滑菇多糖的乙醇醇析分级制备方法技术

本发明专利技术公开了一种滑菇多糖的乙醇醇析分级制备。本发明专利技术利用水提法经酶处理所得滑菇多糖溶液是多种不同分子量的多糖的混合组分，根据以上乙醇分级沉淀原理，向滑菇多糖的水溶液中逐次加入一定体积分数的乙醇，便可以逐级沉淀出分子量由大到小的多糖，具体是：首次在滑菇水提取液加入1:1(溶液:乙醇＝1:1)，之后每次按如下比例逐次对下层多糖依次加入1:1、1:2、1:3和1:5(溶液:乙醇)的乙醇进行分级醇析多糖。本方法将滑菇多糖通过多步醇析分级制备，简单方便经济，制备过程多糖损失少，而且醇析后的多糖纯度完全能达到各级多糖的功能研究、制作食品饮料和食品营养添加剂等用途的要求。

【技术实现步骤摘要】
滑菇多糖的乙醇醇析分级制备方法
本专利技术属食品领域，涉及一种滑菇(Pholiotanameko)多糖乙醇醇析分级制备的方法。
技术介绍
滑菇(Pholiotanameko)，又名真珠菇、滑子蘑，担子菌纲，散菌目，盖球菇科，磷伞属。滑菇因菌盖表面有粘液而得名，滑菇口味鲜美，营养价值高，在世界上享有较高声誉，是当今世界第五、日本第三的食用菌品种，是食用、药用兼备的食用菌新秀。滑菇中含有对肿瘤起抑制作用的多糖物质，并可预防葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎杆菌、结核杆菌的感染。分级沉淀法是指在混合组分的溶液中加入能与该溶液互溶的溶剂，改变混合组分溶液中某些组分的溶解度，使其从溶液中逐步析出。当在含有溶质的水溶液中加入一定量的乙醇，从而降低溶质的溶解度，使其沉淀吸析出。具体地，当乙醇加入溶液中时，介质的介电常数降低，溶质分子之间的静电引力增加，聚集形成沉淀。滑菇在我国广泛种植，但是还未见到滑菇加工产品的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种滑菇多糖的乙醇醇析分级制备方法。利用水提法经酶处理所得滑菇多糖溶液是多种不同分子量的多糖的混合组分，根据以上乙醇分级沉淀原理，向滑菇多糖的水溶液中逐次加入一定体积分数的乙醇，便可以逐级沉淀出分子量由大到小的多糖，乙醇醇析得到的多糖经醋酸纤维薄膜电泳都可以达到单一条带。本专利技术的技术方案如下：滑菇多糖的乙醇醇析分级制备，它包括以下步骤：(1)选剔选购新鲜滑菇，在购得的新鲜滑菇中挑选无明显组织伤痕、大小均一且干净的优良滑菇备用；(2)称重将挑选好的优良滑菇置于提前清洗并烘干的500ml烧杯中，用电子天平称取300g供实验使用；(3)浸泡在称取好的滑菇中加蒸馏水，滑菇与水的质量比为1:5，室温下浸泡2h，其间每隔20min对浸泡液在速度60rpm下进行搅拌5min。(4)破碎打浆将浸泡过的滑菇与水一同倒入高速组织捣碎机中，对滑菇进行破碎打浆1-2min，得滑菇组织浆液。(5)水浴浸提将上一步所得滑菇组织浆液等分为若干份分别置于500ml烧杯中，每份适量以确保浆液恰好完全浸入水浴锅的热水中，再将盛有滑菇组织浆液的烧杯置于恒温水浴锅中，85℃下水浴浸提3h。(6)过滤用三层纱布对水浴过后的滑菇组织浆液进行过滤，所得若干份滤液混合留存，所得滤渣集中在一个烧杯中进行下一步。(7)洗渣上一步所得滤渣加1倍水于85℃下水浴浸提1h,过滤，保留滤液；所得滤渣再加0.5倍水于85℃下水浴浸提1h,过滤，弃渣，保留滤液。所得所有滤液充分混合。