基于表面活性剂聚集纳米金的17β-雌二醇比色检测法制造技术

本发明专利技术公开一种基于表面活性剂聚集纳米金的17β-雌二醇比色检测法：将待测17β-雌二醇样品加至适配体溶液中，混匀、孵育，得混合溶液A；向所述混合溶液A中加入表面活性剂、缓冲液，混匀、孵育，得混合溶液B；向所述混合溶液B中加入纳米金溶液，混合得溶液C；测定空白对照液及所述溶液C于650nm和520nm处的吸光值比值A650/A520分别为A0、A，得ΔA＝A-A0；根据17β-雌二醇含量的标准曲线，确定所述ΔA对应的17β-雌二醇含量。本方法提供的检测方法快速、廉价、灵敏度高、选择性好，最低检测限为1.96nmol/L，克服了传统检测方法中存在的耗时、依赖大型仪器设备，成本高等缺点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于水环境中17β-雌二醇检测领域，是一种基于表面活性剂聚集纳米金的17β-雌二醇比色检测法，特别涉及一种基于功能核酸适配体利用阳离子表面活性剂聚集纳米金比色检测17β-雌二醇的方法。
技术介绍
17β-雌二醇是一种天然的雌激素，并且广泛存在于自然环境中，它可以从外部环境进入人体，从而扰乱人体内分泌系统功能，造成人体在神经系统、免疫系统和生殖发育等系统上的病变。因此，开发一种简单、快速、灵敏的针对17β-雌二醇的检测方法具有很重要的现实意义。传统的17β-雌二醇检测方法有高效液相色谱法，气相色谱-质谱法，化学发光免疫法等等，这些方法虽然能够达到较高的检测限，但是都是基于实验室中复杂昂贵的仪器，并且成本高、耗时长，难以满足现场实时精准检测的需要。本专利技术构建了一种基于功能核酸适配体利用阳离子表面活性剂聚集纳米金比色检测17β-雌二醇的方法。功能核酸适配体是通过指数富集配体的系统进化技术(SELEX)筛选而来一段具有特异性识别靶物质的核酸序列，是一种新型的生物识别分子，易修饰、成本低、具有较好的稳定性，目前已经实现了对金属离子、有机小分子等物质的精准检测。基于功能核酸适配体，本专利技术的申请人在研究前期曾完成过一项“基于核酸适配体的比色法检测17β-雌二醇的方法”的在先申请，所用的阳离子聚合物为PDDA，PDDA含有大量的阳离子，所以聚集纳米金的效率极高，少量PDDA即可让纳米金状态产生显著的变化，很难精准控制，增加了背景信号的强度，不利于传感体系的构建；而本专利技术所用的阳离子表面活性剂为CTAB，CTAB是一种低密度电荷聚合物，对于实验中纳米金的聚集比较温和，可控性显著增加。另外，适配体还能够与阳离子表面活性剂CTAB结合成超分子结构，本专利技术基于核酸适配体、利用阳离子表面活性剂CTAB聚集纳米金，使用多功能酶标仪测定吸光度来实现了对17β-雌二醇的定量检测，本专利技术构建的方法在现有的技术中尚未报道过。
技术实现思路
本专利技术在针对现有技术上存在的不足，构建了一种基于表面活性剂聚集纳米金的17β-雌二醇比色检测法，即利用阳离子表面活性剂聚集纳米金比色检测17β-雌二醇的方法。当体系中不存在17β-雌二醇时，适配体与加入的表面活性剂CTAB组装成超分子，当加入纳米金溶液之后，纳米金分散呈红色；当体系中存在17β-雌二醇时，适配体与17β-雌二醇特异性结合，当加入表面活性剂CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)与纳米金溶液之后，溶液聚集呈蓝色，利用酶标仪测定650nm和520nm处吸光度的比值。根据17β-雌二醇浓度的增加和对应吸光度的比值大小，即可实现对17β-雌二醇的定量精准检测。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术提供一种基于表面活性剂聚集纳米金的17β-雌二醇比色检测法，所述比色检测法包括如下步骤：将待测17β-雌二醇样品加至适配体溶液中，混匀、孵育，得混合溶液A；向所述混合溶液A中加入表面活性剂、缓冲液，混匀、孵育，得混合溶液B；向所述混合溶液B中加入纳米金溶液，混合得溶液C；测定空白对照及所述溶液C于650nm和520nm处的吸光值比值A650/A520分别为A0、A，得ΔA＝A-A0；根据17β-雌二醇含量的标准曲线，确定所述ΔA对应的17β-雌二醇含量，即为待测17β-雌二醇样品中17β-雌二醇的含量。优选地，所述适配体溶液中的适配体为一段功能核苷酸序列，所述序列如SEQIDNo.1所示：5'-GCTTCCAGCTTATTGAATTACACGCAGAGGGTAGCGGCTCTGCGCATTCAATTGCTGCGCGCTGAAGCGCGGAAGC-3'(SEQIDNo.1)。优选地，所述混合液C中，适配体的浓度为1～6nmol/L，通过加入100nmol/L的母液15μL实现；表面活性剂的浓度为0.4～1.8μmol/L，通过加入50μmol/L母液14μL实现；所述缓冲液为浓度10mmol/L、pH值7.0的PBS缓冲液。优选地，所述适配体的浓度为3nmol/L，表面活性剂的浓度为1.4μmol/L。