一种灯盏花组培育苗方法技术

本发明专利技术涉及一种灯盏花组培育苗方法，属于植物组织培养技术领域。该方法具体包括：外植体的选择、外植体的消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养和炼苗六大步骤。本发明专利技术较传统的灯盏花种苗生产技术，具有生产工艺简便，繁育时间短，繁殖率高，不受季节和地域限制等优点，可用于灯盏花种苗工厂化生产。如果按一株灯盏花植株推算，一株灯盏花可采集20-30个外植体，经诱导培养40天可获得愈伤组织以及每代30天的增殖培养6-8代，再经25天的生根培养及14-21天的炼苗。以增殖6代计算，一株灯盏花成苗，在历时不到一年的时间里，可获得约30-50万商品苗，具有较高的经济效益。

【技术实现步骤摘要】
一种灯盏花组培育苗方法
本专利技术属于植物组织培养
，涉及一种重要原料药用植物组织培养方法，特别涉及名称为灯盏花的药用植物组织培养方法。
技术介绍
灯盏花（短葶飞蓬），Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.，为菊科多年生草本植物，也叫灯盏细辛。主要分布于海拔1200-3500m的高山和亚高山开旷山坡，草地或林缘。全草辛、微苦，温，具有祛风除湿，活络止痛，健脾消积的功效，用于瘫痪，风湿关节痛，牙痛，胃痛，小儿疳积，小儿麻痹及脑膜炎后遗症等，是我国用于治疗心血管疾病中成药的重要原料植物。灯盏花药材市场需求量逐年增长，而野生资源的有限及过度的采挖，灯盏花资源正逐年减少。近年部分地区开展了灯盏花的人工种植技术开发，需要快捷的为人工种植提供稳定、充足的优良种苗。采用组培技术进行灯盏花种苗的快速繁殖，可为灯盏花的规模化人工种植提供优质、稳定的充裕种源，又可为灯盏花药用成分的合成机理、功能基因、分子育种等研究奠定基础，还可保护野生灯盏花的野生资源。
技术实现思路
本专利技术针对以上所述的灯盏花种苗传统繁殖方法的不足，专利技术了一种组分简单、操作简便、生产周期短，可直接批量生产灯盏花植株的组织培养技术。本专利技术除非另有说明，否则百分号代表的为质量百分数，比例代表的是质量比。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种灯盏花组培育苗方法，包括如下步骤：步骤（1），外植体的选择：选用灯盏花幼嫩的花盘或腋芽作为外植体；步骤（2），外植体的消毒：将经步骤（1）选定的外植体，用肥皂液及自来水清洁干净后，加入至2-5%（v/v）吐温-80水溶液中浸泡8-12min，接着用自来水冲淋2h，最后依次用酒精、次氯酸钠以及升汞消毒；步骤（3），诱导培养：将经步骤（2）消毒好的外植体剪去基部伤口后，接种在MS+8.0-12.0mg/LIAA+5.0-8.0mg/L6-BA的诱导培养基上培养，培养环境为温度23-25℃，光照强度1500-2000lux，单日光照时间为12h的条件下进行诱导培养，得到丛苗；步骤（4），增殖培养：将步骤（3）得到的丛苗分切为带愈伤组织的2-3株的小丛，然后接种在MS+0.5-1.0mg/LIAA+4.0-7.0mg/LKT的增殖培养基上培养，培养环境为温度23-25℃，光照强度1500-2000lux，单日光照时间为12h的条件下进行增殖培养，得到丛生苗；步骤（5），生根培养：将丛生苗分切为单株，然后接种在1/2MS+0.8-1.2mg/LIAA+2.0g/L活性炭的生根培养基上，在23-25℃，光照强度1500-2000lux，单日光照时间为12h的环境下进行生根培养，得到生根苗；步骤（6），炼苗：将步骤（5）得到的生根苗连同组培瓶一起置于遮阴率为80%的温室大棚内进行瓶内炼苗2天，后拧松瓶盖再炼苗1天，然后将苗去除培养基并洗净培养基后，移栽并覆盖塑料膜，移栽基质采用腐殖土：珍珠岩=1：0.9-1.1，移栽后空气湿度保持在70%-80%，后经2-3周常规培养，即可作为商品苗。进一步，优选的是，步骤（2）中用肥皂液及自来水清洁的具体方法为：将外植体用肥皂液涮洗10-20min后，用自来水冲洗3-4次至无肥皂液残留即可。