(8)分级醇析根据多糖醇析分层操作工艺流程图1和图2，分步按比例对“过滤”、“洗渣”两步所得混合滤液进行醇析，具体操作如下：①第一步所得滤液平均分为若干份，每份150-200ml，分别置于500ml烧杯中，每份按1:1比例加无水乙醇醇析，静置2h分三层，分别是上层絮状多糖、中间清液以及下层胶状多糖。取上层多糖去酒精后，弃中间清液，下层保留。上层多糖和下层多糖获得后在4000rpm离心20min后除去液体，获得上层多糖和下层多糖的固体。②第二步上一步所得下层多糖用水复溶(每g加水400ml水)，再按1:1(溶液:乙醇)比例加乙醇醇析，静置2h，分层情况同上。取上层多糖去乙醇，弃中间清液，下层保留。③第三步上一步所得下层多糖用水复溶(每g加水400ml水)，再按1:1(溶液:乙醇)比例加乙醇醇析，静置2h，分层情况同上。取上层多糖去乙醇，弃中间清液，下层保留。④第四步上一步所得下层多糖用水复溶(每g加水400ml水)，再按1:2(溶液:乙醇)比例加乙醇醇析，静置2h，分层情况同上。取上层多糖去乙醇，弃中间清液，下层保留。⑤第五步上一步所得下层多糖用水复溶(每g加水400ml水)，再按1:3(溶液:乙醇)比例加乙醇醇析，静置2h，分层情况同上。取上层多糖去乙醇，弃中间清液，下层保留。⑥第六步上一步所得下层多糖用水复溶(每g加水400ml水)，再按1:5(溶液:乙醇)比例加乙醇醇析，静置2h分两层，分别是上层絮状多糖和下层清液。取上层多糖去乙醇，弃下层清液。注：每一步所得上层多糖复溶后取一定量按以上步骤重复操作；以上各步骤样品均标记留样；以下为标记原则：E表示经过醇析的样品，下标U、D分别表示多糖醇析液的上、下层多糖，stepX(X＝1.2.3……)表示第X步醇析，其后用连接符“-”连接这一步的醇析比例。例如第三步1:1醇析所得多糖标记为EUstep3-1:1。(9)冻干分级醇析所得全部多糖样品均用冷冻干燥机冷冻干燥24h，得粉状多糖样品。本专利技术具有如下有益效果：本专利技术将滑菇多糖通过醇析制备，简单方便经济，制备过程多糖损失少(质量百分比小于10％)，而且醇析后的多糖纯度达到电泳纯(图3-1、图3-2、图3-3、图3-4、图3-5电泳图上是单一条带，出一条带表示多糖达到电泳纯)，完全能达到其功能研究、制作食品饮料和食品营养添加剂等的用途。附图说明图1为本专利技术的滑菇多糖乙醇醇析操作工艺流程图；图2为本专利技术经乙醇醇析分级的多糖电泳图；图3-1滑菇多糖样品EUstep1-1:1的电泳结果图；图3-2滑菇多糖样品EUstep2-1:1的电泳结果图；图3-3滑菇多糖样品EUstep3-1:1的电泳结果图；图3-4滑菇多糖样品EUstep4-1:2的电泳结果图；图3-5滑菇多糖样品EDstep6-1:4的电泳结果图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步描述。实施例1：工艺步骤如下：(1)选剔选购新鲜滑菇，在购得的新鲜滑菇中挑选无明显组织伤痕、大小均一且干净的优良滑菇备用。(2)称重将挑选好的优良滑菇置于提前清洗并烘干的500ml烧杯中，用电子天平称取300g供实验使用。(3)浸泡在称取好的300g滑菇中加蒸馏水1500ml，室温下浸泡2h，其间每隔20min对浸泡液以60rpm的速度进行搅拌5min。(4)破碎打浆将浸泡过的滑菇与水一同倒入高速组织捣碎机中，对滑菇进行破碎打浆1-2min，得滑菇组织浆液。(5)水浴浸提将上一步所得滑菇组织浆液等分为若干份分别置于500ml烧杯中，每份适量以确保浆液恰好完全浸入水浴锅的热水中，再将盛有滑菇组织浆液的烧杯置于恒温水浴锅中，在85℃条件下水浴浸提3h。