本发明专利技术提供了一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C‑反应蛋白的检测试剂盒及检测方法。所述检测试剂盒包括R1试剂和R2试剂；所述R1试剂的组分包括：10~50mmol/L的第一缓冲液、0.2%~2.5%w/v的促凝剂、0.1~2%w/v表面活性剂、0.01%~0.1%w/v的第一防腐剂；所述的R2试剂的组分包括：0.5%~2%w/v标记C‑反应蛋白抗体交联酰胺基团纳米胶乳、0.2~2%w/v的稳定剂、10~50mmol/L的第二缓冲液、0.01~0.1%w/v的第二防腐剂。本发明专利技术提供的检测试剂盒及检测方法，具有操作简单、反应快速、灵敏度高、特异性好的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学免疫诊断领域，具体涉及一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法 动物C-反应蛋白的检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
C-反应蛋白（C-reactiveprotein，简称为CRP)是由Tillet和Francis在 1930首先发现，因其能与肺炎链球菌细胞壁的C多糖起沉淀反应而命名。CRP作为一种 急性时相反应蛋白，是在白介素-6的介导下主要由肝脏产生，同时受白介素-1、肿瘤坏死 因子a等的调节和刺激，在动脉粥样硬变处、肾脏、神经元及空泡巨噬细胞中也有CRP合 成。在动物体内，也同样存在着CRP，如在狗、猪、兔、鲎、河蚌等中均发现过，狗的CRP是一种 环状正五聚蛋白，分子量约为100kD，由5个亚单位组成，每个亚单位的分子量为20kD，其 中的2个亚单位是糖基化的。CRP无论在人或动物体内均是急性时相反应蛋白中重要的蛋 白之一，是一种敏感的炎症标志物，在急性创伤和感染时其血浓度急剧升高。正常动物血清 CRP含量很低，但在感染、炎性、手术及肿瘤等情况下，几个小时迅速升高，在狗体内24~48 小时可达高峰。病变消退后，CRP可迅速下降至正常。在我国，兽用抗生素在兽医临床和动 物饲养方面应用广泛、不可或缺，为了达到既能促进生长又能防病治病的目的，大量的种类 繁多的抗生素被应用与畜禽生产的许多环节。而CRP-般在病毒感染时不增高或增高不明 显，在细菌感染后会迅速增高，所以可作为动物细菌和病毒感染的一个首选指标，防止抗生 素滥用和减少食品带来的健康问题。 1977年Sternberg创建了速率散射比浊法，是以测定的溶液对光的散射程度来判 断样品中抗原的含量。一定波长的光沿水平轴照射，碰到小颗粒的免疫复合物可导致光散 射，散射强度与抗原抗体免疫复合物的含量成正比。但免疫比浊法由于检测灵敏度达不到 临床的要求，于是出现了胶乳增强免疫比浊法。其基本原理是首先将抗体吸附在一种胶乳 颗粒上，当遇到相应的抗原时，抗原抗体结合而出现胶乳凝集。单个胶乳颗粒的大小在入射 光波长之内，光线可透过。当两个以上胶乳颗粒凝集可阻碍光线透过，使透射光减少，其减 少程度与胶乳凝集的程度成正比，亦与抗原成反比。但目前市面上暂未出现用于胶乳增强 免疫比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂。
技术实现思路
本专利技术针对上述技术问题，提出了一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂盒及检测方法。具体，本专利技术的技术方案为： 一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂盒，包括Rl试剂 和R2试剂； 所述Rl试剂的组分包括：10~50mmol/L的第一缓冲液、0. 2%~2. 5%w/v的促凝剂、 0?l~2%w/v表面活性剂、0? 01%~0.l%w/v的第一防腐剂； 所述的R2试剂的组分包括：0. 5%~2%w/v标记C-反应蛋白抗体交联酰胺基团纳米胶 乳、0. 2~2%w/v的稳定剂、10~50mmol/L的第二缓冲液、0. 01~0.l%w/v的第二防腐剂。 -种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测方法，包括以下 步骤： 51、 将校准品放置于本专利技术提供的检测试剂盒中，测量分析后得到浓度-吸光度差值 校准曲线； 52、 取出校准品，放入待测品，根据步骤Sl得到的浓度-吸光度差值校准曲线计算得到 所述待测品中的C-反应蛋白的浓度。 本专利技术提供的基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂 盒，首先填补了目前市面上用于胶乳增强免疫比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂的空白， 弥补现在国内兽医临床检测的不足。其次，采用本专利技术提供的基于酰胺基团纳米胶乳增强 比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂盒及检测方法，结合均相免疫的透射比浊或散射比浊 法进行试验，具有操作简单、反应快速、灵敏度高、特异性好的优点。