用于呼吸道合胞体病毒和流感的组合疫苗制造技术

本公开要求保护用于提高免疫响应的组合物和方法，所述免疫响应是针对流感和呼吸道合胞体病毒的，所述方法是通过施用同时针对两种病毒的组合免疫原性组合物进行的。所述组合组合物含有RSV组分和1、2、3、4个或多个流感组分。组合组合物提供了比分开地施用RSV和流感组分更大的免疫响应。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对相关申请的交叉引用本申请要求美国临时申请Nos.61/763,309(申请日2013年2月11日)和61/875,327(申请日2013年9月9日)的优先权，其各自以其整体并入用于所有目的。如下申请所公开的内容以其整体并入了本申请用于所有目的：13/269,107(申请日2012年9月27日)、61/015,440(申请日2007年12月20日)、11/582,540(申请日2006年10月18日)(美国专利申请公开No.2007/0184526)、60/727,513(申请日2005年10月18日)；60/780,847(申请日2006年3月10日)；60/800,006(申请日2006年5月15日)；60/831,196(申请日2006年7月17日)；60/832,116(申请日2006年7月21日)、60/845,495(申请日2006年9月19日)、10/617,569(申请日2003年7月11日)(美国专利申请公开No.2005/0009008)、12/340,186(申请日2008年12月19日)(美国专利申请公开No.2010/0129401)和12/689,826(申请日2010年1月19日)(美国专利申请公开No.2010/0184192)。对序列表的交叉引用随函电子提交的文本文件的内容在此通过提述以其整体并入：计算机可读形式的序列表副本(文件名：NOVV_53_Seq_List.txt，数据记录于2014年2月11日；文件大小：74千字节)。
本公开主要涉及免疫原性组合物，如疫苗，其用于治疗和/或预防通过RSV和通过流感病毒的感染。专利技术背景呼吸道合胞体病毒(RSV)是副粘病毒科(Paramyxoviridae)的肺病毒属(Pneumovirus)的成员。人RSV(HRSV)是儿童中严重下呼吸道疾病的主要病因，并且是人中相当大的发病和死亡的原因。RSV也被公认为是免疫受损的成人中和老年人中疾病的重要致病原。由于天然感染后受感染的宿主中对RSV的不完全抗性，RSV可能在童年和成年期间感染多次。这种病毒具有由单链负链RNA组成的基因组，所述RNA与病毒蛋白紧密结合形成核壳。病毒包膜由来源于脂双层的质膜组成，所述脂双层包含病毒编码的结构蛋白。病毒聚合酶伴随病毒粒子包装并将基因组RNA转录为mRNA。RSV基因组编码三个跨膜结构蛋白：F、G和SH，两个基质蛋白：M和M2，三个核壳蛋白：N、P和L，以及两个非结构蛋白：NS1和NS2。人们认为HRSV和细胞膜的融合发生在细胞表面处，并且是感染早期过程中将病毒核糖核蛋白转运到细胞质中的必需步骤。这个过程是由融合物(F)蛋白介导的，其还促进受感染细胞的膜与邻近细胞膜的融合，从而形成特征性的合胞体，这既是一种突出的细胞病变效应也是一种病毒传播的额外机制。因而，对于融合活性的中和在宿主免疫性中十分重要。的确，针对F蛋白开发的单克隆抗体已显示出中和病毒感染性并抑制膜融合(Calder等,2000,Virology271:122-131)。RSV的F蛋白与其他副粘病毒的F糖蛋白具有结构特征同一性和有限但显著的氨基酸序列同一性。它被合成为无活性的574个氨基酸的前体(F0)，其在内质网中随着翻译而在天冬酰胺处被糖基化，它在内质网中组装为同源寡聚体。在到达细胞表面之前，F0前体被蛋白酶切割为始于N端的F2和始于C端的F1。F2和F1链保持通过一个或多个二硫键共价地连接。已发现，免疫亲和性纯化的全长F蛋白以胶束(micelles)形式(也表征为玫瑰型(rosettes))聚集，这与对其他全长病毒膜糖蛋白所观察到的相似(Wrigley等,1986,inElectronMicroscopyofProteins,Vol5,p.103-163,AcademicPress,London)。在电子显微镜下，玫瑰型中的分子或是表现为倒锥形棒状(～70％)或棒棒糖形状(～30％)结构，其较宽的末端从玫瑰型的中心向外伸出。棒状构象状态与F糖蛋白在融合前无活性状态中的F糖蛋白有关，而棒棒糖状构象状态与融合后的活性状态的F糖蛋白有关。