本发明专利技术公开了一种铁皮石斛的快速繁殖方法，它包括种子蒴果的表面灭菌，无菌种子播撒于萌发培养基，种子萌发的幼苗接种于原球茎分化培养基，分化苗转接入壮苗生根培养基，最后得到铁皮石斛的组培苗。与现有技术相比，本发明专利技术利用铁皮石斛未开裂的蒴果，可以有效的避免其内生菌对组织培养带来的一些干扰，降低污染率；利用种子萌发、继代培养和壮苗生根三代培养法，大大缩短了育苗周期，降低了生产成本，且所培养的组培苗植株健壮，根系发达，成活率高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及。
技术介绍
铁皮石斛又名黑节草，为兰科石斛属多年生的草本植物，生长于海拔高度100~ 3000米的山地，喜温暖潮湿、半阴半阳的环境，不耐寒冷。主要分布于安徽、浙江、云南、福建 等地。铁皮石斛以其新鲜或干燥茎入药，味甘、性微寒，主要药效成分为石斛多糖、生物碱和 氨基酸等，具生津、降血糖和增强机体免疫力等功效，被历版《中国药典》所收录。铁皮石斛 种子细小如尘埃，不具胚乳，在自然条件下极难萌发，加上人为的过度采挖，其资源已濒临 灭绝。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供，以解决现有技术 存在的繁殖技术效率低下的问题。 为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案如下： -种铁皮石斛的快速繁殖方法，它包括如下步骤： (1)将铁皮石斛蒴果消毒灭菌后剖开，取出铁皮石斛蒴果种子； (2)将步骤（1)中得到的铁皮石斛种子均匀播撒于种子萌发培养基上，20~25°C 下暗培养6~8天后，正常培养60~75天，铁皮石斛种子萌发成铁皮石斛幼苗； (3)将步骤（2)中得到的铁皮石斛幼苗接种到原球茎分化培养基中培养80~ 100,得到铁皮石斛分化苗； (4)将步骤（3)中得到的铁皮石斛分化苗转接到壮苗生根培养基上培养后90~ 100,得到铁皮石斛组培苗。 步骤（1)中，所述的铁皮石斛蒴果为15~20周的成熟未开裂蒴果。 步骤（1)中，消毒灭菌的方法为：将铁皮石斛蒴果用水冲洗并自然风干后，在超净 工作台内于70~75%体积分数的乙醇水溶液中浸泡45s，取出后用无菌水冲洗2~3次；再 将蒴果放入0. 1 %质量分数的氯化汞水溶液中浸泡lOmin，取出后用无菌水冲洗4~6次； 最后用灭菌后的滤纸吸干蒴果表面的水分，用灭菌后的解剖刀从中部取出种子。 步骤⑵中，所述的种子萌发培养基的配方为：MS+0. 2-0. 5mg/L萘乙酸 +0? 5-1. 0mg/L6-苄氨基腺嘌呤+50-100g/L土豆+25g/L蔗糖+6. Og/L琼脂粉，pH5. 8 ~6. 0。 步骤⑵中，所述的正常培养的条件为温度20~25°C，光照强度为2000~ 2500Lux，光照时间为10~12h/d。 步骤⑶中，所述的原球茎分化培养基的配方为：N6大量元素+MS微量元素+MS有 机物 +0-1. 〇mg/L 萘乙酸 +50-100g/L 香蕉 +25g/L 鹿糖 +6. Og/L 琼脂粉，pH5. 8 ~6. 0。步骤（3)中，培养条件为温度20~25°C，光照强度为2000~2500Lux，光照时间 为 10 ~12h/d〇 步骤⑷中，所述的壮苗生根培养基的配方为：N6大量元素+MS微量元素+MS有 机物+0~1. 〇mg/L萘乙酸+50~100g/L香蕉+0. 5~2. Og/L活性炭+25g/L鹿糖+6. 0g/ L琼脂粉，pH5.8~6.0。 步骤（4)中，培养条件为温度为20~25°C，光照强度为2000~2200Lux，光照时 间为10~12h/d。 其中，所述的MS培养基的配方为： 大量元素：硝酸铵1650mg/L、硝酸钾1900mg/L、二水合氯化钙440mg/L、七水合硫 酸镁370mg/L和磷酸二氢钾170mg/L ; 微量元素：四水合硫酸锰22. 3mg/L、七水合硫酸锌8. 6mg/L、六水合氯化钴 0? 025mg/L、五水合硫酸铜0? 025mg/L、碘化钾0? 83mg/L、硼酸6. 2mg/L、七水合硫酸亚铁 27. 8mg/L和乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L ; 有机物：烟酸〇? 5mg/L、盐酸吡咳醇0? 5mg/L、盐酸硫胺素0? lmg/L、甘氨酸2mg/L 和肌醇l〇〇mg/L。 其中，所述的N6大量元素配方为：硝酸钾2830mg/L、硫酸铵463mg/L、二水合氯化 ?丐166mg/L、七水合硫酸镁185mg/L和磷酸二氢钾400mg/L。 