一种沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌复合增菌的选择性培养基及其制备方法技术

本发明专利技术涉及致病菌的检测技术领域，公开了一种沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌复合增菌的选择性培养基，包括：胰蛋白胨，蛋白胨，氯化钠，磷酸二氢钠，葡萄糖，甘露醇，七叶苷，柠檬酸钠，脱脂奶粉，灭菌蒸馏水，亚碲酸钾溶液，吖啶黄溶液，萘啶酮酸溶液。该培养基的制备方法包括：亚碲酸钾溶液的配制；吖啶黄溶液的配制；萘啶酮酸溶液的配制；半成品培养基的配制；样品的添加；培养基中亚碲酸钾溶液、吖啶黄溶液、萘啶酮酸溶液的添加。本发明专利技术的培养基能够同时对目标菌进行复合增菌并抑制非目标菌，且对处于亚致死状态的目标菌抑制作用小，使其也能够有效增菌；本发明专利技术的培养基制备方法操作简单，效率高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及致病菌的检测
，尤其涉及一种沙门氏菌、单增李斯特菌和副 溶血弧菌复合增菌的选择性培养基及其制备方法。
技术介绍
食品安全是一个全球性的重大公共卫生问题，食品污染和食源性疾病在发达国家 和发展中国家仍普遍存在。我国细菌性食源性疾病主要由沙门氏菌（Salmonella)和副溶 血弧菌（Vibrioparahaemolyticus))引发。单增李斯特菌（ListeriaMonocytogenes)虽 发病率不高，但其致死率远高于其他常见食源性病原菌。海产类食品作为高蛋白、低脂肪的 "白肉"，味道鲜美，营养丰富，深受广大消费者喜爱，但易受细菌污染导致腐败变质，影响产 品安全。因此沙门氏菌、副溶血弧菌和单增李斯特菌是进出口水产品常检项目。目前对于沙门氏菌、副溶血弧菌和单增李斯特菌主要采用常规培养、生化鉴定，大 多要耗费4-6天时间，而且程序复杂，所用试剂繁多，费事费力，检出效率低，检测灵敏度度 低，假阴性比较严重。近年来酶联荧光免疫检测（VIDAS)聚合酶链式反应（PCR)、金标试纸 法、API法、聚合酶免疫检测方法（EIA)和DNA探针技术等新技术逐渐应用于微生物检测， 大大提高检测的灵敏度和简化了操作。但能够满足要求的检测灵敏度仍然需要离不开前增 菌或选择性增菌。现有的增菌方法主要是根据所要检测的菌株进行各自的增菌处理，即不 同的菌株采用各自的选择性增菌培养基进行增菌处理，费时费力，不符合现在检测方法一 平台的同时检测多种致病菌的发展趋势。国内外现有研究中，涉及共增菌培养基技术的研 究主要包括：沙门氏菌和志贺氏菌共增技术、沙门氏菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌共增技 术（SEL)、沙门氏菌、大肠杆菌及单增李斯特菌共增技术以及广谱增菌肉汤（UPB)等，除SEL 外其余均属于无选择性增菌培养基，不能满足多种背景微生物多时对特定目标菌进行增菌 的要求。目前的检测方法中，不同致病菌有独立的检测方法，需要分别进行增菌。因此得到 一种能同时富集沙门氏菌、副溶血弧菌和单增李斯特菌的共增培养基，对实现共检具有重 要的意义。迄今为止，未见关于沙门氏菌、副溶血弧菌及单增李斯特菌选择性共增菌技术的 报道。 此外，冰鲜水产品在捕捞、加工、保藏过程中会受到各种损伤，使菌体处于亚致死 状态，容易产生假阴性，容易造成漏检。亚致死态的菌体虽然具有一定的活性，但是失去了 正常菌体的部分生理特性，这会导致在复合增菌培养时，选择性培养基中的选择性物质在 抑制非目标菌时，同时对处于亚致死状态的目标菌也进行了抑制，使处于亚致死状态的目 标菌无法生长，从而导致检测结果与实际不一致。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧 菌复合增菌的选择性培养基及其制备方法。本专利技术的培养基能够同时对目标菌沙门氏菌、 副溶血弧菌和单增李斯特菌进行复合增菌并抑制其他非目标菌，且对处于亚致死状态的目 标菌抑制作用小，使亚致死状态的目标菌也能进行增菌，增菌效果好；本专利技术提供的培养基 制备方法操作简单，效率高。 本专利技术的具体技术方案为：一种沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌复合增菌 的选择性培养基，按重量份数计包括如下组分： 胰蛋白胨15-20份，蛋白胨2-4份，氯化钠8-12份，磷酸二氢钠2-3份，葡萄糖2-3 份，甘露醇2-3份，七叶苷0. 01-0. 03份，柠檬酸钠0. 5-1. 5份，脱脂奶粉4-6份，灭菌蒸馏 水1000份，lmol/L的氢氧化钾溶液0. 1-1份，lmol/L的盐酸溶液0. 1-1份，亚碲酸钾溶液 0. 8-1. 2份，叮啶黄溶液0. 8-1. 2份，萘啶酮酸溶液0. 8-1. 2份。 