进一步，优选的是，步骤（2）中消毒的具体方法为：先用75%（v/v）酒精消毒10-12s，再用饱和次氯酸钠水溶液消毒10-20min，后用无菌水冲洗1-2次，然后用无菌水冲洗1-2次，接着用0.05%（w/v）升汞溶液消毒5-10min，最后用无菌水冲洗4-5次。进一步，优选的是，步骤（2）中消毒在超净工作台上进行。上述技术方案中，步骤（3）所述的诱导培养的时间为25-35天。上述技术方案中，步骤（4）所述的增殖培养的继代周期为25-35天。上述技术方案中，步骤（5）所述的生根培养的培养时间为25-30天。进一步，优选的是，所述的灯盏花组培育苗方法，包括如下步骤：步骤（1），外植体的选择：灯盏花定植于大棚内，按常规管理方法浇施经充分发酵腐熟的生物有机肥液，选取健壮、无病虫害植株，剪取其幼嫩花盘或腋芽作为外植体；步骤（2），外植体的消毒：将经步骤（1）选定的外植体，用肥皂液涮洗10-20min，用自来水冲洗3-4次至无肥皂液残留，然后将外植体加入至2-5%（v/v）吐温-80水溶液中浸泡8-12min，再用自来水冲淋2h后，转移至超净工作台上消毒；消毒时，先用75%（v/v）酒精消毒10-12s，后用无菌水冲洗1-2次，再用饱和次氯酸钠水溶液消毒10-20min，然后用无菌水冲洗1-2次，接着用0.05%（w/v）升汞溶液消毒5-10min，最后用无菌水冲洗4-5次；步骤（3），诱导培养：将经步骤（2）消毒好的外植体剪去基部伤口后，接种在MS+8.0-12.0mg/LIAA+5.0-8.0mg/L6-BA的诱导培养基上培养，培养环境为温度23-25℃，光照强度1500-2000lux，单日光照时间为12h的条件下进行诱导培养，25-35天后一步诱导出带愈伤组织的丛苗；步骤（4），增殖培养：将步骤（3）得到的丛苗分切为带愈伤组织的2-3株的小丛，然后接种在MS+0.5-1.0mg/LIAA+4.0-7.0mg/LKT的增殖培养基上培养，培养环境为温度23-25℃，光照强度1500-2000lux，单日光照时间为12h的条件下进行增殖培养，25-35天为一次继代周期，增殖率可达1:5-1:7，得到丛生苗；步骤（5），生根培养：将丛生苗分切为单株，然后接种在1/2MS+0.8-1.2mg/LIAA+2.0g/L活性炭的生根培养基上，在23-25℃，光照强度1500-2000lux，单日光照时间为12h的环境下进行生根培养，25-30天后即可获得健壮的生根苗；步骤（6），炼苗：将步骤（5）得到的生根苗连同组培瓶一起置于遮阴率为80%的温室大棚内进行瓶内炼苗2天，后拧松瓶盖再炼苗1天，然后将苗去除培养基并洗净培养基后，移栽于的经管道高温蒸汽消毒1.8-2.2h的以1：0.9-1.1的质量配比的腐殖土和珍珠岩混合基质中，并搭建小拱棚膜，移栽后空气湿度保持在70%-80%，后经2-3周常规培养，即可作为商品苗。本专利技术所述的移栽后经2-3周常规培养一般需要逐渐减少喷水频率、减少遮阴率及逐步揭开塑料薄膜，遮阴率最终可减少至40%.本专利技术与现有技术相比，其有益效果为：（1）本专利技术外植体的采集时间为3月至10月，可采集时间长；采集过程中，不伤害入药的地下根，经采集后可继续生长，到收获季节亦可同其他未采集的植株同时收获且不影响产量及品质；（2）本专利技术采用的组培快繁技术，组分简单，操作简便，不受地域及季节限制；（3）本专利技术所述灯盏花组培育苗方法，繁殖速度快、繁殖率高。如果按一株灯盏花植株推算，一株灯盏花可采集20-30个外植体，经诱导培养40天可获得愈伤组织以及每代30天的增殖培养6-8代，再经25天的生根培养及14-21天的炼苗。以增殖6代计算，一株灯盏花成苗，在历时不到一年的时间里，可获得约30-50万商品苗。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的详细描述。