一种快速制备高纯度磺达肝癸钠的精制方法技术

一种快速制备高纯度磺达肝癸钠的精制方法，本发明专利技术提供一种生产成本低，操作简单并且能达到高纯度和高回收率的制备方法。通过高效液相色谱制备法，可以将含量为50％以上的磺达肝癸钠粗品经过一次制备达到99％以上纯度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
，涉及一种药物的精制方法，具体涉及一种制备高纯度 磺达肝癸钠的精制方法。
技术介绍
磺达肝癸钠是由法国赛诺菲研制的一种抗凝药，是人工合成的、第一个抗凝血酶 依赖的Xa因子的间接抑制剂。其抗血栓活性是抗凝血酶III(ATIII)介导的对因子Xa选择 性抑制的结果。通过选择性结合于ATIII，磺达肝癸钠增强了（大约300倍）ATIII对因子Xa 原来的中和活性。而对因子Xa的中和作用打断了凝血级联反应，并抑制了凝血酶的形成和 血栓的增大。磺达肝癸钠不能灭活凝血酶（活化因子II)，并对血小板没有作用。它的研制 成功是人类抗栓领域新的里程碑。 磺达肝癸钠是一种肝素五糖类药物，其英文名为Fondaparinuxsodium， 中文化学名称为：甲基〇-(2_脱氧-6-0-磺酸基-2-磺酰胺基-a-D-吡喃葡萄 糖）_(1 - 4)-0-(P-D-吡喃葡萄糖醛酸）-(1 - 4)-0-(2_脱氧-3,6-0-二磺酸 基-2-磺酰胺基-a-D-吡喃葡萄糖）-(1 - 4) -0- (2-0-磺酸基-a-L-吡喃艾杜糖醛 酸）_ (1 - 4) -2-脱氧-6-0-磺酸基-2-磺酰胺基-a-D-吡喃葡萄糖苷十钠盐，化学结构 式如下： 磺达肝癸钠是纯化学合成，合成路线长达五十多步，合成难度大。得到的磺达肝癸 钠粗品含量在60%~70%，杂质种类多。有些杂质性质跟磺达肝癸钠的性质非常相似，很 难通过普通的分离方法一次将其提纯至99%以上。目前文献报道的均为经离子交换柱层析 进行精制。 美国专利20050020536公开了一种以琼脂糖凝胶为基质的强阴离子交换层析柱 (QSepharoseFastFlow)分离纯化磺达肝癸钠的方法，该方法以氯化钠水溶液为流动相 进行洗脱，得到90%以上的纯度，再经过活性炭吸附达到98%以上纯度。 经过分析我们发现，以上分离方法主要存在以下几个问题： 1.采用活性炭吸附产品损失比较大，对于相对保留时间为1. 2的后杂不容易除 去； 2.分离大量的磺达肝癸钠粗品时，需要用到大量的价格昂贵的柱层析介质，生产 成本高； 3.磺达肝癸钠杂质性质与磺达肝癸钠性质相近，点板检测无法判断，过每根柱子 均需要液相监测，操作更加复杂，而且制备时间较长。 为了有效解决上述方法存在的问题，本专利技术研究出一种快速制备高纯度磺达肝癸 钠的精制方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种制备高纯度磺达肝癸钠的精制方法。该方法具有生产 成本低，操作简单的特点，制备得到的磺达肝癸钠具有纯度高和回收率高的优点。 本专利技术通过高效液相色谱制备法，可以将含量为50%以上的磺达肝癸钠粗品经过 一次制备达到99%以上纯度。 磺达肝癸钠是一种戊聚糖多钠盐，难溶于有机溶剂，不能采用一般的C18反相柱 制备分离。SOURCE系列强碱型阴离子树脂，属于高分辨IEC填料，相对价格便宜，其最大特 点是高速低反压，适合于在任何高、中、低压色谱系统中使用，非常适于精细分离纯化各种 生化物质。 具体的，本专利技术所述的磺达肝癸钠的制备方法，包括以下步骤： (1)将磺达肝癸钠粗品溶于纯化水中，浓度为0. 5~lg/mL; (2)用高效液相色谱系统梯度洗脱制备磺达肝癸钠，收集纯度较高的产品； 制备液相：waters制备纯化仪；流速：14mL/min;紫外波长：210nm;进样量：5mL; 流动相A、B进行梯度洗脱，流动相A:氯化钠溶液，流动相B:注射用水，按照下述方式进行 梯度洗脱，收集46.OOmin~49.OOmin目标组分； (3)浓缩，脱盐，干燥得到高纯度的磺达肝癸钠。 其中，磺达肝癸钠粗品属于现有产品，可以在市场上购买到，其纯度大于50%。 其中，流动相A为1~3mol/L氯化钠水溶液，优选为2mol/L氯化钠水溶液。 