本发明专利技术公开了一种红掌myb转录因子AaMYB1及其载体、工程菌与应用。所述转录因子AaMYB1的完整预测氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；编码基因如SEQ ID NO：2所示。首次从红掌中克隆MYB类调控花色苷合成的转录因子，通过过量表达，提高目标植物的合成花色苷的能力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种红掌myb转录因子AaMYBl及其载体、工程菌与应用。
技术介绍
红筹X Anthuriuin aWraea/?.)是世界性盆栽和鲜切花花奔。在我国高档盆花种植中占有相当重要的地位。然而，同其他大宗花卉一样，我国在红掌育种上也是处于较为落后的阶段。传统杂交育种必须要求有足够的杂交亲本和长期的经验积累，但是随着生物技术的迅速发展，利用基因改良选择性、定向培育红掌新品种则成为可能。但是由于缺乏可选基因，所以通过转基因技术使红掌获得优良性状目前尚未实现，而其重要基因的发掘和功能验证是通过转基因手段改良红掌性状的前提。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种红掌myb转录因子AaMYBl及其载体、工程菌与应用，通过超量表达证明该转录因子具有提高植物合成花色苷的能力，可为培育花色、叶色更为丰富的新品种提供基因资源。本专利技术采用的技术方案是: 一种红掌myb转录因子AaMYBl，所述转录因子AaMYBl的完整预测氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示；编码基因如SEQ ID NO:2所示。进一步包括至少90%同源且具有相同功能的所述转录因子AaMYBl的衍生物，所述的衍生物包括氨基酸序列或核酸序列。由于氨基酸序列的特殊性，任何含有SEQ ID N0:1所示氨基酸序列的肽蛋白的片段或其变体，如其保守性变体、生物活性片段或衍生物，只要该肽蛋白的片段或肽蛋白变体与前述氨基酸序列同源性在90%以上，均属于本专利技术保护范围之列。具体的所述改变可包括氨基酸序列中氨基酸的缺失、插入或替换；其中，对于变体的保守性改变，所替换的氨基酸具有与原氨基酸相似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸，变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。由于核苷酸序列的特殊性，任何如SEQ ID NO:2所示多核苷酸的变体，只要其与该多核苷酸具有90%以上同源性，均属于本专利技术保护范围之列。所述多核苷酸的变体是指一种具有一个或多个核苷酸改变的多核苷酸序列。此多核苷酸的变体可以使生的变位变异体或非生的变异体，包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个多核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的肽蛋白的功能。一种含有所述的红掌myb转录因子AaMYBl的编码基因的重组载体。一种含有所述的重组载体的重组基因工程菌。一种根据所述的重组载体的重组基因工程菌的构建方法，构建含有转录因子AaMYBl的编码基因的重组载体，将所述重组载体转化至农杆菌菌株EHA105中，获得的重组基因工程菌进行诱导培养，培养液分离纯化获得含有转录因子AaMYBl的编码基因的重组基因工程菌的菌体细胞。—种根据所述的红掌myb转录因子AaMYBl的应用，通过过量表达，提高目标植物的合成花色苷的能力。与现有技术相比，本专利技术的有益效果主要体现在:本专利技术首次从红掌中克隆MYB类调控花色苷合成的转录因子，即AaMYBl ;本专利技术通过与拟南芥等不同物种同类MYB转录因子序列比对，发现其属于第R2R3类MYB;通过转基因实验，发现该基因具有明显的提高植物合成花色苷的能力，证明其是一个非常有应用价值的转录因子。【附图说明】图1是来源于红掌的转录因子AaMYBl与其他物种同源基因的多序列比对结果； 图2是转基因烟草在不同生长阶段表现； 图3是转基因和野生型烟草花器官比较，上部分示转基因器官，下部分示野生型器官；图4是转基因和野生型烟草果实比较，A部分为去掉部分萼片的果实，B部分为去掉果皮的果实。【具体实施方式】本专利技术的要点在于提供了如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，在已知该氨基酸序列和核苷酸序列的情况下，该氨基酸序列和核苷酸序列的获得，以及相关载体、宿主细胞的获得，对于本领域技术人员来说均是显而易见的。本专利技术所提供的转录因子AaMYBl是从红掌中获得的，它属于具有显著提高花色苷含量功能的众多MYB转录因子家族中的一员。通过反转录RT-PCR，获得了该基因的完整编码框，随后构建超量表达载体并异源转化烟草，发现该转录因子具有明显的提高烟草体内花色苷含量的能力。下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此。实施例1来源于红掌的转录因子AaMYBl的获得 于2013年5月取6年生红掌品种“阿拉巴马”的幼嫩苞片和叶片为材料，采用Invitrogen公司生产的Trizol试剂提取总RNA，然后使用Promega公司生产的反转录试剂盒对总RNA进行处理、反转录合成cDNA，以此为模板。采用同源克隆法，设计兼并引物对Pl-GATCTCATCATCAGGCTGCATG (SEQ ID NO:3)，P2-GATTTCCTGGGACAACAGT (SEQ ID NO:4)，用上述模板进行扩增，该反应程序为95 0C I min, 94 °C 50 s, 56 V I min, 72 VI min, 36个循环，72 °C 5 min,所用试剂(LATaq酶)均购自大连宝生物公司，扩增体系:LAtaq 酶(5 U/μΙ) 0.5 μ?，1XLAtaq buffer II 5 μ?，dNTP mixture 8 μ?，template Iμ1，ΡΙ I μ1，Ρ2 I μ?，灭菌蒸馏水32.5 μ?。经过PCR扩增获得336 bp的中间片段。bp的中间片段为参考，设计3’ RACE和5’ RACE引物；以红掌幼嫩花芽为组织材料，按照述方法提取总RNA，参照CL0NTECH公司RACE试剂盒说明书(Cat.No (s).634858)分别进行进行3’ RACE和5’ RACE模板合成，备用。具体是，3’ RACE用到的引物对:3’ f-GGGGAACCGGTGGTCTCTCATAG (SEQ ID NO:5)，3’r一CTAATAC GACTCAC TATAG GGC (SEQ IDNO:6)，扩增体系:LAtaq 酶(5 U/μΙ) 0.5 μ?，1XLAtaq buffer II 5 μ?，dNTP mixture 8μ?，templat当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种红掌myb转录因子AaMYB1，其特征在于，所述转录因子AaMYB1的完整预测氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；编码基因如SEQ ID NO：2所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马广莹，朱开元，邹清成，刘慧春，史小华，张加强，
申请(专利权)人：浙江省萧山棉麻研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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