【附图说明】 图1是实施例1中的浓度-吸光度差值校准曲线。 图2是实施例2中的浓度-吸光度差值校准曲线。【具体实施方式】 本专利技术提供了一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试 剂盒，包括Rl试剂和R2试剂； 所述Rl试剂的组分包括：10~50mmol/L的第一缓冲液、0. 2%~2. 5%w/v的促凝剂、 0?l~2%w/v表面活性剂、0? 01%~0.l%w/v的第一防腐剂； 所述的R2试剂的组分包括：0. 5%~2%w/v标记C-反应蛋白抗体交联酰胺基团纳米胶 乳、0. 2~2%w/v的稳定剂、10~50mmol/L的第二缓冲液、0. 01~0.l%w/v的第二防腐剂。 如前所述，本专利技术提供的基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的 检测试剂盒，首先填补了目前市面上用于胶乳增强免疫比浊法动物C-反应蛋白的检测试 剂的空白，弥补现在国内兽医临床检测的不足。其次，采用本专利技术提供的基于酰胺基团纳米 胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂盒及检测方法，结合均相免疫的透射比浊或 散射比浊法进行试验，具有操作简单、反应快速、灵敏度高、特异性好的优点。 本专利技术中，所述R2试剂中的标记C-反应蛋白抗体交联酰胺基团纳米胶乳可以通 过如下方法制备得到，具体地，包括如下步骤：将含有酰胺基团的胶乳加入活化缓冲液中， 再加入活化交联剂进行活化，然后加入C-反应蛋白多克隆抗体进行交联，最后加入胶乳封 闭液，封闭残留活化位点。 其中，所述活化缓冲液为l~10mmol/L、pH=4~6的2-吗啉乙磺酸缓冲液。所述，所 述活化交联剂中含有1-乙基_ (3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐和N羟基琥珀酰胺，且 所述活化交联剂中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐的浓度为0. 01~0.l%w/ v，所述N羟基琥珀酰胺的浓度为0. 01~0.l%w/v。所述胶乳封闭液中含有0. 2~2%w/v的第 二稳定剂、l〇~50mmol/L的第三缓冲液、0. 01~0.l%w/v的第三防腐剂，但不局限于此。 作为本专利技术的一种优选实施方式，按照上述步骤制备所述标记C-反应蛋白抗体 交联酰胺基团纳米胶乳时，所述的活化时间为1~2小时；所述的交联反应时间为2~4小时， 但不局限于此。 需要说明地是，在加入活化交联剂进行活化完成后，在加入C-反应蛋白多克隆抗 体进行交联的步骤之前，优选地，还需先通过离心分离的步骤去掉体系中残留的活化交联 剂。 另外，所述活化和交联的步骤均优选在37°C下进行。 本专利技术中，各原料中所采用的缓冲液可采用本领域常见的各种缓冲液，其可以相 同，也可以不同。具体地，所述第一缓冲液、第二缓冲液和第三缓冲液各自独立地选自磷酸 盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、tris缓冲液和HEPES缓冲液中 的一种；且所述第一缓冲液、第二缓冲液和第三缓冲液的pH值各自独立地为6. 5~8. 0。 所述Rl试剂中，所述促凝剂为不同聚合度的聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮中的一 种或两种。所述表面活性剂为阳离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂或非离子型表面 活性剂中的一种或多种。所述表面活性剂的亲水亲油平衡值(简称为HLB值）大于8. 0。 本专利技术中，各原料体系中所采用的防腐剂可以相同，也可以不同。具体地，所述第 一防腐剂、第二防腐剂和第三防腐剂各自独立地为叠氮钠、硫柳汞、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C‑反应蛋白的检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂；所述R1试剂的组分包括：10~50mmol/L的第一缓冲液、0.2%~2.5%w/v的促凝剂、0.1~2%w/v表面活性剂、0.01%~0.1%w/v的第一防腐剂；所述的R2试剂的组分包括：0.5%~2%w/v标记C‑反应蛋白抗体交联酰胺基团纳米胶乳、0.2~2%w/v的稳定剂、10~50mmol/L的第二缓冲液、0.01~0.1%w/v的第二防腐剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈海彬，唐金春，高燕静，
申请(专利权)人：深圳市汇松科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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