一种唾液保护剂制造技术

本发明专利技术涉及生物学领域，具体涉及一种唾液保护剂及其制备与应用。每1000ml所述唾液保护剂中含有：三羟甲基氨基甲烷10~50mmol；乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠0.5~20mmol；硫酸铵200~1000mmol；葡萄糖1~50mmol。将唾液保存到本发明专利技术的唾液保护剂中，前60天几乎没有变化，DNA仍然完整，没有明显的降解；6个月后仍然如此，12个月后，DNA完整性依然如故。本发明专利技术的唾液保护剂极为有效的保存了唾液样品，保证了样品的完整性和长期的稳定性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物学领域，具体涉及一种唾液保护剂及其制备与应用。
技术介绍
在生物学领域，血液等体液样本的DNA提取在分子生物学和基因组学及医学检测等领域占有重要的地位。通常用于PCR扩增或检测的DNA是从抗凝血液中提取的，但血液保存长时间容易结块，另外采集血液也会对生物体造成一定的创伤并且还要专业人士才能安全采集血液，因此血液样品DNA来源限制了其大范围的应用。人体唾液是含有人体细胞的体液，采集简单方便，高效同时又无创伤，是理想的体液样本，适合大范围取样。但唾液成分主要有水、口腔黏膜细胞、细菌、唾液淀粉酶、粘性糖等物质，成分复杂，不易长时间保存。防止其腐败，保存其含的DNA完整性显得尤为重要。现有技术主要是通过棉签擦拭口腔来获得口腔黏膜细胞，这种方式得到的样品保存时间短，样品量少，需要低温保存，这位采样，保存带来不便。目前的唾液保存试剂主要是：将唾液和保护剂按照一定比例混匀，保存。然后在不同时间节点提取唾液DNA，质检DNA，检测其浓度，纯度和完整性。现在市场上的保护剂成分复杂，有的含有镁离子——核酸酶激活剂，不利于DNA的稳定性和完整性的保存；有的含有蛋白质变性剂如异硫氰酸胍——使得蛋白质变性，可以抑制酶的活性，但同时也裂解了细胞，释放DNA，使得DNA处于游离状态，不利于DNA的完整性保存。本专利技术保护了细胞的完整性，保存一定时间的细胞仍然可以复活，可以扩大培养；保护DNA长期不被降解，保证了DNA的完整性。而用于基因检测的DNA首先应保证纯度和完整性，如果DNA发生断裂等损伤，则会直接影响到PCR等后续试验，进而影响分析结果的准确性；另外唾液保存液作为唾液DNA的保存介质，也存在被氧化和微生物污染的风险。这些微生物还可能促进DNA加速降解，破坏DNA的完整性，同时唾液被微生物污染后，导致由此提取的DNA不纯，而最终导致DNA的完整性和纯度不能得到保证，进而导致后续试验的可信度大大降低。综上，研究开发一种保存效果好、保存方便的人体唾液样本保存用保存液具有十分重要的意义。
技术实现思路
针对现有技术中所存在的缺陷，本专利技术的目的在于，提供一种唾液保护剂，以长时间地保存所采集到的唾液样本。本专利技术的另一目的在于，提供所述唾液保护剂的制备方法及其应用。本专利技术的再一目的在于，提供一种延长唾液保存时间的方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术的第一方面提供了一种唾液保护剂，每1000ml所述唾液保护剂中含有：三羟甲基氨基甲烷10～50mmol；乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠0.5～20mmol；硫酸铵200～1000mmol；葡萄糖1～50mmol。优选地，每1000ml所述唾液保护剂中含有：三羟甲基氨基甲烷20mmol；乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠2mmol；硫酸铵500mmol；葡萄糖10mmol。当乙二酸乙胺和硫酸铵的浓度高于最大值时，会影响唾液保存效果。具体的，所保存的唾液样本在提取DNA后，在做PCR时会影响PCR扩增效率。本专利技术第二方面提供了一种制备所述唾液保护剂的方法，包括步骤：称取各组分，加入至去离子水中，溶解即可。本专利技术的第三方面提供了所述唾液保护剂在保存唾液中的用途。优选地，所述用途为将所述唾液保护剂用于保存唾液样本以延长唾液样本的保存时间。本专利技术的第四方面提供了一种保存唾液样本的方法，包括步骤：将采集的唾液样本放入所述唾液保护剂中保存。本专利技术的第五方面还提供了一种延长唾液样本保存时间的方法，包括步骤：将采集的唾液样本放入前述唾液保护剂中保存。优选地，保存时，将采集的唾液样本与所述唾液保护剂以体积比1:1混合即可。本专利技术的有益效果在于：(1)采用本专利技术的唾液保护剂保存唾液样本，保护剂成分可迅速渗透进细胞中，固定细胞，保存细胞活性，并极速抑制核酸酶的活性保证核酸的完整性。(2)采用本专利技术唾液保护剂来保存唾液，可将保护条件范围拓宽，室温保存可长达12个月以上，低温可长期保存，42℃可保存72小时以上。(3)将唾液保存到本专利技术的唾液保护剂中，前60天几乎没有变化，DNA仍然完整，没有明显的降解；6个月后仍然如此，12个月后，DNA完整性依然如故。本专利技术的唾液保护剂极为有效的保存了唾液样品，保证了样品的完整性和长期的稳定性。附图说明图1：不同时间节点提取的DNA电泳图谱。图2：PCR扩增后电泳图及扩增结果。具体实施方式在进一步描述本专利技术具体实施方式之前，应理解，本专利技术的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULARCLONING：ALABORATORYMANUAL，Secondedition，ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989andThirdedition，2001；Ausubel等，CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY，JohnWiley&Sons，NewYork，1987andperiodicupdates；theseriesMETHODSINENZYMOLOGY，AcademicPress，SanDiego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTUREANDFUNCTION，Thirdedition，AcademicPress，SanDiego，1998；METHODSINENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.WassarmanandA.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，SanDiego，1999；和METHODSINMOLECULARBIOLOGY，Vol.119，Chromatin<本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种唾液保护剂，每1000ml所述唾液保护剂中含有：三羟甲基氨基甲烷10～50mmol；乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠0.5～20mmol；硫酸铵200～1000mmol；葡萄糖1～50mmol。

【技术特征摘要】
1.一种唾液保护剂，每1000ml所述唾液保护剂中含有：三羟甲基氨基甲烷10～50mmol；
乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠0.5～20mmol；硫酸铵200～1000mmol；葡萄糖1～50
mmol。
2.根据权利要求1所述的唾液保护剂，其特征在于，每1000ml所述唾液保护剂中含有：三
羟甲基氨基甲烷20mmol；乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠2mmol；硫酸铵500mmol；
葡萄糖10mmol。
3.一种制备如权利要求1或2所述唾液保护剂的方法，包括步骤：称取各组分，加入至去离
子水中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李胜彬，于丹，宋泽世，胡秋萍，张祥林，
申请(专利权)人：上海美吉生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31