本发明专利技术涉及一种快捷测定水中微囊藻毒素-RR（MC-RR）的量子点荧光检测方法，属于分析化学检测领域。该方法利用EDC和NHS活化水溶性核壳式CdSe/CdS量子点（QDs）使之与MC-RR单克隆抗体进行共价连接，形成QDs-MC-RR生物共轭体。在优化后的反应条件下，将不同浓度的MC-RR加入到生物共轭体中，发生荧光猝灭现象，荧光猝灭程度与MC-RR的浓度呈一定相关。该方法快捷、廉价、简便且高灵敏度，可直接应用于水中MC-RR的测定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种快捷测定水中MC-RR的量子点荧光检测方法，属于分析化学检测 领域。
技术介绍
微囊藻毒素（MC)具有肝毒性、肾毒性、神经毒性、免疫毒性及生殖毒性，也是确认 的肝癌促进剂。藻毒素的结构为环状七肽，已知超过60种结构变异体，含量相对较多、毒性 较大的几种为：LR、RR及YR。MC-RR毒性虽然比MC-LR小，但它含量高，危害甚至比MC-LR大， 而且国内还未将MC-RR作为监测指标。对于MC-RR的检测研究相对较少，目前以HPLC-MS、 HPLC法为主。但因HPLC-MS法仪器昂贵，样品制备过程复杂、耗时长，检测费用高，且对操作 人员要求也较高；HPLC法灵敏度达不到要求，需要浓缩样品，前处理繁琐，且产生大量有毒 的有机废液，耗人力、耗时、费钱。这限制了这两种方法在基层检测机构中的推广应用。因 此，开发出一种快捷、廉价、简便且高灵敏度的检测水及水产品中的MC-RR方法很有必要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于建立一种快捷、廉价、简便且高灵敏度的检测水中MC-RR的方 法。 按照本专利技术提供的技术方案：一种快捷测定水中MC-RR的量子点荧光检测方法， 步骤如下： (1) 制备水溶性核壳式结构的CdSe/CdS量子点 取合成的有机相CdSe/CdSlmL，用20yL巯基乙酸转相，正己烷洗涤，干燥，得到CdSe/CdS量子点（QDs)粉末；称取20mgCdSe/CdS量子点粉末溶于pH= 7. 17的10mL0.02mol/ L的PBS缓冲溶液中，即得到2.Omg/mL水溶性的CdSe/CdS量子点QDs; (2) 制备QDs-MC-RR抗体生物共辄体及反应条件的优化 将 2mgEDC、0. 5mgNHS和 40ML2.Omg/mL的QDs混合于 2mL0? 02mol/LpH为 7. 17 的PBS缓冲溶液中，混匀后于室温下孵育30min，加入2ML疏基乙酸终止活化反应，5min后向 活化好的QDs溶液中加入IOMLlOnmol/LMC-RR单克隆抗体(苏州科同生物医药科技有限 公司），37°C恒温震荡培养lh，加入IOML0. 04mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液终止反应。 再用100KD的超滤膜离心管1000 Orpm离心纯化得到QDs-MC-RR生物共辄体，加入5ML5% 牛血清蛋白溶液封闭； 检测MC-RR反应条件：PBS缓冲溶液pH为7. 17,反应时间60min，反应温度37°C，QDs浓度 2.Omg/mL; (3) 检测MC-RR标准曲线的建立 向上述2mLQDs-MC-RR生物共辄体溶液中加入10ML不同浓度的MC-RR，分别为 0.0nmol/L、0.5nmol/L、1.0nmol/L、2.0nmol/L、3.0nmol/L、4.0nmol/L的标准系列，在 400nm激发波长下QDs-MC-RR生物共辄体的荧光猝灭程度与MC-RR浓度的关系：该生物共 辄体系的荧光强度与MC-RR浓度在一定范围内呈线性相关关系，且符合Lambert-Beer公 式： (F0-Fn) /F0=O. 1103C+0. 02293 (r=0. 99460) F。为未加入MC-RR时QDs-MC-RR生物共辄体的荧光强度；Fn为加入MC-RR后QDs-MC-RR生物共辄体的荧光强度；C为加入MC-RR样品的浓度，单位：nmol/L; (4)方法精密度及检出限 MC-RR浓度分别为0. 5nmol/L、2. 0nmol/L、4.Onmol/L时平行测定7次，精密度RSD分别为11. 3%、5. 6%、4. 2% ;MC-RR浓度为0. 25nmol/L时平行测定11次，方法的检出限为 2. 4X10 10mol/L〇 本专利技术的有益效果：本专利技术提供的快捷测定水中MC-RR的量子点荧光检测方法与 常用的HPLC-MS、HPLC等检测方法相比，廉价、简便，配上便携式荧光仪可用于现场检测。【附图说明】 图1 :水溶性CdSe/CdS量子点的TEM图。 图2:QDs与QDs-MC-RR生物共辄体的吸收光谱。 图3:QDs与QDs-MC-RR生物共辄体的荧光光谱。 图4 :不同MC-RR浓度下生物共辄体荧光光谱图，a-f?浓度分别为0. 0,0. 5,1. 0， 2. 0, 3. 0,4. 0nmol/L〇【具体实施方式】 实施例1 一种快捷测定水中微囊藻毒素-RR的量子点荧光检测方法，包括如下步 骤： 1、 制备水溶性核壳式结构的CdSe/CdS量子点 取20mmolCdO(氧化锦）置于三颈烧瓶中，加入9.6mL油酸和40mL液体石錯，搅拌 加热到220°C，作为镉源。取Immol硒粉加到50mL液体石蜡中，搅拌并缓慢加热到220°C， 作为硒源。取5mL的镉源，剧烈搅拌下快速注入到硒源中，维持溶液温度在220°C，加热30 min得到CdSe量子点。