一种检测结核病的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了与结核病相关的microRNA标志物，该标志物为microRNA 451a，microRNA542，microRNA125b，microRNA146a，microRNA29c，microRNA365，microRNA889，microRNA335和microRNA342。可以通过核酸芯片、qPCR或者测序等技术对上述microRNA标志物进行定量检测，从而用于临床上对结核病的辅助诊断或者对治疗结果的评估等，提高结核病诊断的灵敏度和特异性，为临床治疗评估提供新的依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及microRNA的检测及其运用，更具体的，本专利技术涉及microRNA451a，microRNA542，microRNA125b，microRNA146a，microRNA29c，microRNA365，microRNA889，microRNA335，microRNA342在结核病诊断及治疗评估中的作用。
技术介绍
结核病是全球最严重的传染性疾病之一，给全人类的健康带来了重大的威胁。然而，目前却缺乏有效的诊断技术。结核诊断金标准-结核菌培养，耗时2-6周，检出率只有30%左右；痰涂片检出率不到30%左右；结核抗体快速检测（胶体金检测），虽然快速，但是检出率不到50%；核酸检测（GeneXpert）虽然方便快速，但是对于菌阴患者灵敏低且费用高；干扰素释放检测（IGRA），虽然灵敏，但是操作复杂，且价格昂贵，而且还不能却分潜伏感染和活性结核。因此，新的诊断技术对于结核病的防治具有重要的意义。MicroRNA是一类长约19~24nt的非编码单链小RNA分子。在细胞内microRNA发挥了重要的作用，它可以通过与靶基因3’UTR区互补结合，抑制靶基因翻译，进而调控生物体的生长发育,并参与多种疾病过程。研究表明microRNA在细胞生长、凋亡、分化、极性形成、分泌、代谢等过程中发挥重要作用。通过对microRNA在不同组织和疾病中的表达谱分析发现，microRNA的表达谱具有明显的组织特异性，在一些疾病中microRNA的表达谱改变具有明显的特征，因此可以作为疾病诊断及治疗标志物。MicroRNAs作为分子标志物，克服了蛋白质分子标志物在抗体制备和定量分析上所遇到的瓶颈。尤其是血清microRNAs具有样本易于采集、保存期长及检测手段简便等特点，临床应用价值也更明显,已成为生物标志物及转化医学研究的热点领域。关于microRNA与结核病的相关性，目前已经有些报道。但是目前还没有确定哪些microRNA和TB具有明确的相关，可以用于TB的诊断或者治疗评估。本专利公开了几个与TB相关的microRNA，及其检测引物和在TB诊断和治疗评估中的运用。
技术实现思路
为了解决以上问题，本专利技术公开了与结核病相关的microRNA序列及其检测引物和探针，以及在结核病的检测、预后中的运用。本专利技术的目的在于提供一种检测结核病的试剂盒。本专利技术所采取的技术方案是：一种检测结核病的试剂盒，该试剂盒含有对microRNA451a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889中至少一种microRNA进行定量检测的试剂。microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889联合作为结核病检测和/或预后的生物标记物的应用。一种检测结核病的试剂盒，该试剂盒含有对microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889进行定量检测的试剂。进一步的，该试剂盒含有对microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889进行荧光定量PCR检测引物SEQIDNO:10~27。进一步的，该试剂盒中含有对microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889进行反转录的引物SEQIDNO:1~9。进一步的，该试剂盒中含有如下探针序列SEQIDNO:28~36。一种检测结核病的核酸芯片该芯片含有对microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889进行定量检测的试剂。一种结核病的预后诊断试剂盒，该试剂盒含有对microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889进行定量检测的试剂。一种结核病的预后诊断核酸芯片，其特征在于：该芯片含有对microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889进行定量检测的试剂。本专利技术的有益效果是：本专利技术为结核病提供了新的诊断和预后评估的方法。本专利技术检测血浆/血清中的稳定的microRNA，而传统潜在分子诊断方案检测蛋白质，在定量测定方面，microRNA的定量精度和灵敏度非常高，使用qPCR技术甚至可以达到单分子检测的能力；而传统方法检测蛋白质，灵敏度较低，且定量精度较差。附图说明图1为microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889在结核病不同阶段的表达情况；图2为microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA8895单独区分TB感染者和健康者的ROC曲线；图3为microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA8895联合区分TB感染者和健康者的ROC曲线。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不局限于此。实施例1样本：健康人血清50份，结核菌潜伏感染者血清50份，活动性结核病患者血清50份，结核病治愈者血清50份；本实施例对上述样本血清中的microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA34本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测结核病的试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有对microRNA 451a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889中至少一种microRNA进行定量检测的试剂。

【技术特征摘要】
1.一种检测结核病的试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有对microRNA451a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889中至少一种microRNA进行定量检测的试剂。
2.microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889联合作为结核病检测和/或预后的生物标记物的应用。
3.一种检测结核病的试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有对microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889进行定量检测的试剂。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有对microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342和microRNA889进行荧光定量PCR检测引物SEQIDNO:10~27。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：该试剂盒中含有对microRNA4...

【专利技术属性】
技术研发人员：周琳，陈亮，陈涛，钟球，郭卉欣，李海成，陈瑜晖，廖庆华，陈珣珣，舒杨，周杰，王威，
申请(专利权)人：广东省结核病控制中心，
类型：发明
国别省市：广东;44