优选地，所述表面活性剂包括十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)。优选地，所述纳米金溶液通过以下方法制备：在100mL煮沸的质量百分比浓度为0.01％的氯金酸溶液中加入3.5mL质量百分比浓度为1％的柠檬酸三钠溶液，搅拌30分钟，移除加热装置后继续搅拌混合物10分钟；最后，待混合物温度降为室温时用0.2μm超滤膜过滤，即得；所述纳米金溶液储存在恒温为4℃的黑色玻璃瓶中备用；所述混合溶液C为500mL时，纳米金溶液的用量为200mL。优选地，所述孵育的条件为25℃、20min。优选地，所述标准曲线的绘制具体为：配置浓度已知的17β-雌二醇梯度溶液为标准液，以不含17β-雌二醇的溶液为空白对照，参照所述比色检测法对标准溶液的650nm和520nm波长条件下的吸光度值进行检测，以标准溶液与对照溶液对应的相对吸光度的比值之差ΔA作图，绘制标准曲线。优选地，所述空白对照液包括超纯水。本实验专利技术的原理是(见图1)：通过功能核酸适配体既能与靶物质特异性结合，又能与阳离子表面活性剂CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)组装成超分子结构，再引入能被表面活性剂CTAB聚集的纳米金来构建比色检测体系。当体系中不存在17β-雌二醇时，适配体与加入的表面活性剂CTAB组装成超分子，当加入纳米金溶液之后，纳米金分散呈红色，利用酶标仪测定650nm和520nm处吸光度的比值较小。当体系中存在17β-雌二醇时，适配体与17β-雌二醇特异性结合，当加入表面活性剂CTAB与纳米金溶液之后,纳米金表面电荷被阳离子表面活性剂CTAB破坏，溶液聚集呈蓝色，利用酶标仪测定650nm和520nm处吸光度的比值较大。并且随着17β-雌二醇浓度的增加，吸光度的比值越大，通过比较吸光度比值的大小，即可实现对17β-雌二醇的定量精准检测。与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：本方法提供的检测方法快速、廉价、灵敏度高、选择性好，操作简单且高效，可用于检测水样中17β-雌二醇的含量，检测的浓度范围是0～1000nmol/L，线性拟合直线方程为y＝4.97*10-4x+2.42*10-3，最低检测限为1.96nmol/L；一定程度上克服了传统检测方法中存在的耗时、依赖大型仪器设备，成本高等缺点。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显：图1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于表面活性剂聚集纳米金的17β‑雌二醇比色检测法，其特征在于，所述比色检测法包括如下步骤：将待测17β‑雌二醇样品加至适配体溶液中，混匀、孵育，得混合溶液A；向所述混合溶液A中加入表面活性剂、缓冲液，混匀、孵育，得混合溶液B；向所述混合溶液B中加入纳米金溶液，混合得溶液C；测定空白对照液及所述溶液C于650nm和520nm处的吸光值比值A650/A520分别为A0、A，得ΔA＝A‑A0；根据17β‑雌二醇含量的标准曲线，确定所述ΔA对应的17β‑雌二醇含量，即为待测17β‑雌二醇样品中17β‑雌二醇的含量。

【技术特征摘要】
1.一种基于表面活性剂聚集纳米金的17β-雌二醇比色检测法，其特征在于，所述
比色检测法包括如下步骤：
将待测17β-雌二醇样品加至适配体溶液中，混匀、孵育，得混合溶液A；
向所述混合溶液A中加入表面活性剂、缓冲液，混匀、孵育，得混合溶液B；
向所述混合溶液B中加入纳米金溶液，混合得溶液C；
测定空白对照液及所述溶液C于650nm和520nm处的吸光值比值A650/A520分别
为A0、A，得ΔA＝A-A0；
根据17β-雌二醇含量的标准曲线，确定所述ΔA对应的17β-雌二醇含量，即为待
测17β-雌二醇样品中17β-雌二醇的含量。
2.根据权利要求1所述的基于表面活性剂聚集纳米金的17β-雌二醇比色检测法，
其特征在于，所述适配体溶液中的适配体为一段功能核苷酸序列，所述序列如SEQID
No.1所示。
3.根据权利要求1或2所述的基于表面活性剂聚集纳米金的17β-雌二醇比色检测
法，其特征在于，所述混合液C中，适配体的浓度为1～6nmol/L。
4.根据权利要求1所述的基于表面活性剂聚集纳米金的17β-雌二醇比色检测法，
其特征在于，所述混合液C中，表面活性剂的浓度为0.4～1.8μmol/L。
5.根据权利要求4所述的基于表面活性剂聚集纳米金的17β-雌二醇比色检测法，
其特征在于，所述表面活性剂包括十六烷基三甲基溴化铵。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王鲁梅，夏兵，张东伟，詹深山，吕晶，杜高尚，徐涵楚，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31