检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法技术

本发明专利技术提出了检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法，该方法包括：(1)将待检测的谷物食品与乙腈水溶液进行混合，其中，所述乙腈水溶液的浓度为80体积％，基于1克所述待检测的谷物食品，所述乙腈水溶液的用量为5毫升；(2)将步骤(1)中所得到的混合物进行离心处理，并收集上清液；以及(3)通过酶联免疫法检验，确定步骤(2)中所得到的上清液中黄曲霉毒素B1的含量。本发明专利技术检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法具有下列优点的至少之一：操作简便、快速、灵敏度高以及准确性强。

【技术实现步骤摘要】
检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法
本专利技术涉及食品检测领域。具体地，本专利技术涉及检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法。
技术介绍
黄曲霉毒素B1(AflatoxinB1)被国际癌症研究机构定为Ⅰ类致癌物(人类致癌物)。我国2011年实施的《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量标准》对食品中黄曲霉毒素B1的含量进行了明确规定。然而，目前检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法仍有待改进。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提供一种检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法，该方法操作简便、快速、灵敏度高或者准确性强。需要说明的是，本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的：国家标准GB/T17480-2008提出了一种测定饲料中黄曲霉毒素的方法，简言之，包括取一定量的充分研磨粉碎的样本，利用一定比例的甲醇溶液提取样本中的黄曲霉毒素B1，之后再用酶联免疫试剂进行检测获得结果。但专利技术人在研究过程中发现，针对某些谷物类样本(如：核桃、花生等)，经充分研磨粉碎后其样本形态接近膏状，在用有机溶剂甲醇进行提取时，离心获得的上清液较为浑浊且成分复杂、含较多油脂，对酶联免疫法的检测结果有较大影响，经常会出现本底检测值偏高(假阳性)，而添加回收率又偏低(假阴性)的现象。本专利技术的专利技术人经过大量实验发现，将谷物食品和乙腈水溶液混合，将得到的混合物进行离心，对收集的上清液进行稀释后通过酶联免疫法检测，确定上清液中黄曲霉毒素B1的含量。由此检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法具有下列优点的至少之一：操作简便、快速、灵敏度高以及准确性强。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法。根据本专利技术的实施例，该检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法包括：(1)将待检测的谷物食品与乙腈水溶液进行混合，其中，所述乙腈水溶液的浓度为80体积％，基于1克所述待检测的谷物食品，所述乙腈水溶液的用量为5毫升；(2)将步骤(1)中所得到的混合物进行离心处理，并收集上清液；以及(3)通过酶联免疫法检验，确定步骤(2)中所得到的上清液中黄曲霉毒素B1的含量。由此，最终的检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法具有下列优点的至少之一：操作简便、快速、灵敏度高以及准确性强。根据本专利技术的实施例，上述一种检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法还可以具有下列附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述谷物为核桃、花生、大豆、燕麦、干果、坚果和大米的至少一种。由此，根据本专利技术实施例的检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的灵敏度或者较强的准确性。根据本专利技术的实施例，所述谷物食品包括含有选自核桃、花生、大豆、燕麦、干果、坚果和大米的至少一种的乳制品。由此，根据本专利技术实施例的检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的灵敏度或者较强的准确性。根据本专利技术的实施例，在步骤(1)中，将所述待检测的谷物食品与所述乙腈水溶液进行混合是通过将所述乙腈水溶液加入到所述待检测的谷物食品中进行的。由此，根据本专利技术实施例的检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的灵敏度或者较强的准确性。根据本专利技术的实施例，在步骤(2)中，所述离心是在4摄氏度下进行的。由此，根据本专利技术实施例的检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的灵敏度或者较强的准确性。根据本专利技术的实施例，在步骤(2)中，在3000g下进行所述离心10分钟。由此，根据本专利技术实施例的检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的灵敏度或者较强的准确性。根据本专利技术的实施例，在进行所述酶联免疫法检验之前，预先将所述上清液稀释10倍。由此，根据本专利技术实施例的检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的灵敏度或者较强的准确性。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法。根据本专利技术的实施例，该检测黄曲霉毒素B1的方法包括：第一步，将5mL80体积％的乙腈溶液加入到1.00g核桃粉中，3000rpm振荡5min，以进行混合。