本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种灯盏花组培育苗方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），外植体的选择：选用灯盏花幼嫩的花盘或腋芽作为外植体；步骤（2），外植体的消毒：将经步骤（1）选定的外植体，用肥皂液及自来水清洁干净后，加入至2‑5%（v/v）吐温‑80水溶液中浸泡8‑12 min，接着用自来水冲淋1.9‑2.1h，最后依次用酒精、次氯酸钠以及升汞消毒；步骤（3），诱导培养：将经步骤（2）消毒好的外植体剪去基部伤口后，接种在MS+8.0‑12.0 mg/L IAA+5.0‑8.0 mg/L 6‑BA的诱导培养基上培养，培养环境为温度23‑25℃，光照强度1500‑2000 lux，单日光照时间为12 h的条件下进行诱导培养，得到丛苗；步骤（4），增殖培养：将步骤（3）得到的丛苗分切为带愈伤组织的2‑3株的小丛，然后接种在MS+0.5‑1.0 mg/L IAA+4.0‑7.0 mg/L KT的增殖培养基上培养，培养环境为温度23‑25℃，光照强度1500‑2000 lux，单日光照时间为12 h的条件下进行增殖培养，得到丛生苗；步骤（5），生根培养：将丛生苗分切为单株，然后接种在1/2MS+0.8‑1.2 mg/L IAA+2.0 g/L 活性炭的生根培养基上，在23‑25℃，光照强度1500‑2000 lux，单日光照时间为12 h的环境下进行生根培养，得到生根苗；步骤（6），炼苗：将步骤（5）得到的生根苗连同组培瓶一起置于遮阴率为80%的温室大棚内进行瓶内炼苗2天，后拧松瓶盖再炼苗1天，然后将苗去除培养基并洗净培养基后，移栽并覆盖塑料膜，移栽基质采用腐殖土：珍珠岩=1：0.9‑1.1，移栽后空气湿度保持在70%‑80%，后经2‑3周常规培养，即可作为商品苗。...

【技术特征摘要】
1.一种灯盏花组培育苗方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），外植体的选择：选用灯盏花幼嫩的花盘或腋芽作为外植体；步骤（2），外植体的消毒：将经步骤（1）选定的外植体，用肥皂液及自来水清洁干净后，加入至2-5%（v/v）吐温-80水溶液中浸泡8-12min，接着用自来水冲淋1.9-2.1h，最后依次用酒精、次氯酸钠以及升汞消毒；其中，消毒在超净工作台上进行；步骤（3），诱导培养：将经步骤（2）消毒好的外植体剪去基部伤口后，接种在MS+8.0-12.0mg/LIAA+5.0-8.0mg/L6-BA的诱导培养基上培养，培养环境为温度23-25℃，光照强度1500-2000lux，单日光照时间为12h的条件下进行诱导培养，得到丛苗；步骤（4），增殖培养：将步骤（3）得到的丛苗分切为带愈伤组织的2-3株的小丛，然后接种在MS+0.5-1.0mg/LIAA+4.0-7.0mg/LKT的增殖培养基上培养，培养环境为温度23-25℃，光照强度1500-2000lux，单日光照时间为12h的条件下进行增殖培养，得到丛生苗；步骤（5），生根培养：将丛生苗分切为单株，然后接种在1/2MS+0.8-1.2mg/LIAA+2.0g/L活性碳的生根培养基上，在23-25℃，光照强度1500-2000lux，单日光照时间为12h的环境下进行生根培养，培养时间为25-30天，得到生根苗；步骤（6），炼苗：将步骤（5）得到的生根苗连同组培瓶一起置于遮阴率为80%的温室大棚内进行瓶内炼苗2天，后拧松瓶盖再炼苗1天，然后将苗去除培养基并洗净培养基后，移栽并覆盖塑料膜，移栽基质采用腐殖土：珍珠岩=1：0.9-1.1，移栽后空气湿度保持在70%-80%，后经2-3周常规培养，即可作为商品苗；其中，步骤（2）中用肥皂液及自来水清洁的具体方法为：将外植体用肥皂液涮洗10-20min后，用自来水冲洗3-4次至无肥皂液残留即可；步骤（2）中消毒的具体方法为：先用75%（v/v）酒精消毒10-12s，后用无菌水冲洗1-2次，再用饱和次氯酸钠水溶液消毒10-20min，然后用无菌水冲洗1-2次，接着用0.05%（w/v）升汞溶液消毒5-10min，最后用无菌水冲洗4-5次。2.根据权利要求1所述的灯盏花组培育苗方法，其特征在于，步骤（3）所述的诱导培养的时间为25-35天。3.根据权利要求1所述的灯盏...

【专利技术属性】
技术研发人员：何玉清，黄春球，李贞泰，胡雪艳，
申请(专利权)人：云南植物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53