本发明专利技术提供了一株简单芽孢杆菌及其培养方法与应用，该简单芽孢杆菌f5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.10051。本发明专利技术经实验证明该菌株生长繁殖迅速，具有分解有机物、降氨氮等功效，可以制备成复合微生物制剂，可应用于水产养殖、水体修复、污水处理等方面，应用范围广泛，具有良好的市场应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物
，具体涉及。
技术介绍
有机物或营养物是最普遍的、被广泛证实和最容易理解的污染物质。有机物富营养化是污染的传统形式，主要来源于生活污水、工业废水等。营养物质的去除难度高，至今还没有任何单一的生物学、化学和物理措施能够彻底去除废水的氮、磷营养物质。对于水体富营养化治理，各个国家和地区采用不同的物理、化学、生物方法对其进行预防、控制和修复，并且取得了一定的成效。现流行的生物和生态修复，通过微生物降解和水生植物的吸收、转移或生态浮床、滤床的过滤、吸附等措施来消减水体中的氨氮。目前，关于简单芽孢杆菌的研究与应用相对较少。王香增等筛选了一株简单芽孢杆菌可降解原油成分，可应用于现场微生物油田环境治理(专利授权号CN 102533601 B)。薛东等分离的简单芽孢杆菌对污水、废水都有较好的絮凝效果，可用来开发絮凝剂产品。本专利技术涉及一株简单芽孢杆菌的筛选培养，该菌在降解有机物、降低氨氮等方面具有显著效果，以期应用于水产养殖、污水处理等方面。
技术实现思路
本专利技术提供了，可应用于水体有机物的降解、降低氨氮等。为实现上述专利技术目的，本专利技术通过下述技术方案予以实现: 一株简单芽孢杆菌f5，其分类命名为简单芽孢杆菌Bacillus simple,其保藏编号为CGMCC N0.10051。所述简单芽孢杆菌f5革兰氏阳性，菌落圆形，边缘整齐，乳白色，菌落光滑平整，生长温度15°C?40°C。本专利技术还提供了所述的简单芽孢杆菌f5的培养方法，将所述简单芽孢杆菌f5接种于LB液体种子培养基中进行培养；然后转接至发酵培养基中进行培养直至待镜检芽孢成熟率>90%。所述简单芽孢杆菌f5接种于LB液体种子培养基中，37°C下180rpm培养20h。所述发酵培养基的配方为:玉米浆10 g/L，葡萄糖30 g/L，酵母膏5 g/L, KH2PO4 Ig/L，K2HPO4 1.5 g/L, ( NH4)2S04 5 g/L, NaCl I g/L, MgSO4.7H20 0.5 g/L，余量为水，pH7.0 ?7.2o所述简单芽孢杆菌f5接种于发酵培养基中，37°C下ISOrpm培养24h。本专利技术提供了所述的简单芽孢杆菌f5在降解水体有机物和降低氨氮中的应用。向水体中加入浓度为10s CFU/mL的简单芽孢杆菌菌剂，搅动水体。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和技术效果:本专利技术筛选到的简单芽孢杆菌f5生长繁殖快，发酵菌量高，可适应淡水、海水生长，可满足产业化需求。简单芽孢杆菌对降解水体有机物、降低氨氮具有显著效果，可以制备成复合微生物制剂，可应用于水产养殖、水体修复、污水处理等方面，应用范围广泛，具有良好的市场应用前景。【附图说明】图1为所述简单芽孢杆菌f5在营养琼脂平板上的菌落形态； 图2为所述简单芽孢杆菌K对水体COD的降解实验结果； 图3为所述简单芽孢杆菌K对水体氨氮的降解实验结果。【具体实施方式】本专利技术结合以下具体实例对本专利技术作进一步详细的说明。实施例1、简单芽孢杆菌的筛选 1、简单芽孢杆菌f5的分离筛选 2014年7月，从胶南沿海多处采集对虾养殖区域的水样、底泥为样品筛选芽孢菌。底泥通过常规倍比稀释取上清为样品；水样可直接作为样品；样品液保温于75V 20min后，涂布于营养琼脂平板进行菌株的分离、纯化，得到4株芽孢杆菌。已纯化的单菌株进行氨氮降解测定。将4株单菌株接种于LB种子培养基中，37°C180rpm培养约20h至菌体浓度为10sCFU/mL。按1%接种量(体积比)转接至氨氮培养基中(葡萄糖 5g，MgSO4.7H20 0.25g，K2HPO4 0.5g，(NH4)2SO4 0.lg，水 1L，pH 7.2 ?7.4，20。。