然后降温到100 °C，并向其中通入H2S气体，磁力搅拌。反应结束， 温度缓慢升高到220 °C，回流30min，得到有机相核壳式CdSe/CdS量子点，（参照文献Deng 等发表于J.Phys.Chem.B, 2005，109 (9): 16671)〇 取合成的有机相CdSe/CdSlmL，用20yL巯基乙酸转相，正己烷洗涤，干燥，得 到CdSe/CdS量子点QDs粉末；称取20mgCdSe/CdS量子点粉末溶于pH= 7. 17的10mL 0. 02mol/L的PBS缓冲溶液中，即得到2.Omg/mL水溶性的CdSe/CdS量子点QDs; 2、 制备QDs-MC-RR生物共辄体及反应条件的优化 将 2mgEDC、0. 5mgNHS和 40ML2.Omg/mL的QDs混合于 2mL0? 02mol/LpH为 7. 17 的PBS缓冲溶液中，混匀后于室温下孵育30min，加入2ML巯基乙酸终止活化反应，5min后向活 化好的QDs溶液中加入10ML10nmol/LMC-RR单克隆抗体，37°C恒温震荡培养lh，加入10ML 0. 04mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液终止反应。再用100KD的超滤膜离心管1000 Orpm离 心纯化得到QDs-MC-RR生物共辄体，加入5ML5%牛血清蛋白溶液封闭。 优化影响生物共辄体荧光猝灭的因素，得到检测MC-RR最佳实验条件：pH= 7. 17， 反应时间60min，反应温度37°C及CdSe/CdS量子点浓度2.Omg/mL。 3、检测MC-RR标准曲线的建立 向上述2mLQDs-MC-RR生物共辄体溶液中加入IOML不同浓度的MC-RR，分别为 0? 0nmol/L、0. 5nmol/L、l. 0nmol/L、2. 0nmol/L、3. 0nmol/L、4.Onmol/L的标准系列。在 400nm激发波长下QDs-MC-RR生物共辄体的荧光猝灭程度与MC-RR浓度的关系：该生物共 辄体系的荧光强度与MC-RR浓度在一定范围内呈线性相关关系，且符合Lambert-Beer公 式： (F0-Fn) /F0=O. 1103C+0. 02293 (r=0. 99460) F。为未加入MC-RR时QDs-MC-RR生物共辄体的荧光强度；Fn为加入MC-RR后QDs-MC-RR生物共辄体的荧光强度；本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快捷测定水中MC‑RR的量子点荧光检测方法，其特征在于步骤如下：（1）制备水溶性核壳式结构的CdSe/CdS量子点取合成的有机相CdSe/CdS 1mL，用20μL巯基乙酸转相，正己烷洗涤，干燥，得到CdSe/CdS量子点QDs粉末；称取20 mg CdSe/CdS量子点粉末溶于pH= 7.17的10 mL 0.02mol/L的PBS缓冲溶液中，即得到2.0mg/mL水溶性的CdSe/CdS量子点QDs；（2）制备QDs‑MC‑RR生物共轭体及反应条件的优化将2mg EDC、0.5mg NHS和40µL 2.0mg/mL的QDs混合于2mL 0.02mol/L pH为7.17的PBS缓冲溶液中，混匀后于室温下孵育30min，加入2µL巯基乙酸终止活化反应，5min后向活化好的QDs溶液中加入10µL 10nmol/L MC‑RR单克隆抗体，37℃恒温震荡培养1h，加入10µL 0.04mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液终止反应；再用100KD的超滤膜离心管10000rpm离心纯化得到QDs‑MC‑RR 生物共轭体，加入5µL 5%牛血清蛋白溶液封闭；检测MC‑RR反应条件：PBS缓冲溶液pH为7.17，反应时间60min，反应温度37℃，QDs浓度2.0mg/mL；（3）检测MC‑RR标准曲线的建立向上述2mL QDs‑MC‑RR生物共轭体溶液中加入10µL 不同浓度的MC‑RR，分别为 0.0nmol/L、0.5nmol/L、1.0nmol/L、2.0nmol/L、3.0nmol/L、4.0nmol/L的标准系列，在400nm激发波长下QDs‑MC‑RR生物共轭体的荧光猝灭程度与MC‑RR浓度的关系：该生物共轭体系的荧光强度与MC‑RR浓度在一定范围内呈线性相关关系，且符合Lambert–Beer公式： （F0‑Fn）/F0=0.1103C+0.02293，r=0.99460；F0为未加入MC‑RR时QDs‑MC‑RR生物共轭体的荧光强度；Fn为加入MC‑RR后QDs‑MC‑RR生物共轭体的荧光强度；C为加入MC‑RR样品的浓度，单位：nmol/L；（4）方法精密度及检出限MC‑RR浓度分别为0.5nmol/L、2.0nmol/L、4.0nmol/L时平行测定7次，精密度RSD分别为11.3%、5.6%、4.2%；MC‑RR浓度为0.25nmol/L时平行测定11次，方法的检出限为2.4×10‑10 mol/L。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孟元华，凌霞，龚燕，朱鹏飞，徐志飞，
申请(专利权)人：无锡市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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