LL-37的N-末端片段，或在C-末端具有1-3个氨基酸的LL-37的延伸序列的用途，所述用途用于刺激上皮和基质细胞的增殖，从而使伤口如慢性溃疡愈合。通过在药物组合物及包含LL-37的生长培养基中包括成双层性极性脂质，具体为双半乳糖基甘油二酯，可降低LL-37的细胞毒性作用。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】CATHELICIDINLL-37及其衍生物在伤口愈合中的用途 本申请是申请日为2004年01月28日，专利技术名称为"CATHELICIDIN LL-37及其衍 生物在伤口愈合中的用途"的中国专利申请201010150582. 3的分案申请。
本专利技术涉及肽LL-37和N-末端片段，及其功能性衍生物，其中所述肽可用于细胞 增殖，上皮修复和伤口愈合。本专利技术也涉及包含一种或一种以上所述肽的药物组合物。
技术介绍
上皮构成了宿主和可能的有害环境之间的第一道屏障，因此该界面的保护是至关 重要的。伤口表明屏障破损并立即启动一系列紧密协调的事件，其目的是为了迅速恢复此 屏障的完整性。在较高等生物中紧急伤口闭合已经得到进化，这不同于在较低等物种见到 的组织完全再生的费时过程。伤口愈合受损是临床医学的一个主要难题，它的范围从随年 龄增长见到的"正常"愈合相对迟缓到病理性的非愈合性（non-healing)溃疡。 慢性溃疡是临床的主要问题，尽管我们对生理损伤过程的理解在过去数十年逐渐 增加，但仅仅获得了微小的治疗上的进步。独特的病因学可能导致溃疡在不同临床状况发 展，但无论原因如何，非愈合性溃疡都以上皮细胞不能迀移，增殖并闭合屏障缺陷为特征。 慢性皮肤溃疡最常见的种类是由于静脉功能不全导致的腿溃疡。这些患者出现外周静脉水 肿随后是皮肤溃疡，但是动脉循环是完好的。由于动脉硬化缺陷导致的腿和脚溃疡较不常 见。 另外，皮肤溃疡的发展与免疫疾病如坏疽性脓皮病（pyoderma gangrenosum)和脉 管炎（vasculitis)相关。现在的治疗包括长期的全身性免疫抑制法，它并不总是有效。在 口腔、生殖器和胃肠粘膜的上皮缺陷和溃疡是常见的，并会导致很多痛苦。根本的病理机制 不很清楚，例如口疮（aphtae)和侵蚀性苔藓（erosive lichen)，且治疗方法贫乏。 传统伤口护理包括通过机械或酶去除坏死残渣来形成肉芽组织。细菌密集定居的 伤口可能需要抗菌治疗来避免侵入性感染（invasive infection)。使用多种局部抗微生物 试剂，如碘酒（iodine)，氯已定（chlorhexidine)，双氧水（hydrogen peroxide)，银和抗生 素，但必须考虑这些试剂对基质和新生表皮（neoepidermis)的有毒作用的风险。一旦从伤 口清除了坏死组织，应用敷料来促进肉芽组织形成。可以得到很多种这样的敷料，并且多项 动物研究和临床试验已经证明了它们对伤口愈合的有益效果。 某些部分的伤口仍是治疗抵抗性的，所以需要附加的治疗。在过去的十年中 生长因子在加快伤口修复中的潜在用途引起了很多关注。生长因子是控制对组织修复 关键的细胞过程（cellular process)的分子，包括细胞迀移，增殖，血管生成和细胞 外基质从头（de novo)合成。已经在很多实验中显示出了这些生长因子的有益效果 (Scharffetter-Kochanek 等，Basic Res Cardiol 93:1-3,1999)。然而，至今在临床实 践中用生长因子治疗慢性溃疡都很令人失望。现在在美国和欧洲（瑞典除外）被许可的 becaplermin (Regmnex?)是唯一，优选在糖尿病的足溃疡中使用的生长因子。用生长因 子治疗慢性溃疡的临床失败的原因被认为涉及传递问题和迅速降解。 与此同步，使用生物工程化的人皮肤类似物中的自体和同种异体材料的组织疗法 已经有了进展。培养的上皮角质形成细胞构成了用于覆盖（例如烧伤病人的）大面积损 伤的皮肤的功能疗法，但该治疗昂贵，费时并且需要实验室设备。为提供表皮基底（dermal substrate)已经使用了多种策略，如无细胞的人尸体和有细胞或无细胞的牛胶原蛋白。