甘油的磷酸化物的制造方法技术

本发明专利技术的主要的课题在于，提供一种以高效率将甘油磷酸化的方法。所述课题通过在磷酸基供给体的存在下使含有序列(1)所示的活性中心且具有催化甘油的磷酸化反应的活性的磷酸化酶、或含有序列号2所示的氨基酸序列且具有催化甘油的磷酸化反应的活性的磷酸化酶与甘油反应来解决。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术设及一种W高效率制造甘油的憐酸化物的方法。
技术介绍
甘油的憐酸化物由于作为化妆品原料或用于制造医药品的中间体等利用价值高， 因此，一直在研究有效地取得甘油的憐酸化物的方法。作为实现有效的憐酸化的一种方法， 可列举例如使用催化甘油的憐酸化的憐酸化酶的方法。关于憐酸化酶，迄今为止已知有众 多的种类，源自多种多样的生物种的憐酸化酶被发现（非专利文献1)。但是，即使使用运样 存在许多的憐酸化酶的任一种，也并不提高憐酸化反应的效率。另外，在得到甘油的憐酸化 物的反应中，有必要在憐酸基供给体的存在下使甘油与憐酸化酶反应。但是，由于目前所使 用的憐酸化酶作为憐酸基供给体需要高价的ATP(S憐酸腺武），因此，存在花费制造成本 的问题。另一方面，作为廉价的憐酸基供给体，可例示聚憐酸，但使用其催化甘油的憐酸化 反应的酶不为人知（例如参照非专利文献2)。从运样的背景出发，迫切期望有效地且W更 低成本制造工业上利用价值高的甘油的憐酸化物的方法。 现有技术文献 非专利文献 阳0化]非专利文献 1:CellMolLifeSci. 1998Aug;54做：833-50非专利文献 2:Protein化g. 1998Dec :1219-27.
技术实现思路
专利技术要解决的课题 本专利技术的主要目的在于，提供一种可W实现高的憐酸化效率的甘油的憐酸化方 法。 用于解决课题的手段 本专利技术人等为了解决上述课题进行了潜屯、研究，结果发现：通过使用源自特定的 微生物的憐酸化酶，显著地提高甘油的憐酸化效率。另外发现：根据运样的憐酸化酶，在 使用聚憐酸之类的廉价的憐酸基供给体进行憐酸化反应的情况下，也可有效地得到憐酸化 物。进而，本专利技术人等特定了在由所述特定的微生物得到的憐酸化酶中担负活性的氨基酸 序列。本专利技术是基于上述见解进一步重复进行了改良的结果而完成的。 目P，本专利技术提供下述实施方式的憐酸化方法。 项1. 一种甘油的憐酸化物的制造方法，其包括在憐酸基供给体的存在下使憐酸 化酶与甘油作用的工序， 所述憐酸化酶为分类A的酸性憐酸酶，且由含有下述序列（1)所示的氨基酸序列 作为活性中屯、的多肤构成： -X-X"-X"-Pr〇-Ser-Gly-His-X"- (1) 其中，公表示甘氨酸、丙氨酸或苯丙氨酸，X2表示任意的氨基酸，X3表示酪氨酸或色氨酸，X4表示苏氨酸、丝氨酸或丙氨酸， 且公为苯丙氨酸的情况下，X4为苏氨酸或丝氨酸。 项2、根据项1所述的制造方法，其中，序列（1)中的公及X4为W下的（A1)~（A8) 中的任一者： (Al)Xi为甘氨酸、且X4为苏氨酸； (A2)Xi为甘氨酸、且X4为丝氨酸； (A3)公为丙氨酸、且X4为丝氨酸； (A4)Xi为丙氨酸、且X4为苏氨酸； 阳02引 （AW公为丙氨酸、且X%丙氨酸； (A6)Xi为甘氨酸、且X4为丙氨酸； (A7)Xi为苯丙氨酸、且X4为苏氨酸；[002引 （A8)Xi为苯丙氨酸、且X4为丝氨酸。 项3、根据项1或2所述的制造方法，其中，在序列（1)中，X2为丝氨酸、丙氨酸或 天冬氨酸。 项4、根据项1或3中所述的制造方法，其中，序列（1)中的X\x2、x3及X4为W下 的度1)~度11)中的任一者： 度1)公为甘氨酸、X2为丝氨酸、X3为酪氨酸、且X4为苏氨酸； 阳03引 腿)xi为甘氨酸、X2为丙氨酸、X%酪氨酸、且X4为苏氨酸；[003引 度3)公为甘氨酸、X2为丝氨酸、X3为酪氨酸、且X4为丝氨酸； (B4)XI为甘氨酸、X2为天冬氨酸、X%酪氨酸、且X4为苏氨酸； (B6)Xi为丙氨酸、X2为丝氨酸、X%酪氨酸、且X4为苏氨酸； 阳037] (B7)Xi为丙氨酸、X2为丝氨酸、X%酪氨酸、且X4为丙氨酸； 阳03引 度8)Xi为甘氨酸、X2为丝氨酸、X3为酪氨酸、且X4为丙氨酸； 阳039] 度9)Xi为苯丙氨酸、X2为丝氨酸、X%酪氨酸、且X4为苏氨酸； 阳040] 度10)Xi为苯丙氨酸、X2为丝氨酸、X3为酪氨酸、且X4为丝氨酸； 度11)公为甘氨酸、X2为丝氨酸、X3为色氨酸、且X4为丝氨酸。 