一种镉-IgE螯合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种镉-IgE螯合物及其制备方法和应用，该镉-IgE螯合物是镉离子与IgE通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。本发明专利技术建立了镉-IgE螯合物的定性定量检测方法，以便定量检测镉-IgE螯合物在评价一个地区镉污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中镉-IgE螯合物可以间接反映这个地区人群受镉污染的情况，从而间接反映这个地区镉污染程度。本发明专利技术建立的镉-IgE螯合物定量检测方法其准确度大大提高，并且使检测的重复性得到大大提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测领域，更具体地说，涉及一种镉-IgE螯合物及其制备方法和应 用。
技术介绍
IgE主要由粘膜相关淋巴样组织产生，其中大部分是由胃肠淋巴样组织所合成，少 部分由呼吸道、唾液腺和生殖道粘膜组织合成。哺乳期产妇腺组织含有大量IgE产生细胞， 这些细胞主要来自胃肠。在人类，还有少量的IgE来自骨髓。人出生后4~6月开始合成 IgE，4~12岁血清中含量达成人水平，血清型IgE总Ig的10 %左右，半衰期约5~6天。 IgE有IgEl和IgE2两个亚类。IgEl主要存在于血清中，约占血清中IgE的85%，a 1链分 子量为56kD ;IgE2主要存在于外分泌液中，少部分以血清型IgE存在，约占血清中IgE的 15%，a 2链缺乏铰链区，分子量为52kD。血清中的IgE除单体形式外还有由J链共价相连 的二聚体或三聚体等形式。分泌型IgE是由J连接的双体和分泌成分所组成，主要存在于 初乳、唾液、泪液、胃肠液、支气管分泌等外分泌液中，是粘膜局部免疫的最重要因素，分泌 型IgE通过与相应的病原微生物（如脊髓灰质炎病毒）结合，阻抑其吸附到易感细胞上，分 泌型IgE还可中和毒素如霍乱弧菌毒素和大肠杆毒素等。新生儿易患呼吸道、胃肠道感染 可能与IgE合成不足有关。慢性支气管炎发作与分泌型IgE的减少也有一定关系。产妇可 通过初乳将分泌型IgE传递给婴儿，这也是一种重要的自然被动免疫。嗜酸性粒细胞、中性 粒细胞和巨噬细胞表达Fc a R，血清型单体IgE可介导调理吞噬和ADCC作用。此外，分泌 型IgE具有免疫排除功能，即分泌型IgE结合饮食中大量的可溶性抗原以及肠道正常菌群 或病原微生物所释放的热原物质，防止它们进入血液。 镉是一种常见的有毒金属及环境污染物，广泛应用于工业生产环境中，包括电镀、 制造工业颜料、塑料稳定剂、镍铬电池等，与人们生活息息相关。对于普通人群，主要是通过 吸入镉污染的空气，及食用含镉污水灌溉农田生产的农作物（如含镉大米）等方式摄入镉。 当然，吸烟也是慢性镉吸入的另一重要来源。随着经济的飞速发展，镉污染对于人类的影 响越来越大。通过研究镉对小鼠子代体液免疫的影响发现了染镉21天仔鼠的血清溶血素 滴度明显低于对照组；4周龄时高镉组、低镉组、对照组仔鼠间血清溶血素滴度没有显著差 异；8周龄时，低镉组仔鼠血清溶血素滴度与对照组相比明显升高，表现出刺激作用，而高 镉组却与对照组无显著差异，表现免疫反应受到抑制。镉对子代小鼠的免疫影响是在尚未 发生母体中毒作用的情况下产生的，对仔鼠的生长发育也未见明显影响。可见发育中的免 疫系统对镉较敏感，提示可考虑将子代免疫指标作为研究镉的发育毒性作用的指标之一。 镉与多种蛋白质之间关系密切，可以与多种蛋白质结合，抑制多种蛋白酶的活性。 随着对镉毒性研究的深入，人们逐渐认识到镉与蛋白的相互作用在其致毒过程中扮演着重 要的角色，被认为是了解镉的毒性机理的关键所在，因此，对镉和蛋白质相互作用的研究就 显得愈发重要。而现在关于镉与蛋白质作用的机理仅是冰山一角，还有很多蛋白质与镉之 间的关系还不清楚，因而加强对于镉与蛋白质之间的关系至关重要。
技术实现思路
针对镉污染严重的问题，本专利技术的目的在于提供一种镉-IgE螯合物及其制备方 法，并建立镉-IgE螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测镉-IgE螯合物在评价一个 地区镉污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中镉-IgE螯合物可以间接反映 这个地区人群受镉污染的情况，从而间接反映这个地区镉污染程度。 本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种镉-IgE螯合物，镉离子与 IgE通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。 