与现有技术相比，本专利技术具有如下优势： 利用铁皮石斛未开裂的蒴果，可以有效的避免其内生菌对组织培养带来的一些干 扰，降低污染率；利用种子萌发、继代培养和壮苗生根三代培养法，大大缩短了育苗周期，降 低了生产成本，且所培养的组培苗苗植株健壮，根系发达，成活率高。【具体实施方式】 根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的内容仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本 专利技术。 下述实施例中提到的MS培养基配方为： 大量元素：硝酸铵1650mg/L、硝酸钾1900mg/L、二水合氯化钙440mg/L、七水合硫 酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L ; 微量元素：四水合硫酸锰22. 3mg/L、七水合硫酸锌8. 6mg/L、六水合氯化钴 0? 025mg/L、五水合硫酸铜0? 025mg/L、碘化钾0? 83mg/L、硼酸6. 2mg/L、七水合硫酸亚铁 27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二钠 37. 3mg/L ; 有机物：烟酸〇? 5mg/L、盐酸吡咳醇0? 5mg/L、盐酸硫胺素0? lmg/L、甘氨酸2mg/L、 肌醇 l〇〇mg/L。 下述实施例中提到的N6大量元素配方为：硝酸钾2830mg/L、硫酸铵463mg/L、二水 合氯化妈166mg/L、七水合硫酸镁185mg/L、磷酸二氢钾400mg/L。 实施例1 -种铁皮石斛的快速繁殖方法，具体步骤如下： 1、将野外采集的20周未开裂成熟蒴果在自来水下冲洗干净，自然风干后，在超净 工作台内用75%体积分数的乙醇水溶液浸泡45s，取出后用灭菌后的蒸馏水冲洗3次；再将 蒴果在0. 1%质量分数的氯化汞水溶液中浸泡灭菌10min，取出后用灭菌蒸馏水冲洗6次， 并不时搅动；最后用用灭菌后的滤纸吸干蒴果表面的水分，用灭菌后的解剖刀从蒴果中部 取出种子。 2、将取出的铁皮石斛种子均匀播撒于种子萌发培养基上，培养基配方为： MS+0. 5mg/LNAA+l. 0mg/L6-BA+50g/L 土豆 +25g/L 蔗糖 +6. Og/L 琼脂粉，pH5. 8。在 22°C下， 暗培养7天，7天后改变培养条件，在温度22°C，光照强度为2000LUX，光照时间为12h/d的 条件下培养60天。经过该阶段培养后，铁皮石斛种子萌发成幼苗。 3、将铁皮石斛幼苗接种到原球茎分化培养基中，25 °C，光照强度2500LUX，光照 时间为12h/d下培养90天；在该培养基的配方为：N6大量元素+MS微量元素+MS有机物 +0. 5mg/LNAA+50g/L香蕉+25g/L蔗糖+6. Og/L琼脂粉，pH5. 8。经过该阶段培养后，铁皮石 斛幼苗生长为分化苗。 4、将铁皮石斛分化苗转接到壮苗生根培养基上，25°C，光照强度2200Lux，光照时 间12h/d的条件下培养95天。该培养基配方为：N6大量元素+MS微量元素+MS有机物 +1. 0mg/LNAA+75g/L 香蕉 +2. Og/L 活性炭 +25g/L 鹿糖 +6. Og/L 琼脂粉，pH5. 8。经过该阶 段培养后，铁皮石斛分化苗生长为组培苗。 5、经过上述培养阶段共计245天，即可得根系健壮、株高兰8cm，平均直径兰0? 3cm 以上的优质组培苗，经过上本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种铁皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，它包括如下步骤：(1)将铁皮石斛蒴果消毒灭菌后剖开，取出铁皮石斛蒴果种子；(2)将步骤(1)中得到的铁皮石斛种子均匀播撒于种子萌发培养基上，20～25℃下暗培养6～8天后，正常培养60～75天，铁皮石斛种子萌发成铁皮石斛幼苗；(3)将步骤(2)中得到的铁皮石斛幼苗接种到原球茎分化培养基中培养80～100天，得到铁皮石斛分化苗；(4)将步骤(3)中得到的铁皮石斛分化苗转接到壮苗生根培养基上培养后90～100，得到铁皮石斛组培苗。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：席刚俊，徐超，史俊，汪善锋，杨鹤同，郑凯，贾君，赵桂华，
申请(专利权)人：江苏农林职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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