电子显微镜可用于区分融合前和融合后(或称为膜融合前的和膜融合的)构象，如Calder等,2000,Virology271:122-131所示。融合构象也可以通过脂质体关联分析与膜融合的(融合后)构象区分开来。此外，融合前和膜融合的构象可以用抗体(例如单克隆抗体)来区分开，所述抗体识别存在于一个或另一个融合前或膜融合形式的RSVF蛋白上的构象表位，但不识别另一种形式。这些构象表位可以是由于分子表面上的抗原决定簇的优先暴露而成的。或者，构象表位可以是由线性多肽中非连续氨基酸的并排而引起的。此前已显示F前体在两个位点(在残基109之后的位点I和在残基136之后的位点II)处被切割，两个位点都位于弗林样(furin-like)蛋白酶所识别的基序之前。位置II与融合肽邻近，并且F蛋白在两个位点处的切割都是膜融合所需要的(Gonzalez-Reyes等,2001,PNAS98(17):9859-9864)。当在两个位点处都完成切割时，人们相信锥形转换成了棒棒糖形棒条。专利技术概述此处提供的是含有RSVF组分和至少一个流感组分的免疫原性组合物。RSVF和流感组分一起可用于在动物(如人)中刺激免疫响应，所述免疫响应保护免受组合物中所包含的RSV和流感株的感染。组合RSVF和流感VLP疫苗在小鼠中耐受良好且具有免疫原性。出人意料的是，组分的组合导致了组合与分开施用组分相比针对病毒抗原升高的免疫响应。不受理论的束缚，免疫原性数据显示流感抗原(可能是HA部分)增强了RSVF响应，并且RSV组分相反地增加了HA响应，这可能是由于RSV缓冲液，例如比流感缓冲液低的pH，或是由于组氨酸的存在。‘附图简述图1显示了在施用患者前制备公开的组合组合物，所述制备是通过组合RSV组分和流感组分而进行的。图2描述了由公开的组合组合物诱导的对比由RSVF和流感组分诱导的针对RSV的具体抗体。图3描述了由公开的组合组合物诱导的对比由RSVF和流感组分诱导的针对RSV的中和抗体。图4描述了由公开的组合组合物诱导的对比由RSVF和流感组分诱导的针对RSV的帕利珠单抗竞争性抗体。图5显示了由针对A-California株的免疫作用所诱导的凝血抑制响应。数据比较了由RSV/三价流感组合物诱导的响本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫原性组合物，其包含呼吸道合胞体病毒(RSV)融合物(F)组分和流感组分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.02.11 US 61/763,309;2013.09.09 US 61/875,3271.一种免疫原性组合物，其包含呼吸道合胞体病毒(RSV)融合物(F)组分
和流感组分。
2.权利要求1的组合物，其中所述RSVF组分包含RSVF蛋白。
3.权利要求1的组合物，其中所述流感组分包含流感病毒样颗粒(VLP)。
4.权利要求3的组合物，其中所述流感VLP包含流感HA蛋白、流感NA
蛋白、和流感M1蛋白。
5.权利要求1的组合物，其还包含2、3、或4个流感VLP，其中每个VLP
包含来自不同株的HA蛋白。
6.权利要求5的组合物，其中每个流感VLP还包含来自与HA蛋白相同株
的NA蛋白。
7.权利要求5的组合物，其中每个流感VLP包含来源于流感株
A/Indonesia/5/05的M1蛋白。
8.一种免疫原性组合物，其包含呼吸道合胞体病毒(RSV)融合物(F)组分
和三个流感组分，
其中每个流感组分包含VLP，
其中每个VLP包含流感M1蛋白、流感NA蛋白、和流感HA蛋白；及
其中每个VLP中的所述NA蛋白和HA蛋白来源于相同的流感株；
其中第一、第二和第三VLP中的流感蛋白来源于彼此不同的株，
其中所述第一、第二和第三VLP各自包含来源于相同株的M1蛋白。
9.权利要求8的免疫原性组合物，其还包含第四流感组分，其中所述第
四流感组分包含VLP，其中所述第四VLP包含来源于与第一、第二和第三VLP
不同株的HA蛋白和NA蛋白；并且其中所述M1蛋白来源于与第一、第二和第
三VLP相同的株。
10.权利要求8的免疫原性组合物，其中所述M1蛋白来源于禽流感病毒。
11.权利要求10的免疫原性组合物，其中所述禽流感病毒是
A/Indonesia/5/05流感病毒株。
12.权利要求2的组合物，其中所述RS...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·E·史密斯，G·格列，L·弗里斯，J·F·扬，
申请(专利权)人：诺瓦瓦克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US