本专利技术还提供一种上述的镉-IgE螯合物的制备方法，包括以下步骤： A)镉与IgE的螯合反应：在提纯源于人体的IgE或按照生物学方法重组的IgE中 加入镉离子进行螯合反应，得到反应溶液； B)纯化镉-IgE螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的 IgE以及多余的镉离子，即得镉-IgE螯合物。 其中，体外合成法中所述步骤B)具体如下： (1)溶解样品：向经过步骤A)得到的反应溶液中加入生理盐水使镉-IgE螯合物 复溶； (2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgE特 异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱； (3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤⑴中样品，然后上柱，IgE与 填料特异性结合； (4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 05-0. lmol/L的磷 酸盐溶液进行洗脱，得到洗脱液I ; (5)收集：收集洗脱液I ; (6)透析：将步骤（5)中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH20透析除盐，换水三次 后，4°C透析过夜，收集样本； (7)平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能 与镉特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱； (8)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（6)中样本，然后上柱； (9)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 5-1. Omol/L的磷 酸盐溶液进行洗脱，得到洗脱液II ; (10)收集：收集洗脱液II ; (11)透析：将步骤（10)中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH20透析除盐，换水三 次后，4°C透析过夜，收集样本，即得镉-IgE螯合物。 其中，上述镉-IgE螯合物的制备方法，还包括步骤C):对镉-IgE螯合物的鉴定； 其中，步骤C)中具体如下： (1)制备胶床：以琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶中的一种作为介质制备胶床； (2)加样：取步骤B)中提取纯化得到的镉-IgE螯合物，加入稀释缓冲液，并混匀， 然后加样于样品槽中； (3)电泳：连接电泳板，进行电泳； (4)检测：在胶床上找出含镉的蛋白条带，将该蛋白条带取出并溶解，然后再采用 ELISA法或ICP-MS法或AAS法检测是否含有镉以及检测镉的含量。 本专利技术还提供一种如上述的镉-IgE螯合物在制备检测人体内镉-IgE螯合物的试 剂或试剂盒中的应用。 本专利技术还提供一种至少包括如上述的镉-IgE螯合物作为标准品的试剂盒。 优选地，该试剂盒中还包括包被液，该包被液含有捕获IgE的物质或捕获镉的物 质。 本专利技术还提供一种定量检测镉-IgE螯合物的方法，以已知含量的上述的镉-IgE 螯合物作为标准品，采用以下方法之一对样品进行检测：酶联免疫法、酶联免疫与原子吸收 光谱结合法、酶联免疫与电感耦合等离子体质谱结合法、提纯镉-IgE螯合物与酶联免疫结 合法、提纯镉-IgE螯合物与原子吸收光谱结合法、提纯镉-IgE螯合物与电感耦合等离子体 质谱结合法、电泳与酶联免疫或原子吸收光谱或电感耦合等离子体质谱结合法。 实施本专利技术的镉-IgE螯合物及其制备方法和应用，具有以下有益效果： 1.本专利技术首次体外合成镉-IgE螯合物； 2.本专利技术首次提出镉-IgE螯合物可用于制备检测血样中镉-IgE螯合物的试剂或 试剂盒中的应用。 3.本专利技术建立了镉-IgE螯合物的定性定量检测方法，以便定量检测镉-IgE螯合 物在评价一个地区镉污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种镉‑IgE螯合物，其特征在于，镉离子与IgE通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张积仁，阳帆，董欣敏，吴婧，蔡睿，孙遥，赵乙木，
申请(专利权)人：上海拜豪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31