一种海洋真菌伞枝霉菌株培养物的菌丝体提取物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种海洋真菌伞枝霉菌株培养物的菌丝体提取物的制备方法。该菌丝体提取物的制备方法包括：1)种子培养：挑取保藏编号为CGMCC No.8101的海洋真菌伞枝霉(Umbelopsis sp.)QZ042菌丝接种于PDA固体培养基上斜面培养5～7天，温度控制在26～30℃；2)发酵培养：将斜面培养好的真菌接种于PD液体培养基上，于25～32℃条件下摇床培养5～7天或静置培养15～30天，得到发酵培养物；3)过滤：将发酵培养物过滤，分离出菌丝体和发酵液；4)提取：取菌丝体用由乙酸乙酯、甲醇和乙酸组成的混合溶剂进行浸提，浸提液浓缩，即得。申请人发现该菌丝体提取物具有很好的抗菌作用。

【技术实现步骤摘要】
本申请是“一种海洋真菌伞枝霉菌株及其菌丝体提取物和应用”的分案申请，原申请的申请日为：2014年5月15日，申请号为：201410203253.9，专利技术名称为：一种海洋真菌伞枝霉菌株及其菌丝体提取物和应用。
本专利技术涉及海洋微生物菌种，具体涉及一种海洋真菌伞枝霉菌株及其菌丝体提取物和应用。
技术介绍
病原细菌和真菌可引起动植物的多种病害，其不仅影响农作物产量和经济动物生长生产，造成极大的经济损失；而且影响人体健康，威胁人类生命安全。为了抑制和消灭病原细菌和真菌，人们一直致力于从不同环境中寻找新的有效的抗菌药物，以缓解越来越严重的耐药性菌株的出现。在抗真菌药物的研究上，1939年来自青霉菌(Penilliciliumgriseofulvum)菌体的灰黄霉素(Griseofulvin)成为发现的第一个抗真菌抗生素，1955年第一个抗真菌药物两性霉素问世，以后又陆续开发了氟胞嘧啶和唑类等抗真菌药物。但是目前抗真菌药物仍然存在种类缺乏、选择性小、毒副作用大和耐药性强的缺点，因此研究和开发新型、高效、低毒、广谱的抗真菌药物十分必要。在抗细菌药物的研究上，从第一个抗菌药物青霉素的出现，到后来的四环素、氯霉素、卡那霉素、利福平等抗生素，都在人类对抗病原细菌上发挥了较重要作用，但随着抗生素的烂用。越来越多的多耐药性病原菌开始出现，这是人类面临的又一挑战，挖掘新的抗菌药物和新的抗菌机制，是人类解决这一问题的有效方法之一。在当今陆地生物资源越来越枯竭的背景下，从海洋微生物中寻找新型的药物是一条非常有前景的途径。其中2010年1月到2013年2月，就从海洋细菌、真菌、放线菌中发现895个新的具有抗病毒、抗菌、抗炎、抗肿瘤和抗污损的天然活性物质(赵成英,朱统汉,朱伟明,2010-2013之海洋微生物新天然产物,有机化学,2012,32,1-41)。海洋微生物产品开发上最为成功的例子是1945年从海洋污泥中分离到顶头孢霉菌，从中发现了头孢菌素，以后发展成系列的头孢类抗菌素。而且有证据表明，原来被认为是来源于海绵等海洋生物的重要活性物质，如海豚毒素、海葵毒素、麻壳鱼毒素等，实际上也是由微生物产生，这些都使利用海洋微生物开发新型药物成为了焦点。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种海洋真菌伞枝霉菌株及其菌丝体提取物和应用。本专利技术所述的海洋真菌伞枝霉(Umbelopsissp.)QZ042，该菌株已于2013年8月19日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国北京中科院微生物研究所)，其保藏编号为CGMCCNo.8101。本专利技术所述的海洋真菌伞枝霉(Umbelopsissp.)QZ042是从海洋腐木中分离、纯化得到。其分离纯化方法为：取海洋腐木样品，用无菌玻棒捣碎后加入一定量的无菌生理盐水，再加入玻璃珠在摇床上震荡20～30min(通常在20～30℃条件下进行),静置分层后取上层液做10倍梯度稀释，取原倍液、10倍和100倍稀释液图布PDA固体平板，26～30℃恒温培养，等菌落长出后，挑取菌落划线纯化得到。本专利技术所述的海洋真菌伞枝霉(Umbelopsissp.)QZ042的特征为产孢子，在海水PDA培养基上生长良好，菌落初期为棕色，后期颜色逐渐变浅，呈轮纹状向外生长，菌落边缘轮廓清晰，菌落生长较慢，薄而平坦，紧贴培养基，不易挑取，有较多厚垣孢子，有孢囊孢子和孢子囊；分生孢子为球型，表面带有明显的小突起，球体直径大小约为18～22um；孢子囊为球型，球体直径大小约为54～60um。