酶联免疫试剂盒及制备和利用其进行胃蛋白酶检测的方法技术

本发明专利技术公开了一种酶联免疫试剂盒及制备和利用其进行胃蛋白酶检测的方法，所述试剂盒包括：盒体；酶标板，其包括多个微孔，所述微孔内包被有胃蛋白酶单克隆抗体，所述酶标板容置在盒体内；试剂瓶，其容置于盒体内，所述试剂瓶内分别装有工作液、标准溶液、缓冲液、洗涤液及显色液，其中所述工作液含有酶标胃蛋白酶抗体。所述酶标胃蛋白酶抗体的标记物为辣根过氧化物酶，采用过碘酸钠法进行标记。本发明专利技术所述酶联免疫试剂盒能够利用化学发光酶联免疫技术对胃蛋白酶进行精确的检测，从而达到无创诊断咽喉反流性疾病的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及临床诊断
，更具体地说，本专利技术涉及一种用于胃蛋白酶检测的化学发光酶联免疫试剂盒，可进行胃蛋白酶的含量检测，并对咽喉反流性疾病进行无创诊断。
技术介绍
咽喉反流性疾病是指胃内容物反流至食管上括约肌以上部位，引起一系列症状和体征的总称，临床表现为声音嘶哑或发音障碍、咽喉肿痛、咽喉部异物感、持续清嗓、慢性长期咳嗽、呼吸困难、喉痉挛等症状，以及声带后连合区域粘膜增生、肥厚，声带弥漫性充血水肿，严重时出现肉芽肿、喉室消失、声门下狭窄等喉部体征。咽喉反流性疾病是耳鼻咽喉头颈外科一些疾病的源头病因，与慢性喉炎、声带息肉、喉接触性肉芽肿等喉部疾患关系密切。目前，咽喉反流性疾病的诊断一般依据症状和喉镜检查的反流症状指数量表以及反流体征评分量表、24小时喉咽部pH监测和胃蛋白酶试剂盒进行诊断。量表诊断缺乏特异性，准确度差；24小时喉咽部pH监测属于有创检查，不易被患者接受；目前应用的胃蛋白酶试剂盒检测唾液中胃蛋白酶诊断咽喉反流，虽然是无创检查，但其是传统的酶联免疫技术，灵敏度较差，且每天患者咽喉反流次数有限，唾液中的胃蛋白酶含量相对较低，只有在咽喉反流后一段时间内的唾液中才能监测到，漏诊率高。化学发光免疫分析技术是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项新的免疫测定技术。它将化学发光分析的高灵敏度与抗原抗体反应的高特异性相结合，与目前常用的其他免疫分<br>析法相比具有灵敏度高、特异性强、检测时间短、测量线性范围宽、稳定性好，可实现自动化、使用简便、安全、无放射性污染等诸多优点，因此倍受人们的青睐，该技术已广泛应用于传染性疾病、肥胖及相关疾病、内分泌系统、遗传病、肿瘤的早期诊断、动植物检验检疫等众多领域。但是，目前还没有采用化学发光酶联免疫技术检测胃蛋白酶的相关技术，也没有用于胃蛋白酶检测的化学发光酶联免疫试剂盒。另外，传统的酶联反应试剂盒结构较为简单和单一，在进行试验操作过程中具有一定的不便利性。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术的另一个目的是，提供一种用于胃蛋白酶检测的化学发光酶联免疫试剂盒，能够利用化学发光酶联免疫技术对待测样品中的胃蛋白酶进行精确的定量检测。本专利技术的另一个目的是，提供一种通过检测口腔或咽喉分泌物中胃蛋白酶含量进行无创诊断咽喉反流性疾病的方法。本专利技术还有一个目的是，提供一种结构更为合理的试剂盒，能够提高使用便利性，并有助于提高试验检验的精确度。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，本专利技术提供了以下技术方案：一种酶联免疫试剂盒，包括：盒体；酶标板，其包括多个微孔，所述微孔内包被有胃蛋白酶单克隆抗体，所述酶标板容置在盒体内；试剂瓶，其容置于盒体内，所述试剂瓶内分别装有工作液、标准溶液、缓冲液、洗涤液及显色液，其中所述工作液含有酶标胃蛋白酶抗体。