150 rpm培养)，定时取样测定氨氮浓度，该菌(编号f5)对氨氮降解效果最好，36h时降解率为 99%οf5菌株的营养琼脂平板的照片如图1所示，经生理生化方法初步鉴定，菌株K为芽孢杆菌属，其生物学特性:革兰氏阳性、好氧杆状菌，生长温度15°C?40°C。菌落圆形，边缘整齐，乳白色，菌落光滑平整，较湿润。2、简单芽孢杆菌16S rRNA序列测定 以菌株f5的DNA为模板，16S rRNA通用引物为引物进行扩增，扩增片段进行序列测定。测序结果用Blast软件与GenBank中相关属种的16S rRNA序列进行比对，显示该菌株16SrRNA序列与GenBank基因库中芽孢杆菌属中的Bacillus simlpe饱16s rRNA序列同源度最高，同源率达到99%。通过DNAMAN6.0对Genbank中已有的芽孢杆菌属的16S rRNA序列进行遗传进化分析，结果显示，菌株f5 16S rWA与Bacillus 尊同源性最高，判定该菌株为芽孢杆菌属的简单芽孢杆菌。将筛选到的菌株f5进行菌种保藏，保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC);地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期:2014年11月25日；简单芽孢杆菌也CiWys si尊的保藏编号为CGMCCN0.10051。实施例2、简单芽孢杆菌的培养 将f5单菌落接种于LB种子培养基中，37°C 180 rpm培养约20h至菌体浓度为10s CFU/mL ;按1%接种量转接至发酵培养基，所述发酵培养基配方为:玉米浆lg，葡萄糖3 g，酵母膏0.5 g，KH2PO4 0.1 g，K2HPO4 0.15 g，( NH4) 2S04 0.5 g，NaCl 0.1 g，MgSO4.7H20 0.05 g，H2O 100 mL，pH 7.0 ?7.2。37°C 180rpm培养24h，镜检芽孢成熟率>90% ;采用营养琼脂平板计数，获得发酵液中菌量 >150 X 10s CFU/mL。实施例3、简单芽孢杆菌f5对有机物的降解测定 试验在水族缸中进行，每个加入10 L养殖水(粉碎的虾饲料20 g/L)。试验分为对照组、试验组，每组3个平行。试验组加入简单芽孢杆菌菌剂ImL (菌剂中简单芽孢杆菌的浓度为10s CFU/mL)，对照组不加菌剂。试验过程中定期搅动水体，室温条件下连续观察7d，定时取样测定水体的COD、氨氮浓度。结果如图2和3所示，菌株f5对养殖水C0D、氨氮具有明显的去除作用。试验期间，水体C0D、氨氮均呈不断降低趋势，第7d时降解率分别为53.3%,65.3%、，与对照组相比差异显著(K0.05)。以上实施例仅用以说明本专利技术的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本专利技术进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本专利技术所要求保护的技术方案的精神和范围。【主权项】1.一株简单芽孢杆菌f5，其特征在于:其分类命名为简单芽孢杆菌Bacillus simple,其保藏编号为CGMCC N0.10051。2.根据权利要求1所述的简单芽孢杆菌f5，其特征在于:所述简单芽孢杆菌f5革兰氏阳性，菌落圆形，边缘整齐，乳白色，菌落光滑平整，生长温度15 °C?40 °C。3.权利要求1所述的简单芽孢杆菌f5的培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株简单芽孢杆菌f5，其特征在于：其分类命名为简单芽孢杆菌Bacillus simple，其保藏编号为CGMCC No. 10051。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王娇，李慧芬，张明俊，王晓伟，赵志强，
申请(专利权)人：青岛根源生物技术集团有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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