一种曲轴石斛组织培养繁育方法，包括如下步骤：(1)取曲轴石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽。采用本发明专利技术所述的培养方法得到的曲轴石斛丛生芽增殖系数达到20-28倍，能够在短时间内提供成活率高的曲轴石斛优质种苗，有效解决曲轴石斛的规模化育苗问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物繁殖方法，特别是。
技术介绍
曲轴石斛(Dendrobium gibsonii Lindl.)，为兰科石斛属多年生植物，为国家二级保护植物。生于海拔800-1000米的山地疏林中树干上。分布于中国、尼泊尔、锡金、不丹、印度东北部、缅甸、泰国。具有较高的园艺价值与药用价值，其茎甘、微苦，凉。滋阴润肺，清热生津，止渴，益胃。用于治疗热病伤津，口干烦渴，阴虚潮热，肺痨。目前曲轴石斛已经有人工栽培，主要通过分株繁育或扦插方式繁殖，但所需时间很长，繁殖倍率低，生产上难以实现大面积栽培。虽然曲轴石斛也有种子，但种子不具胚乳，无发芽能力，只有在真菌共生下，才能促进种子萌发生长，且发芽率非常低，通过种子繁育也无法满足生产需要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，能够有效快速地提高曲轴石斛种苗的繁殖速度和质量，实现曲轴石斛优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。本专利技术通过以下技术方案达到上述目的:，包括以下步骤:(I)外植体的选择与消毒:取曲轴石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2% (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23_27°C，光照强度15001ux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的PH值为5.8 ;(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养90天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加2.5-4.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、2.0-4.0mg/L的萘乙酸ΝΑΑ、0.1-0.8mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。本专利技术的突出优点在于:(I)采用生物技术对曲轴石斛进行组织培养快速繁殖，通过曲轴石斛丛生芽的繁殖，能够在短时间内培育出大量适合栽培种植的曲轴石斛幼苗，保障曲轴石斛种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。(2)采用本专利技术所述的培养方法得到的曲轴石斛丛生芽增殖系数达到20-28倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根。【具体实施方式】下面结合实施例对本专利技术的技术方案进一步说明。实施例1本专利技术所述的曲轴石斛的组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤:(I)外植体的选择与消毒:取曲轴石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2% (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23_27°C，光照强度15001ux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的PH值为5.8 ;(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养90天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、2.0mg/L的萘乙酸NAA、0.8mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为20.3。实施例2本专利技术所述的曲轴石斛的组织培养快速繁殖方法的另一个实例，包括以下步骤:(I)外植体的选择与消毒:取曲轴石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2% (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23_27°C，光照强度15001ux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的PH值为5.8 ;(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养90天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加4.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.lmg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为25.8。实施例3本专利技术所述的曲轴石斛的组织培养快速繁殖方法的再一个实例，包括以下步骤:(I)外植体的选择与消毒:取曲轴石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2% (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23_27°C，光照强度15001ux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的PH值为5.8 ;(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养90天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加3.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、3.0mg/L的萘乙酸NAA、0.4mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种曲轴石斛组织培养繁育方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取曲轴石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15‑30min、添加了2‑3滴吐温‑20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8‑10min、无菌水冲洗3‑5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2‑0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加2.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的条件下培养90天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加2.5‑4.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、2.0‑4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.1‑0.8mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄宝优，韦坤华，黄雪彦，农东新，李林轩，王晓峰，缪剑华，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西;45
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