本发明专利技术提供了一种多粘类芽孢杆菌，其保藏号为CCTCC M 2015298，命名为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)WK-3，并进一步提供了多粘类芽孢杆菌WK-3的筛选方法及在抑制水稻纹枯病菌、西瓜枯萎病菌、核桃根腐病菌中的应用，以及一种多粘类芽孢杆菌WK-3菌剂。多粘类芽孢杆菌WK-3是一株水稻内生菌株，对人、畜、农作物安全，对环境友好,具有较广的抑菌谱，对常见的土传病原菌，如水稻纹枯病菌、西瓜枯萎病菌、核桃根腐病菌等菌丝生长均具有较好的抑菌作用，抑菌率分别达到85.4％、81.8％、73.9％以上，对水稻纹枯病菌菌丝生长具有明显的抑制作用，造成菌丝畸形，进一步制备成的菌剂对水稻纹枯病具有显著的防治效果，生产周期短，在植物病害的生物防治中具有十分广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物病害生物防治
，特别是涉及一种多粘类芽孢杆菌及其应 用。
技术介绍
水稻纹枯病，即Rice sheath blight,简称RSB，是由立枯丝核菌，即Rhizoctonia solani，侵染引起，与稻瘟病、白叶枯病并称水稻"三大病害"。由于该病发生面积广、流行频 率高，其所导致的产量损失往往超过稻瘟病，成为水稻稳产高产的严重障碍。1934年植物病 理学家魏景超在中国首次发现这种病害。1975年水稻纹枯病被列入全国防治对象成为水 稻三大病害之一。1995年在荷兰召开了第二届水稻纹枯病会议重点讨论了纹枯病病原菌 的病理学、分类学、生态学和病害的控制，这说明水稻纹枯病己引起人们足够的重视。20世 纪50年代前的一段时期此病曾一度被称为"东方病害"，目前该病己在亚、非、欧、美各洲水 稻种植国家普遍发生，以东南亚稻区受害最重。 近年来，随着矮杆品种和杂交水稻的大面积推广及旱直播栽培技术的变革，水稻 纹枯病发生面积逐年上升趋势，现已成为我国华南以及长江中下游水稻产区的重要病害。 该病害是一种高温高湿型病害，在水稻整个生育期均可发生，以分孽期和抽穗期危害最重。 发病部位主要在叶鞘和叶片，严重时可伸入茎杆向上扩展至穗部，最典型的症状是云纹状 病斑和菌核。植株发病后叶片枯死，结实率下降，一般减产10% -30%，严重时达到80%，甚 至绝收。 由于纹枯病菌腐生能力强、寄主范围广，至今国内外尚未发现对该病的高抗品种。 该病原菌对化学药剂的抗性逐年增强，药剂用量不断提高。因防治纹枯病而长期大量使用 农药造成自然生态环境污染及稻米农药残留量增加的问题也越来越突出。例如，该病菌对 国内的主要防治药剂一一井闪霉素已产生明显的抗药性，每季用药次数已从20年前2次增 加到现在的3-5次，用药量也从I. 5kg/hm2增加到4. 5-6. Okg/hm2。水稻纹枯病是一种土传 病害，其病原菌对寄主的寄生专化性不强，利用有益微生物进行生物防治既经济有效又无 副作用。因此，寻找防治水稻纹枯病的拮抗微生物具有重要意义。 利用生防菌株防治植物病害在国内外均有报道，至今美国已有4种芽孢杆菌制备 的生防菌剂获得了生产许可证；经检索，申请者在现有的专利和非专利文献中检索到一些 关于多粘类芽孢杆菌的文献报道和专利。例如，专利申请号为2012103480675公开了"一株 根际拮抗细菌多粘类芽孢杆菌YC0136及其应用"，利用多粘类芽孢杆菌YC0136防治烟草黑 胫病、促进烟草生长。专利申请号为2013106601996公开了"一株防治十字花科根肿病的多 粘芽孢杆菌N3-4及其应用"，利用多粘类芽孢杆菌N3-4制备水剂或可湿性粉剂，用于防治 十字花科根肿病。专利申请号为2013105906361公开了 "一种多粘类芽孢杆菌和井闪霉素 复配组合物防治油茶炭疽病的用途"，利用多粘类芽孢杆菌和井闪霉素复配组合物防治油 茶炭疽病。但目前并没有对水稻纹枯病菌有抑制效果的多粘类芽孢杆菌的报道。
技术实现思路