所述亚碲酸钾溶液由0. 00005份亚碲酸钾和10份灭菌蒸馏水组成；所述吖啶黄溶 液由〇. 1份吖啶黄和10份灭菌蒸馏水组成；所述萘啶酮酸溶液由〇. 01份萘啶酮酸和10份 浓度为〇. 〇5mol/L的氢氧化钠溶液组成。 在本专利技术的培养基中，以沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌为目标菌，胰蛋白 胨、蛋白胨、氯化钠和磷酸二氢钠作为基础培养基为菌类提供营养源。葡萄糖、甘露醇作为 生长促进剂，能够促进菌类生长。脱脂奶粉作为复苏促进剂，能够促进处于亚致死状态的目 标菌复苏。柠檬酸钠作为目标菌可以利用的碳源，而其对于其他众多菌类则无法被利用。七 叶苷、亚碲酸钾溶液、吖啶黄溶液和萘啶酮酸溶液是作为抑制剂，它们具有选择性的抑制作 用，对目标菌的抑制作用较小，对其他众多菌类的抑制效果较强。 作为优选，按重量份数计所述选择性培养基的组分为：胰蛋白胨17份，蛋白胨3 份，氯化钠10份，磷酸二氢钠2. 5份，葡萄糖2. 5份，甘露醇2. 5份，七叶苷0. 02份，柠檬酸 钠1份，脱脂奶粉5份，灭菌蒸馏水1000份，lmol/L的氢氧化钾溶液0? 1-1份，lmol/L的盐 酸溶液〇. 1-1份，亚碲酸钾溶液1份，叮啶黄溶液1份，萘啶酮酸溶液1份。 作为优选，所述选择性培养基还包括0. 1-0. 5份茶皂素。茶皂素对常规的金色葡 萄球菌、酵母菌、霉菌等具有较强的抑制作用，而对本专利技术的目标菌抑制作用不明显，适用 作本专利技术培养基的组分。 -种沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌复合增菌的选择性培养基的制备方 法，包括如下步骤： 亚碲酸钾溶液的配制：称取亚碲酸钾0. 00005份加入到10份灭菌蒸馏水中，得到亚碲 酸钾溶液并备用； 吖啶黄溶液的配制：称取吖啶黄〇. 1份加入到10份灭菌蒸馏水中，得到吖啶黄溶液并 备用；萘啶酮酸溶液的配制：称取萘啶酮酸0. 01份加入到10份浓度为0. 05mol/L的氢氧化 钠溶液中，得到萘啶酮酸溶液并备用； 称取胰蛋白胨15-20份，蛋白胨2-4份，氯化钠8-12份，磷酸二氢钠2-3份，葡萄糖2-3 份，甘露醇2-3份，七叶苷0. 01-0. 03份，柠檬酸钠0. 5-1. 5份，脱脂奶粉4-6份，先后加入到 1000份灭菌蒸馏水中，混合均匀后用lmol/L的氢氧化钾溶液和lmol/L的盐酸溶液将所得 混合物pH调节至7. 5,高压灭菌15min，然后等待混合物冷却至50°C，在无菌条件下，向混合 物中添加亚碲酸钾溶液0. 16-0. 24份，叮啶黄溶液0. 16-0. 24份，萘啶酮酸溶液0. 16-0. 24 份，混合均匀后，制得半成品培养基； 在无菌环境下，将待检测的样品经均质器处理后添加到半成品培养基中，混合2min 后，在37°C下培养4-8小时，然后向半成品培养基中均匀添加亚碲酸钾溶液0. 64-0. 96份， 吖啶黄溶液〇. 64-0. 96份，萘啶酮酸溶液0. 64-0. 96份；再继续在37°C下培养16-20小时。 在本专利技术的培养基的制备过程中，将培养基的配制分为两步，在半成品培养基中， 培养基中除了添加营养源物质外，只添加了少量的抑制剂，这在一定程度上抑制了非目标 菌生长的同时，尽量减少抑制剂对亚致死状态的目标菌的抑制作用，再加上加量的目标菌 的专属营养源，能够使亚致死状态的目标菌复苏、生长。在亚致死状态的目标菌复苏后，再 添加较大剂量的抑制剂，对非目标菌进行较大程度的抑制，此时原先亚致死状态的目标菌 已复苏，具有较强的活力，抑制剂对其的抑当前第1页1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌复合增菌的选择性培养基，其特征在于按重量份数计包括如下组分：胰蛋白胨15‑20份，蛋白胨2‑4份，氯化钠8‑12份，磷酸二氢钠2‑3份，葡萄糖2‑3份，甘露醇2‑3份，七叶苷0.01‑0.03份，柠檬酸钠0.5‑1.5份，脱脂奶粉4‑6份，灭菌蒸馏水1000份，1mol/L的氢氧化钾溶液0.1‑1份，1mol/L的盐酸溶液0.1‑1份，亚碲酸钾溶液0. 8‑1.2份，吖啶黄溶液0.8‑1.2份，萘啶酮酸溶液0.8‑1.2份；所述亚碲酸钾溶液由0.00005份亚碲酸钾和10份灭菌蒸馏水组成；所述吖啶黄溶液由0.1份吖啶黄和10份灭菌蒸馏水组成；所述萘啶酮酸溶液由0.01份萘啶酮酸和10份浓度为0.05mol/L的氢氧化钠溶液组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡兴娟，沈飚，徐君辉，邵宏宏，周秀锦，张静，杨赛军，
申请(专利权)人：舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心，
类型：发明
国别省市：浙江;33