第二步，将第一步得到的混合物于4℃，3000g条件下离心10min，收集上清液(相当于稀释倍数为5)，进一步用洗涤缓冲液稀释10倍，制成待检测稀释液(最终样品的最终稀释倍数为50)。第三步，酶联免疫法检测：(1)使用前将所有溶液恢复至室温；(2)取出实验所需数量的稀释孔置于微孔架上，向每个稀释孔加入200μL待检测稀释液(使用前震荡混匀)；(3)取出等量包被抗体的微孔置于另一个微孔架上；(4)分别向含有待检测稀释液的稀释孔中加入100μL标准品(6个标准品，浓度分别为：0ng/mL、0.02ng/mL、0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.4ng/mL)或样品，吸打混匀，至少吸打5次；(5)从每个稀释孔中移取100μL混合液至相应的抗体包被微孔中，室温20-25℃孵育30分钟；(6)将微孔中液体倒入废液缸，采用稀释后的洗涤缓冲液洗涤微孔，共洗涤3-5次。然后拍板，去除残留的洗涤液；(7)向每个包被抗体的微孔中加入100μL黄曲霉毒素B1酶标物，室温20-25℃下避光孵育30分钟，重复步骤(6)；(8)移取底物试剂100μL至每个微孔中，室温20-25℃下避光孵育10分钟；(9)添加终止液100μL至每个微孔中，使用酶标仪在450nm的波长下读取每个微孔的OD值，务必在加入终止液后5分钟内读取吸光度值；(10)以标准品对应孔的吸光度值为纵坐标、标准品浓度为横坐标构建标准曲线，拟合方式为spline逻辑拟合。将待检测液稀释液对应孔的吸光度值代入标准曲线中，从标准曲线上读出所对应的浓度，为待检测液稀释液的黄曲霉毒素B1含量，乘以稀释倍数即为谷物食品中黄曲霉毒素B1含量。由此，根据本专利技术实施例的检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法可以进一步具有较简便、快速的操作、较高的灵敏度或者较强的准确性。此外，根据本专利技术的实施例，本专利技术检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法具有以下优点的至少之一：1、根据本专利技术的实施例，本专利技术利用乙腈水溶液提取谷物食品中的黄曲霉毒素B1，克服了利用甲醇提取导致的离心上清液较为浑浊且成分复杂、含油脂较多的缺点，利用乙腈提取及离心得到的上清液澄清，检测结果准确性和精密度方面较甲醇提取有所提高，其中准确性方面有明显的优势。2、根据本专利技术的实施例，在进行酶联免疫法检验之前，预先将待测上清液稀释10倍。由此，不仅有效地淡化了待测上清液的背景颜色，方便洗板时微孔的彻底洗净，而且降低了用于提取的乙腈的浓度，更加有利于酶联免疫反应的进行，检测结果准确性和精密度都得到了显著地提高。3、根据本专利技术的实施例，将待检测的谷物食品与乙腈水溶液振荡混合后直接离心，省去了振荡混合后超声等中间步骤，操作简便、快速，准确性较高。4、根据本专利技术的实施例，通过酶联免疫法进行检测，操作简便、准确性高。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，包括：第一步，将5mL 80体积％的乙腈溶液加入到1.00g核桃粉中，3000rpm振荡5min，以进行混合。第二步，将第一步得到的混合物于4℃，3000g条件下离心10min，收集上清液(相当于稀释倍数为5)，进一步用洗涤缓冲液稀释10倍，制成待检测稀释液(最终样品的最终稀释倍数为50)。第三步，酶联免疫法检测：(1)使用前将所有溶液恢复至室温；(2)取出实验所需数量的稀释孔置于微孔架上，向每个稀释孔加入200μL待检测稀释液(使用前震荡混匀)；(3)取出等量包被抗体的微孔置于另一个微孔架上；(4)分别向含有待检测稀释液的稀释孔中加入100μL标准品(6个标准品，浓度分别为：0ng/mL、0.02ng/mL、0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.4ng/mL)或样品，吸打混匀，至少吸打5次；(5)从每个稀释孔中移取100μL混合液至相应的抗体包被微孔中，室温20‑25℃孵育30分钟；(6)将微孔中液体倒入废液缸，采用稀释后的洗涤缓冲液洗涤微孔，共洗涤3‑5次。然后拍板，去除残留的洗涤液；(7)向每个包被抗体的微孔中加入100μL黄曲霉毒素B1酶标物，室温20‑25℃下避光孵育30分钟，重复步骤(6)；(8)移取底物试剂100μL至每个微孔中，室温20‑25℃下避光孵育10分钟；(9)添加终止液100μL至每个微孔中，使用酶标仪在450nm的波长下读取每个微孔的OD值，务必在加入终止液后5分钟内读取吸光度值；(10)以标准品对应孔的吸光度值为纵坐标、标准品浓度为横坐标构建标准曲线，拟合方式为spline逻辑拟合。将待检测液稀释液对应孔的吸光度值代入标准曲线中，从标准曲线上读出所对应的浓度，为待检测液稀释液的黄曲霉毒素B1含量，乘以稀释倍数即为谷物食品中黄曲霉毒素B1含量。...

【技术特征摘要】
1.一种检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，包括：第一步，将5mL80体积％的乙腈溶液加入到1.00g核桃粉中，3000rpm振荡5min，以进行混合；第二步，将第一步得到的混合物于4℃，3000g条件下离心10min，收集上清液，相当于稀释倍数为5，进一步用洗涤缓冲液稀释10倍，制成待检测稀释液，样品的最终稀释倍数为50；第三步，酶联免疫法检测：(1)使用前将所有溶液恢复至室温；(2)取出实验所需数量的稀释孔置于微孔架上，向每个稀释孔加入200μL待检测稀释液，使用前震荡混匀；(3)取出等量包被抗体的微孔置于另一个微孔架上；(4)分别向含有待检测稀释液的稀释孔中加入100μL标准品或样品，其中，6个标准品的浓度分别为：0ng/mL、0.02ng/mL、0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.4ng/mL，吸打混匀，至少吸打5次；(5...

【专利技术属性】
技术研发人员：解鑫，宋晓东，喻东威，李海礁，赵媛，齐文静，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15