为改进现有防治技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种多粘类芽孢杆菌及其应 用，该甲基营养型芽孢杆菌对水稻纹枯病菌、西瓜枯萎病菌、核桃根腐病菌等多种病原菌具 有显著的拮抗作用。 本专利技术第一方面提供了一种多粘类芽孢杆菌，其于2015年5月15日保藏于武 汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2015298,命名为多粘类芽孢杆菌 (Paenibacillus polymyxa)WK-3〇 多粘类芽孢杆菌WK-3的菌学特性： a、形态特征：WK-3为革兰氏阳性菌，呈杆状，芽孢椭圆，在LB平板上形成的菌落成 圆形，边齐，隆起，湿润，有光泽，半透明，乳白色。 b、生理生化特征：水解淀粉，周生鞭毛，氧化酶阴性，接触酶阳性。 多粘类芽孢杆菌WK-3的16S rDNA序列如序列表SEQ ID No. 1所示，与Genbank 上已报道序列进行比对，最终确定菌株WK-3为多粘类芽孢杆菌。 本专利技术第二方面提供了多粘类芽孢杆菌WK-3在抑制水稻纹枯病菌、西瓜枯萎病 菌、核桃根腐病菌中的应用。 本专利技术第三方面提供了多粘类芽孢杆菌WK-3的筛选方法，具体步骤包括： (1)将水稻植株的茎杆培养后用无菌水配制为悬浮液，涂平板后培养，选取单菌 落； (2)用平板对峙法从步骤（1)选取的单菌落中筛选出对水稻纹枯病菌有抑菌作用 的菌株。 本专利技术第四方面提供了一种多粘类芽孢杆菌WK-3菌剂，所述菌剂为多粘类芽孢 杆菌WK-3经活化、种子培养、发酵后得到的菌剂。 本专利技术的有益效果是： (1)多粘类芽孢杆菌WK-3是一株水稻内生菌株，对人、畜、农作物安全，对环境友 好。 (2)多粘类芽孢杆菌WK-3具有较广的抑菌谱，对常见的土传病原菌，如水稻纹 枯病菌（Rhizoctonia solani)、西瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum)、核桃根腐病菌 (Fusarium solani)等菌丝生长均具有较好的抑菌作用，抑菌率分别达到85. 4%、81. 8%、 73. 9%以上，对水稻纹枯病菌菌丝生长具有明显的抑制作用，造成菌丝溶解、中间断裂、缢 缩，原生质浓缩等致畸形。 (3)多粘类芽孢杆菌WK-3对水稻纹枯病具有显著的防治效果，生产周期短，使用 简单，在植物病害的生物防治中具有十分广阔的应用前景。【附图说明】 图1为多粘类芽孢杆菌WK-3在LB固体培养基上生长的菌落形态； 图2为多粘类芽孢杆菌WK-3对水稻纹枯病菌的拮抗作用示意图； 图3为多粘类芽孢杆菌WK-3对西瓜枯萎病菌的拮抗作用示意图； 图4为多粘类芽孢杆菌WK-3对核桃根腐病菌的拮抗作用示意图； 图5为多粘类芽孢杆菌WK-3对水稻纹枯病菌菌丝生长的致畸作用示意图，其中， A为未经多粘类芽孢杆菌WK-3处理的对照组，B为经多粘类芽孢杆菌WK-3处理的实验组。【具体实施方式】 本专利技术第一方面提供了一种多粘类芽孢杆菌，其于2015年5月15日保藏于武 汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2015298,命名为多粘类芽孢杆菌 (Paenibacillus polymyxa)WK-3〇 本专利技术第二方面提供了多粘类芽孢杆菌WK-3在抑制水稻纹枯病菌、西瓜枯萎病 菌、核桃根腐病菌中的应用。 本专利技术第三方面提供了多粘类芽孢杆菌WK-3的筛选方法，具体步骤包括： (1)将水稻植株的茎杆培养后用无菌水配制为悬浮液，涂平板后培养，选取单菌 落； (2)用平板对峙法从步骤（1)选取的单菌落中筛选出对水稻纹枯病菌有抑菌作用 的菌株。 优选的，步骤（1)所述水稻植株的培养为取靠近根部的茎杆灭菌后于28-30°C下 振荡培养2-3天，加无菌水配制为悬浮液后涂布于LB平板，28-30°C下培养23-26h，挑取单 菌落；步骤（2)所述平板对峙法具体步骤为：将水稻纹枯病菌接种在PDA平板中心，将步骤 (1)所得单菌落呈三角状对称接入PDA平板，距离中心l-3cm，26°C下培养，得到有抑菌作用 菌株，转入LB平板上培养保存。 本专利技术第四方面提供了一种多粘类芽孢杆菌WK-3菌剂，所述菌剂为多粘类芽孢 杆菌WK-3经活化、种子培养、发酵后得到的菌剂。 优选的，所述活化为将多粘类芽孢杆菌WK本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种多粘类芽孢杆菌，其特征在于：其保藏号为CCTCC M 2015298，命名为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)WK‑3。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙正祥，周燚，
申请(专利权)人：长江大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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