其中，高效液相色谱系统所用色谱柱为GEHealthcare公司所生产的玻璃（GL)色 谱柱，规格为10X100mm~75X500mm;以强碱型阴离子树脂为固定相，优选SOURCE系列； 高效液相色谱系统所用色谱柱填料粒度为3~30ym，粒径越小越有利于产品分 离，但粒径越小系统压力就会越大，优选为粒径范围为10~15ym。 其中，步骤3所述浓缩，脱盐，干燥的具体过程为：将所收集的组分在温度 40±2°C，真空度多0.09MPa的条件下，减压浓缩至氯化钠的饱和溶液，直接上样至葡聚糖 凝胶G-25层析柱脱盐，将所收集产品在温度40±2°C，真空度多0. 09MPa的条件下，减压浓 缩至干。 优选的，本专利技术所述的磺达肝癸钠的制备方法，包括以下操作步骤： (1)取磺达肝癸钠粗品溶于纯化水，配制成lg/mL的水溶液， (2)用高效液相色谱系统梯度洗脱制备磺达肝癸钠，色谱条件如下：GE玻璃色谱柱，色谱柱的规格为50X250mm或lOxlOOmm，固定相为Source15Q， 填料粒径15um，流动相A为1~3mol/L氯化钠水溶液，流动相B为注射用水，流速为14ml/ mim，检测波长为210nm。进样量5mL，按下表洗脱，收集46.OOmin~49.OOmin目标组分； (3)所收集的组分在温度40±2°C，真空度彡0. 09MPa，减压浓缩至氯化钠的饱 和溶液，直接上样至葡聚糖凝胶G-25层析柱脱盐；所收集产品在温度40±2°C，真空度 彡0. 09MPa，减压浓缩至干，得到白色固体，即得高纯度磺达肝癸钠。 本专利技术所述的磺达肝癸钠的制备方法是经过筛选得到的，筛选过程如下：GEQ和DIONEXCarboPac两种色谱柱的对比实验具体如下： 色谱柱：GESourceQ10/100;制备液相：waters制备纯化仪；流速：3. 8ml/min; 紫外波长：210nm;进样量：20mg;流动相A、B进行梯度洗脱（流动相A:117g/L氯化钠溶液， 流动相B:注射用水），梯度如下： GE Q色谱柱制备纯化谱图如图1所示： 色谱柱：DI0NEXCarboPacPA1;制备液相：waters制备纯化仪；流速：5ml/min;紫 外波长：210nm;进样量：20mg;流动相A、B进行梯度洗脱（流动相A:117g/L氯化钠溶液，流 动相B:注射用水），梯度如下： 通过对比用GEQ和DIONEXCarboPac两种色谱柱制备N1的谱图发现，GEQ色谱 柱分离产品峰之前的杂质能力强于分离产品峰之后的杂质，而DIONEXCarboPac色谱柱分 离产品峰之后的杂质能力强于分离产品峰之前的杂质。由于N1中大量的杂质主要在产品 峰之前，因此选择GEQ色谱柱进行纯化效果更好。 此外，DIONEXCarboPac色谱柱的填料规格比较单一，难以实现放大；而GEQ色谱 柱的填料规格种类较多，符合进一步放大生产的需求。因此，选择GEQ色谱柱更为合理。 对本专利技术所述名词作进一步的解释：GE(GL)色谱柱：GEHealthcare公司所生产的玻璃（GL)色谱柱，规格为 10X100mm~75X500mm; 固定相为Source15Q:Source为高速低反压介质（填料），为碱型阴离子树脂，粒 径为15um 本专利技术采用制备液相色谱系统，经过制备分离得到纯度大于99%的产品。本专利技术 的制备方法具有工艺简单，生产成本低，产品质量稳定等特点，同本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备高纯度磺达肝癸钠的精制方法,其特征在于，包括如下步骤：(1)将磺达肝癸钠粗品溶于纯化水中，浓度为0.5～1g/mL；(2)用高效液相色谱系统梯度洗脱制备磺达肝癸钠，收集纯度较高的产品；制备液相：waters制备纯化仪；流速：14mL/min；紫外波长：210nm；进样量：5mL；流动相A、B进行梯度洗脱，流动相A：氯化钠溶液，流动相B：注射用水，收集46.00min～49.00min目标组分；(3)浓缩，脱盐，干燥得到高纯度的磺达肝癸钠。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：姚小青，孙长海，韩建，干浩，韩芙蓉，闫建和，袁海新，侯文峰，周喜泽，孙福亮，
申请(专利权)人：天津红日药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12