(6)过滤用三层纱布对水浴过后的滑菇组织浆液进行过滤，所得若干份滤液混合留存，所得若干份滤渣集中在一个烧杯中进行下一步。(7)洗渣上一步所得滤渣添加相同质量数的水于85℃下水浴再次浸提1h,然后再用三层纱布进行过滤，保留滤液；所得滤渣再加0.5倍质量数的水于85℃下水浴继续浸提1h,最后再次过滤，弃渣，保留滤液；将步骤6和7的所得所有滤液充分混合。(8)分级醇析根据多糖醇析分层操作流程图1和图2，分步按比例对步骤6和7两步所得混合滤液进行醇析，具体操作如下：①第一步所得滤液平均分为若干份，每份150-200ml，分别置于500ml烧杯中，每份按体积比1:1比例加无水乙醇醇析，静置2h后分三层，分别是上层絮状多糖、中间清液以及下层胶状多糖；取上层絮状多糖去除酒精，弃掉中层的中间清液，保留下层胶状多糖；将上层絮状多糖和下层胶状多糖分别在4000rpm条件下离心20min后除去液体，获得上层多糖和下层多糖的固体。②第二步将上一步所得下层多糖固体用水复溶(每g加水400ml水)，再按体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种滑菇多糖的乙醇醇析分级制备方法，其特征在于，按照以下步骤依进行：a.将滑菇多糖水提取液进行第一次乙醇醇析，将所得水提取液平均分为若干份，每份150‑200ml，分别置于500ml烧杯中，每份按体积比1:1比例加无水乙醇醇析，静置2h后分三层，分别是上层絮状多糖、中间清液以及下层胶状多糖；取上层絮状多糖去除酒精，弃掉中层的中间清液，保留下层胶状多糖；将上层絮状多糖和下层胶状多糖分别在4000rpm条件下离心20min后除去液体，获得上层多糖和下层多糖的固体；b.将第一次乙醇醇析后得到的下层多糖继续进行第二次乙醇醇析，依此进行六次乙醇醇析，即每次乙醇醇析分层后所得的下层多糖继续采用乙醇醇析；所述每次分层后所得的下层多糖进行醇析时加入的乙醇与下层多糖溶液的体积比为1:5‑1:1；c.将上述分级醇析所得全部多糖样品均用冷冻干燥机冷冻干燥24h，得粉状多糖样品。

【技术特征摘要】
1.一种滑菇多糖的乙醇醇析分级制备方法，其特征在于，按照以下步骤依进行：a.将滑菇多糖水提取液进行第一次乙醇醇析，将所得水提取液平均分为若干份，每份150-200ml，分别置于500ml烧杯中，每份按体积比1:1比例加无水乙醇醇析，静置2h后分三层，分别是上层絮状多糖、中间清液以及下层胶状多糖；取上层絮状多糖去除酒精，弃掉中层的中间清液，保留下层胶状多糖；将上层絮状多糖和下层胶状多糖分别在4000rpm条件下离心20min后除去液体，获得上层多糖和下层多糖的固体；b.将第一次乙醇醇析后得到的下层多糖继续进行第二次乙醇醇析，依此进行六次乙醇醇析，即每次乙醇醇析分层后所得的下层多糖继续采用乙醇醇析；所述第三次乙醇醇析时加入的乙醇与下层多糖溶液的体积比为1:1；第四次乙醇醇析时加入的乙醇与下层多糖溶液的体积比为2:1；第五次乙醇醇析时加入的乙醇与下层多糖溶液的体积比为3:1；第六次乙醇醇析时加入的乙醇与下层多糖溶液的体积比为5:1；c.将上述分级醇析所得全部多糖样品均用冷冻干燥机冷冻干燥24h，得粉状多糖样品。2.根据权利要求1所述的滑菇多糖的乙醇醇析分级制...

【专利技术属性】
技术研发人员：李海平，
申请(专利权)人：天津商业大学，
类型：发明
国别省市：天津;12