本发明专利技术公开了一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂，所述疫苗佐剂包含几丁寡糖，所述几丁寡糖由以下方法制备：壳聚糖经生物酶法水解或化学法降解或物理方法裂解生成聚合度为2-10的壳寡糖，将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应，制备聚合度为2-10的几丁寡糖；或者，利用酶法或化学法直接降解几丁质获得聚合度为2-10的几丁寡糖；所述几丁寡糖的乙酰度>90％，分子量范围为400～2000Da。本发明专利技术的疫苗佐剂可以用作减毒疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗、蛋白质疫苗或多肽疫苗的佐剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，涉及一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫 苗制剂。
技术介绍
佐剂是一类先于抗原或与抗原同时应用时能增强抗原免疫效应的物质，它的作用 主要是增强机体免疫系统对抗原的特异性免疫应答反应。自200多年前英国医生Jenner 接种牛痘预防天花并取得了人体试验成功，人类可以通过接种疫苗预防控制某些传染性 疾病。1925年法国免疫学家兼兽医学家Gaston Ramon发现在白喉、破伤风疫苗中加入 木薯淀粉、琼脂、化脓性细菌等某些与抗原无关的物质可以特异性地增强机体对白喉和破 伤风毒素的抵抗力。在此后的疫苗佐剂的研究中发现许多物质均具有佐剂效应，如木薯 粉、羊毛脂、丹宁酸等。近年来，随着人们对免疫佐剂研究的不断深入，越来越多的物质 被发现有免疫佐剂的功能，如铝盐佐剂、油乳佐剂、蜂胶佐剂、多糖佐剂、新型免疫佐剂等 (Biomolecular Engineering, 2001，18(3) :69-85.)。油乳佐剂主要有油包水乳剂的弗氏佐 剂（FA)、水包油乳剂的MF-59等。新型免疫佐剂有脂质体、细胞因子佐剂等。至今被我国 批准合法使用的人用疫苗佐剂是铝盐佐剂，它可以有效地诱导免疫反应，显著增强机体的 体液免疫应答（Arch Virol，2008,153(5) : 831 - 837.)。然而，铝盐佐剂只能增强机体的 体液免疫功能，对于如HIV等胞内病毒无法产生有效的细胞免疫促进作用。其次，铝盐佐剂 主要以氢氧化铝和磷酸铝为代表，在注射部位产生红肿、结节等局部反应，铝盐还易在体内 蓄积，特别是脑部，有可能导致脑病的发生。传统兽用疫苗中常用的佐剂有铝盐佐剂和油佐 剂。油佐剂疫苗在抗体效价和免疫持久性方面都优于铝盐佐剂疫苗，但油佐剂不良反应严 重，皮下注射会引起炎症、溃疡和肉芽肿；油类物质长期潴留于组织中不易代谢。 随着免疫学研究的不断深入和基因工程技术的迅速发展，针对不同疾病已开展了 各种新型基因工程疫苗的研制，新型技术疫苗如抗原表位疫苗、基因工程疫苗等抗原纯度 越来越高，但这些疫苗普遍存在分子小、免疫原性弱、难以诱导机体产生有效免疫应答等不 足，从而需要免疫佐剂来协同这种作用，尤其是安全无毒、能够刺激较强细胞免疫应答的佐 剂，以及适合粘膜疫苗、核酸疫苗和肿瘤疫苗的免疫佐剂。 几丁寡糖分子量小，水溶性良好，易被人体吸收，生物活性高，具有大分子糖所不 具备的更独特的生理生化活性，同时具有纯天然、无辐射、无污染等特点，在保健品、营养 剂、食品添加剂等食品工业方面，植物生长调节剂及饲料添加剂等农牧业方面，废水处理、 纺织、化工、日用化学品、生物工程和医药等方面具有良好的应用价值（杜昱光，白雪芳，虞 星炬.寡聚糖类物质生理活性的研究.中国生化药物杂志，1997,18(5) :268.)，更为值得关 注的是它能够有效激活机体细胞免疫和体液免疫，将其开发为疫苗佐剂具有良好的应用前 景。 几丁寡糖的制备主要有化学法、物理降解法、酶法、糖基转移法（中国生化药物杂 志，1999,20(2) :99)。化学法一般用浓盐酸水解，但其产品多在四糖以下，而且化学反应条 件十分苛刻，不易控制，后处理也繁琐。糖基转移法是利用低聚合度寡糖，在酶（主要是溶 菌酶或几丁质酶）的参与后，延长糖链成为高聚合度的寡糖，此方法主要得到六糖和七糖。 酶降解法所用的酶有几丁质酶、壳聚糖酶、纤维素酶、糖苷酶和脂肪酶等，对其聚合度无法 控制。而不同聚合度的几丁寡糖对其佐剂活性有影响。目前所能制备得到的非常有限的寡 糖价格昂贵，其在应用上受到很大的限制。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制 剂。