项5、根据项1~4中任一项所述的制造方法，其中，在序列（1)所示的氨基酸序列 中，第7位的组氨酸化is)残基从被用作憐酸化酶的多肤的N末端数位于第120~160位。 项6、根据项1~5中任一项所述的制造方法，其中，所述憐酸化酶进一步由下述 (I)或（II)所示的多肤构成， 柳44] 可列举（II)所示的多肤， W45] (I)在比编码所述序列（1)所示的活性中屯、的氨基酸序列部位更靠N末端侧具 有序列号2所示的氨基酸序列的多肤、 (II)在比编码所述序列（1)所示的活性中屯、的氨基酸序列部位更靠N末端侧含 有在序列号2所示的氨基酸序列中1个或数个氨基酸发生了替换、缺失、插入或添加的氨基 酸序列、且与所述（I)所示的多肤相比具有同等W上的催化甘油的憐酸化反应的活性的 多肤。 项7、根据项6所述的制造方法，其中，序列号2所示的氨基酸序列中的第1位的氨 基酸残基配置于从被用作憐酸化酶的多肤的N末端侧数第5~40位。 项8、根据项1~5中任一项所述的制造方法，其中，所述憐酸化酶进一步由下述 (III)~（VI)中的任一者所示的多肤构成， W例 （III)在序列（1)所不的氨基酸序列的N末端侧具有序列号26~32及106~110 中的任一者所示的氨基酸序列的多肤、 (IV)在序列（1)所示的氨基酸序列的N末端侦恰有在序列号26~32及106~ 110中的任一者所示的氨基酸序列中1个或多个氨基酸发生了替换、缺失、插入或添加的氨 基酸序列、且与（III)所示的各自对应的多肤相比具有同等W上的催化甘油的憐酸化反应 的活性的多肤、 (V)在序列（1)所示的氨基酸序列的C末端侧具有序列号33~39及111~115 中的任一者所示的氨基酸序列的多肤、W及 (VI)在序列（1)所示的氨基酸序列的C末端侧含有在序列号33~39及111~ 115中的任一者所示的氨基酸序列中1个或多个氨基酸发生了替换、缺失、插入或添加的氨 基酸序列、且与（V)所示的对应的多肤相比具有同等W上的催化甘油的憐酸化反应的活 性的多肤。[005引项9、根据项1~8中任一项所述的制造方法，其中， 所述憐酸化酶由下述（W)或（W)所示的多肤构成， 阳化5] (W)由序列号3~9、13、104、105、116、117、及119~121中的任一者所示的氨 基酸序列构成的多肤、 (W)由在序列号3~9、13、104、105、116、117、及119~121中的任一者所示的 氨基酸序列中、在所述序列（1)所示的氨基酸序列构成的活性中屯、W外的区域的1个或多 个氨基酸发生了替换、缺失、插入或添加的氨基酸序列构成、且与（W)所示的对应的多肤 相比具有同等W上的催化甘油的憐酸化反应的活性的多肤。 阳057] 项10、一种甘油的憐酸化物的制造方法，其包括在憐酸基供给体的存在下使憐酸 化酶与甘油作用的工序， 所述憐酸化酶为分类A的酸性憐酸酶，且由下述（i)或（ii)所示的多肤构成， (i)具有序列号2所示的氨基酸序列、且具有催化甘油的憐酸化反应的活性的多 肤、 (ii)具有在序列号2所示的氨基酸序列中1个或多个氨基酸发生了替换、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甘油的磷酸化物的制造方法，其特征在于，包括在磷酸基供给体的存在下使磷酸化酶与甘油作用的工序，所述磷酸化酶为分类A的酸性磷酸酶，且由含有下述序列(1)所示的氨基酸序列作为活性中心的多肽构成：‑X1‑X2‑X3‑Pro‑Ser‑Gly‑His‑X4‑   (1)其中，X1表示甘氨酸、丙氨酸或苯丙氨酸，X2表示任意的氨基酸，X3表示酪氨酸或色氨酸，X4表示苏氨酸、丝氨酸或丙氨酸，且X1为苯丙氨酸的情况下，X4为苏氨酸或丝氨酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：岩田英之，田中寿枝，
申请(专利权)人：株式会社耐热性酵素研究所，
类型：发明
国别省市：日本;JP