优选的是，所述的酶联免疫试剂盒中，所述酶标胃蛋白酶抗体的标记物为辣根过氧化物酶，采用过碘酸钠法进行标记。优选的是，所述的酶联免疫试剂盒中，所述标准溶液为梯度浓度的氯霉素系列标准溶液，所述标准溶液内氯霉素的浓度分别为0ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、60ng/ml、80ng/ml及100ng/ml；所述显色液的化学发光底物为鲁米诺；以及所述胃蛋白酶为人胃蛋白酶。优选的是，所述的酶联免疫试剂盒中，所述盒体顶部开口，盒体的开口处设置有可抽拉的盖体；所述盒体内还设置有带有凹槽和多个竖直孔洞的卡板；所述酶标板水平嵌入在所述卡板的凹槽内，所述试剂瓶分别嵌入在所述卡板的孔洞内。优选的是，所述的酶联免疫试剂盒中，所述盖体为透明设置；所述盖体与盒体的连接方式为：所述盒体开口的两侧设置有第一卡槽，所述盖体两侧设置有与第一卡槽相匹配的凸条，使盖体可沿所述第一卡槽滑动，以使盒体打开或合盖；其中，所述第一卡槽的两端分别设置有1个限位块；沿所述盖体两侧凸条的外侧开设有第二卡槽，所述第二卡槽内设置有滚珠，使盖体沿所述第一卡槽滑动时所述滚珠能够沿所述第二卡槽同向自由滚动，并在滚珠抵达所述限位块位置及第二卡槽端部时停止，以使所述盖体停止滑动并得到定位；此外，所述盖体两端分别设置有密封件，所述密封件与所述盖体的两端为90-180°可弯折连接，使密封件向下弯折90°时可贴附所述盒体两侧以将盒体密封；向上弯折时可解除盒体的密封并使盖体进行滑动；所述盖体两侧沿所述第二卡槽设置有密封条。优选的是，所述的酶联免疫试剂盒中，所述卡板的孔洞深度大于所述试剂瓶的高度，且所述孔洞底部设置有弹簧，所述试剂瓶底部设置有用于与弹簧相吸附的磁扣，以将试剂瓶与弹簧活动连接；其中，所述弹簧的高度以其上放置试剂瓶后的自然状态下，试剂瓶顶部高于所述孔洞开口边缘0.8-1.5cm为准；此外，所述卡板的大小与所述盒体的内部相对应，使卡板可嵌入并固定在盒体内；所述卡板的上表面低于所述盒体开口边缘1.8-2.2cm；以及所述酶标板上的微孔设置为48或96个，所述酶标板上覆盖有密封膜。一种酶联免疫试剂盒的制备方法，包括以下步骤：步骤一、胃蛋白酶单克隆抗体的制备，提取人胃粘膜分泌物中的胃蛋白酶，将纯化后的胃蛋白酶免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤融合技术制备得到所述胃蛋白酶单克隆抗体；步骤二、酶标板的制备，将所得胃蛋白酶单克隆抗体稀释后，加入所述微孔中进行包被，即得所述酶标板；步骤三、酶标胃蛋白酶抗体的制备，制备辣根过氧化物酶溶液，将胃蛋白酶单克隆抗体与所述辣根过氧化物酶溶液混合反应，然后在得到的反应液中加入NaBH4溶液后进行超滤，留取超滤截留物即得所述酶标胃蛋白酶抗体。优选的是，所述的酶联免疫试剂盒的制备方法中，步骤一中，胃蛋白酶的提取采用离子交换层析和凝胶过滤技术；所述胃蛋白酶单克隆抗体分别通过蛋白质亲和层析技术和凝胶过滤技术进行纯化，然后利用酶联免疫技术筛选得到具有高度特异性的诊断用胃蛋白酶单克隆抗体；步骤二中，利用所述稀释液对胃蛋白酶单克隆抗体进行稀释，得到单克隆抗体稀释液，然后在3-5℃条件下将单克隆抗体稀释液加入微孔中，放置12-24h后，利用所述洗涤液对微孔进行洗涤，然后加入封闭液，水浴加热后再次洗涤，并依次重复2-4次后拍干，即得所述酶标板，可将酶标板于3-5℃保存；步骤三中，辣根过氧化物酶溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酶联免疫试剂盒，其特征在于，包括：盒体；酶标板，其包括多个微孔，所述微孔内包被有胃蛋白酶单克隆抗体，所述酶标板容置在盒体内；试剂瓶，其容置于盒体内，所述试剂瓶内分别装有工作液、标准溶液、缓冲液、洗涤液及显色液，其中所述工作液含有酶标胃蛋白酶抗体。