根据常规方法提取该菌株的DNA，利用真菌的ITS区的通用引物ITS1：5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’和ITS4：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’扩增其ITS区，所得ITS测序序列如下所示：CAGTGGGAAGTAAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCAAAAGATAATCTTTCAACTCGAAAGATTTTTTCCTTTGTGCTGGCTTTGACCGTATGTAATTTTGGGACTTAAACATGGCAGCCTTTATGGTTTGCCGGTCCCAAAAACAATATATCATCCTTATGAAAAACTTACTGAACAACTAAACAATGATTTTAATAATCTGTTTAAAACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCACTCCTTGGTATTCCGAGGAGTATGCCTGTTTCAGTATCATGAGCACTCTCACTCCTAACCTTTGTGGTTATGATGTGGAATTGGGATGCGCCGATTTTTACTAGTCGGCACTCCTAAAATGTAGCTCTTGGCTGTTTCCTACTACAGCAGTTTGGCCTAATAGTTTTGACTTTTGTCAAATCTTTGGCTCCATTTGCTTCTGGAAGTCAGTCTTGATAATACAGAAAACTCATTCAAACTTGATCTAAATCAGGAGTTC。根据常规方法提取该菌株的DNA，利用通用引物5’-GTAGTCATATGCTTGTCTC-3’和NS4：5’-CTTCCGTCAATTCCTTTAAG-3’扩增真菌18srRNA基因，所得18srRNA测序序列如下所示：ACTTCTCGTCGGAACCGACTGTTGCCAATCAGTTTCCAACAATCCAAAGGACTCACTAAGCCGTTCAATCGGTAGTAGCGACGGGCGGTGTGTACAAAGGGCAGGGACGTAATCAACGCGAGCTGATGACTCACGCTTACTAGGAATTCCTCGTTGAAGAGCAATAATTGCAATGCTCTATCCCCAGCACGATGAAGTTTCAAAAGATTACCCAGACCTTCCGGCCAAGGTTATAAACTCGTTGACTTCATCAGTGTAGCGCGCGTGCGGCCCAGAACATCTAAGGGCATCACAGACCTGTTATTGCCTCAAACTTCCATCAATTAAACATTGATAGTCTCTCTAAGAAGCCAAAAAGACACGACCAAAGTCATGCTGGCTATTTAGCAGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海洋真菌伞枝霉菌株培养物的菌丝体提取物的制备方法，包括以下步骤：1)种子培养：挑取保藏编号为CGMCC No.8101的海洋真菌伞枝霉(Umbelopsis sp.)QZ042菌丝接种于PDA固体培养基上斜面培养5～7天，温度控制在26～30℃；2)发酵培养：将斜面培养好的真菌接种于PD液体培养基上，于25～32℃条件下摇床培养5～7天或静置培养15～30天，得到发酵培养物；3)过滤：将发酵培养物过滤，分离出菌丝体和发酵液；4)提取：取菌丝体用由乙酸乙酯、甲醇和乙酸组成的混合溶剂进行浸提，浸提液浓缩，即得到海洋真菌伞枝霉(Umbelopsis sp.)QZ042培养物的菌丝体提取物。

【技术特征摘要】
1.一种海洋真菌伞枝霉菌株培养物的菌丝体提取物的制备方法，包
括以下步骤：
1)种子培养：挑取保藏编号为CGMCCNo.8101的海洋真菌伞枝霉
(Umbelopsissp.)QZ042菌丝接种于PDA固体培养基上斜面培养5～7
天，温度控制在26～30℃；
2)发酵培养：将斜面培养好的真菌接种于PD液体培养基上，于25～
32℃条件下摇床培养5～7天或静置培养15～30天，得到发酵培养物；
3)过滤：将发酵培...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚斌，义翠花，张艳秋，方怀义，庞庭才，张虹，董庆亮，黄鹄，
申请(专利权)人：钦州学院，
类型：发明
国别省市：广西;45