为达到上述目的，本专利技术采用了如下的技术方案：本专利技术的第一方面涉及一种具有如下特征的几丁寡糖：壳聚糖经生物酶法水解或化学法降解或物理方法（微波、射线照射）裂解生成聚 合度为2-10的壳寡糖，将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应，制备聚合度为2-10的几丁 寡糖； 或，利用酶法或化学法直接降解几丁质获得2-10聚合度的几丁寡糖。 所制备的几丁寡糖的乙酰度>90%，分子量范围为400~2000Da。 根据本专利技术所述的几丁寡糖，其具有图1或图2所示特征。本专利技术的再一方面涉及一种疫苗佐剂，其包含本专利技术中上述的几丁寡糖；具体地， 所述疫苗佐剂为减毒疫苗、灭活疫苗、蛋白质疫苗、核酸疫苗或多肽疫苗的佐剂。 本专利技术的再一方面涉及一种疫苗组合物或疫苗制剂，其包含本专利技术的含几丁寡糖 组分的疫苗佐剂。根据本专利技术任一项所述的疫苗组合物或疫苗制剂，其为减毒疫苗、灭活疫苗、蛋白 质疫苗、核酸疫苗或多肽疫苗。根据本专利技术任一项所述的疫苗组合物和疫苗制剂，其为猪繁殖与呼吸综合征（猪 蓝耳病）灭活疫苗或乙肝亚单位疫苗。本专利技术的再一方面涉及本专利技术上述几丁寡糖在制备疫苗佐剂中的用途；或者在制 备疫苗组合物和疫苗制剂中的用途。根据本专利技术任一项的用途，其中，所述疫苗佐剂为减毒疫苗、灭活疫苗、蛋白质疫 苗、核酸疫苗或多肽疫苗的佐剂；所述疫苗制剂或疫苗组合物为减毒疫苗、灭活疫苗、核酸 疫苗、蛋白质疫苗或多肽疫苗。本专利技术涉及的疫苗组合物，该疫苗组合物含疫苗抗原和几丁寡糖佐剂； 本专利技术涉及的疫苗制剂，该疫苗制剂含疫苗抗原、几丁寡糖佐剂和制剂所需的各 种辅料； 本专利技术还涉及一种免疫方法或者接种方法，包括给予哺乳动物有效量的疫苗制剂 或疫苗组合物的步骤。 术语"有效量"是指哺乳动物中实现免疫效果的疫苗制剂或疫苗复合物的剂量。 本专利技术的有益效果： 本专利技术的几丁寡糖能够增强免疫应答，具有良好的佐剂作用，可以用作减毒疫苗、 灭活疫苗、蛋白质疫苗、核酸疫苗或多肽疫苗的佐剂。本专利技术中的几丁寡糖已经可以大规模 生产。本专利技术为几丁寡糖佐剂作用机理的研究奠定基础，为找到具有更好佐剂效果的寡糖 提供了参考。 本专利技术通过生物酶法水解、化学法降解或物理方法裂解，并结合膜分离技术，制备 聚合度为2-10的壳寡糖，将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应，制备聚合度为2-10的几 丁寡糖。可以高产率大规模地生产，并且质量可控，成本适宜，可以为制成体内环境下易溶、 易吸收、使用方便的几丁寡糖，应用于疫苗佐剂提供物质基础。【附图说明】 图1为本专利技术的几丁寡糖与壳寡糖红外检测图谱对比； 图2为本专利技术的几丁寡糖的质谱分析图谱； 图3为猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗抗原配伍几丁寡糖第1次免疫小鼠血清抗体 滴度； 图4为猪蓝耳病灭活疫苗抗原配伍几丁寡糖第2次免疫小鼠血清抗体滴度； 图5为猪蓝耳病灭活疫苗抗原配伍几丁寡糖第3次免疫小鼠血清抗体滴度； 图6为猪蓝耳病灭活疫苗抗原配伍几丁寡糖第3次免疫小鼠血清抗体亚型及亚 类； 图7为乙肝亚单位疫苗配伍几丁寡糖第2次免疫小鼠血清抗体滴度； 图8为乙肝亚单位疫苗配伍几丁寡糖第2次免疫小鼠血清抗体亚型及亚类。【具体实施方式】 下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可以通过市购获得的常规产品。 实施例1 :几丁寡糖的制备及理化件质i、几丁寡本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种疫苗佐剂，其包含几丁寡糖，所述几丁寡糖由以下方法制备：壳聚糖经生物酶法水解或化学法降解或物理方法裂解生成聚合度为2‑10的壳寡糖，将该壳寡糖经氨基的选择性乙酰化反应，制备聚合度为2‑10的几丁寡糖；或者，利用酶法或化学法直接降解几丁质获得聚合度为2‑10的几丁寡糖；所述几丁寡糖的乙酰度>90％，分子量范围为400～2000Da。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杜昱光，贾培媛，单俊杰，王玉霞，许青松，刘洪涛，程功，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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