Cephaloziellin B 在制备治疗卵巢癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了Cephaloziellin B在制备治疗卵巢癌药物中的应用，属于药物领域。研究发现Cephaloziellin B对卵巢癌SKOV3细胞的增殖具有抑制作用，且其抑制率呈浓度和时间依赖性，可以进一步研究开发成制备治疗卵巢癌的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化合物CephaloziellinB的新用途，具体涉及CephaloziellinB在 制备治疗卵巢癌药物中的应用。
技术介绍
Rui-JuanLi等人首次分离纯化出化合物CephaloziellinB，并将成果发 表在著名天然产物杂志（SecondaryMetabolitesfromtheChineseLiverwort Cephaloziellakiaeri，J.Nat.Prod.，2013, 76,1700-1708)〇目前尚未有该化合物关于治疗卵巢癌的活性报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种CephaloziellinB的医药用途。 上述目的是通过如下技术方案实现的： CephaloziellinB在制备治疗卵巢癌药物中的应用，所述CephaloziellinB化学 结构式如下， 进一步地，所述卵巢癌为SK0V3。【具体实施方式】 下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容。 实施例1:CephaloziellinB的分离制备及结构确证 CephaloziellinB的制备方法同文献报道的制备方法（BioactiveLimonoidand TriterpenoidConstituentsofTurraeapubescens，J.Nat.Prod. ，2013,76,1166-1174)〇 结构确证：白色结晶（甲醇），熔点156-158°C。根据HR-ESI-MS可知分子式为 C20H2205,不饱和度为 10。核磁共振氢谱数据SH(ppm，DMS0-d6,600MHz) :H-l(2.07，m)， H-l(l. 89,dd，J= 15. 6,7. 2)，H-2(2. 42,m)，H-2(2. 58,m)，H-3(6. 91，br，s)，H-6(4. 59， dd，J= 11. 4,7. 8)，H-7(2. 28,dd，J= 12. 5,7. 8)，H-7(l. 80,dd，J= 12. 0)，H-10(l. 98， m)，H-ll(3.01，dd，J= 13.2,7.8)，H-ll(2.00，m)，H-12(5.30，t，J= 8.4)，H-14(6.47，br， s)，H-15(7. 35,br，s)，H-16(7. 46,br，s)，H-17(l. 20,s)，H-19(l. 31，s)，H-20(5. 50,s); 核磁共振碳谱数据Sc(ppm，DMS0-d6,600Hz) : 19.1 (CH2,1-C)，24.0 (CH2, 2-C)，138.4 (CH， 3-C)，132. 9 (C，4-C)，40. 1 (C，5-C)，84. 7 (CH，6-C)，42. 0 (CH2, 7-C)，72. 6 (C，8-C)，60. 5 (C， 9-C)，45. 9 (CH，10-C)，38. 0 (CH2,11-C)，74. 7 (CH，12-C)，128. 9 (C，13-C)，109. 1 (CH，14-C)， 143. 6 (CH，15-C)，139. 8 (CH，16-C)，24. 6 (CH3, 17-C)，169. 8 (C，18-C)，30. 1 (CH3,19-C)， 101. 0(CH，20-C)。结构确证数据与文献报道一致，因此可以确定本专利技术制备的化合物即为 文献报道的CephaloziellinB。 实施例2:CephaloziellinB的药理作用试验 -、材料和仪器 人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SK0V3由兰州大学的医学实验中心提供。通用 RPMI-1640培养基（10%胎牛血清）培养。C印haloziellinB自制，HPLC归一化纯度大于 98%。RPMI-1640培养液、四甲基偶氮挫蓝（MTT)、二甲基亚砜（DMS0)、L-谷氨酰胺购于科 昊生物工程有限公司。胰蛋白酶购于美国Sigma公司。胎牛血清购于杭州四季青生物工程 材料有限公司。十二院基磺酸钠（SDS)购于西安周鼎生物技术有限责任公司。HER2(FITC 标记）购于北京博奥森生物技术有限公司。酸化HER2(FITC标记）购于北京博奥森生物技 术有限公司。青霉素、链霉素购于华北制药厂。 C02培养箱（Heraeus，BB5060UV)，德国倒置相差显微镜（OLYMPUS，CK-40)，日本荧 光显微镜（OLYMPUS0PTICAL，AX80,日本），超净工作台（苏州净化设备有限公司），酶标分 析仪（BI0-TEK公司，美国），低温高速离心机（Beckman-Coulter公司，德国），EpicsXL流 式细胞仪（Beckman-Coulter公司，德国），R-3850型自动台式灭火器（山东新华医疗器械 股份有限公司），DHG-9245A型电热恒温鼓风干燥箱（上海-恒科技有限公司），KQ-250DB 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），数显恒温水浴箱（上海梅香仪器有限公 司），BS400S电子分子天平（北京赛多利斯天平有限公司），08-2恒温磁力搅拌器（上海天 平仪器厂），TDL-5普通离心机（上海安亭科学仪器厂），低温冰箱（日本三洋公司），电子 制冰箱（日本三洋公司），细胞冻存管（上海生工生物工程有限公司），96孔板（科昊生物 工程有限公司）。 二、试验方法 1、细胞培养 1.1细胞复苏 将冻存管迅速从液氮中取出后立即放入37°C温水中，轻轻晃动冻存管，使冻存物 尽快溶解，将其放入超净工作台中，将其内的细胞悬液移入离心管，再向离心管中加入10 倍RPMI-1640培养液（含10%小牛血清），离心，800rpm/min，离心5~10min，弃上清，细胞 沉淀中加入含10%小牛血清的RPMI-1640培养液，轻摇均匀，置37°C、5%C02浓度的培养 箱中培养。并注明细胞名称及日期。 1.2细胞传代培养 待SK0V3细胞长至80~90%培养瓶时，弃去原有的培养液，并用配好的PBS洗两 遍；用0. 25%的胰酶消化，放在倒置显微镜下观察，当见细胞回缩、细胞间隙增大、形态变 圆时弃去消化液，加入一定量的培养液中和胰酶消化液，并用吸管轻轻吹打已经消化过的 细胞.，使其脱离培养瓶，800rpm/min离心5min，弃上清；显微镜下在计数板上进行细胞计 数，按1:3比例传代，分装至培养瓶中，再次补充适量培养液后继续培养。注意严格无菌操 作，每天观察细胞生长情况。 1. 3细胞冻存 取对数生长期的细胞以0.25%的胰蛋白酶消化后离心，PBS洗2次，在低速离心机 上lOOOrpm离心5min，弃上清液，加入lmL于-20°C下预冷的含DMS0的细胞冻存液，用吸管 吹打均匀后移入冻存管中，用封口膜封口标记后放入4°C静置30min，之后-20°C放置2h后 转入-80°C。一个月内使用的细胞可保存于_80°C中，长期保存者24h后应由-80°C移入液 氮中。细胞的复苏与冻存应遵循的原则为慢冻快融。2、四甲基偶氮蓝（MTT)实验 (1)选择对数生长期的细胞（生长80-90 % )时，用配好的0.25 %胰酶将细胞 消。化好以后，轻轻地吹打制成单细胞悬液，调整的最终的细胞浓度为8X104/mL;(2)取 3个96孔板，每个时间点1板，100yL/孔，每孔细胞数为104做本文档来自技高网...

【技术保护点】
Cephaloziellin B在制备治疗卵巢癌中的应用，所述Cephaloziellin B化学结构式如下，

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵东顺，
申请(专利权)人：赵东顺，
类型：发明
国别省市：浙江;33