所 有可行的方法都具有相当多的不足，如可能传染疾病，费用高，以及几乎不适合基础伤口护 理。 抗微生物肽是先天免疫系统的效应分子，其作用是保护宿主抵御可能的有害微生 物。进化中它们是保守的，并在自然界分布广泛。人类的抗微生物肽，目前只有少数进行了 鉴定；其中防卫素（defensin)和人cathelicidin抗微生物肽hCAP18已涉及在上皮防护中 起作用（Selsted 等，J Biol Chem258:14485-14489, 1983)。 WO 96/08508涉及人多肽FALL-39,以及包含所述肽并具有抗细菌的抗微生物活 性的药物组合物。所述肽由开始的四个氨基酸残基被命名为FALL-39,并由被三个分别的 小组同时鉴定的前体蛋白的39个氨基酸的C-末端部分组成（Cowland等，FEBS，1995 ; Agerberth 等，Proc Natl Acad Sci USA 1995 ;Larrick 等，FEBS Letters 1996)。所述肽 显示具有抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的有效抗微生物活性。进一步定性C-末端肽显 示去除了开始的两个（FA)得到LL-37,包含37个氨基酸的较短序列，它是现在可接受的名 称（Gudmundsson 等，Eur J Biochem 238:325-332, 1996)〇 该前体蛋白命名为hCAP18,它是人阳离子抗微生物蛋白，还是包含cathelin的 cathelicidin蛋白家族的成员之一，其中cathelin在进化中保守并且C-末端部分在不 同物种可变。在人类中，hCAPIS是此蛋白家族的唯一成员，而在其它物种中，如小鼠和猪， 则有此蛋白家族的若干成员。所述C-末端肽LL-37被认为在细胞外起作用，并且没有证 据证明此前体蛋白在细胞内被切割。hCAP18/LL-37存在于白细胞以及屏障器官（barrier organ)如皮肤，粘膜，呼吸道上皮和生殖器官。hCAP18/LL-37定位于屏障上皮（barrier epithelia)似乎与该肽在预防局部感染和全身性微生物侵入中的保护性作用是一致的。 LL-37被描述为无半胱氨酸的肽，它能容纳（adopt)两亲性的（amphiphatic)，或换言之两 亲性的（amphiphilic)，a-螺旋构象。高阳离子性（cationicity)与稳定化的两亲性的 a_螺旋结构似乎是此肽抗革兰氏阳性细菌和真菌的抗微生物作用所需要的，这已经通过 实验予以证明（Gianga-spero等，Eur J Biochem268:5589-5600,2001)。两亲性的和 a-螺 旋的结构似乎对于杀死革兰氏阴性细菌不太重要。与炎症相关，hCAP18/LL-37在皮肤上 皮（Frohm等，J Biol Chem272:15258_15263, 1997)及粘膜（Frohm Nilsson 等，Infect Immun67:2561-2566, 1999)上调。 现有技术 Dorschner 等，J Invest Dermatol 117:91-97, 2001，显不切割后 cathelicidin 的表达量在人和鼠皮肤中增加，并且缺乏鼠同系物cathelicidin基因不能保护这些小鼠 抵御A族（Group)链球菌侵入。 WO 96/09322，儿童医疗中心公司（Children' s Medical Center Corporat本文档来自技高网...
【技术保护点】
SEQ ID NO 1所示的肽LL‑37或其可药用盐在制备用于治疗由于静脉功能不全造成的慢性溃疡的药物中的用途。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：莫娜斯塔尔巴克达尔，约翰海尔博恩，安德斯卡尔森，康尼博根托夫特，
申请(专利权)人：利波佩普泰德公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE
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