【技术特征摘要】
1.一种酶联免疫试剂盒，其特征在于，包括：
盒体；
酶标板，其包括多个微孔，所述微孔内包被有胃蛋白酶单克隆抗体，所
述酶标板容置在盒体内；
试剂瓶，其容置于盒体内，所述试剂瓶内分别装有工作液、标准溶液、
缓冲液、洗涤液及显色液，其中所述工作液含有酶标胃蛋白酶抗体。
2.如权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述酶标胃蛋白
酶抗体的标记物为辣根过氧化物酶，采用过碘酸钠法进行标记。
3.如权利要求2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述标准溶液为
梯度浓度的氯霉素系列标准溶液，所述标准溶液内氯霉素的浓度分别为
0ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、60ng/ml、80ng/ml及100ng/ml；
所述显色液的化学发光底物为鲁米诺；以及
所述胃蛋白酶为人胃蛋白酶。
4.如权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述盒体顶部开
口，盒体的开口处设置有可抽拉的盖体；
所述盒体内还设置有带有凹槽和多个竖直孔洞的卡板；
所述酶标板水平嵌入在所述卡板的凹槽内，所述试剂瓶分别嵌入在所述
卡板的孔洞内。
5.如权利要求4所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，
所述盖体为透明设置；
所述盖体与盒体的连接方式为：所述盒体开口的两侧设置有第一卡槽，
所述盖体两侧设置有与第一卡槽相匹配的凸条，使盖体可沿所述第一卡槽滑
动，以使盒体打开或合盖；
其中，所述第一卡槽的两端分别设置有1个限位块；沿所述盖体两侧凸
条的外侧开设有第二卡槽，所述第二卡槽内设置有滚珠，使盖体沿所述第一
卡槽滑动时所述滚珠能够沿所述第二卡槽同向自由滚动，并在滚珠抵达所述
限位块位置及第二卡槽端部时停止，以使所述盖体停止滑动并得到定位；
此外，所述盖体两端分别设置有密封件，所述密封件与所述盖体的两端
为90-180°可弯折连接，使密封件向下弯折90°时可贴附所述盒体两侧以将
盒体密封；向上弯折时可解除盒体的密封并使盖体进行滑动；
所述盖体两侧沿所述第二卡槽设置有密封条。
6.如权利要求4所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述卡板的孔洞
深度大于所述试剂瓶的高度，且所述孔洞底部设置有弹簧，所述试剂瓶底部
设置有用于与弹簧相吸附的磁扣，以将试剂瓶与弹簧活动连接；
其中，所述弹簧的高度以其上放置试剂瓶后的自然状态下，试剂瓶顶部
高于所述孔洞开口边缘0.8-1.5cm为准；
此外，所述卡板的大小与所述盒体的内部相对应，使卡板可嵌入并固定
在盒体内；所述卡板的上表面低于所述盒体开口边缘1.8-2.2cm；以及
所述酶标板上的微孔设置为48或96个，所述酶标板上覆盖有密封膜。
7.一种如权利要求3所述的酶联免疫试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、胃蛋白酶单克隆抗体的制备，提取人胃粘膜分泌物中的胃蛋白
酶，将纯化后的胃蛋白酶免疫BALB/c小鼠，通...

【专利技术属性】
技术研发人员：李进让，吴立峰，郭春雨，
申请(专利权)人：李进让，吴立峰，郭春雨，
类型：发明
国别省市：北京;11